Brucelosis B. melitensis sp. mas frecuente, Mediterráneo, Golfo de Arabia, India, Asia, Latinoamérica y regiones de México B. abortus  distribución mundial.

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1 Brucelosis B. melitensis sp. mas frecuente, Mediterráneo, Golfo de Arabia, India, Asia, Latinoamérica y regiones de México B. abortus  distribución mundial B. suis  Norteamérica, Latinoamérica(la más común en Argentina) B. canis  Latinoamérica, Europa Central y Japón

2 Brucelosis Distribución en Argentina
B. melitensis  ganado caprino, centro del país provincias del noroeste del país y precordillera de los Andes B. abortus y B. suis  ganado vacuno y porcino, región pampeana y mesopotámica 10000 a personas adquieren la infección anualmente ( 33 a 66 casos c/ hab ) Se estima que en Argentina están infectados el 18 % de los bovinos, entre el 40 y el 95 % de los caprinos (según la zona) y entre un 15 y 20 % del ganado porcino

3 Seroprevalencia en Argentina
Banco Central de Sangre (Corrientes). Período 1/1/ /7/2005 muestras de sangre Huddleson  > 1/40  exclusión del donante 494 muestras con serología + ( 1.4%)

4 Seroprevalencia en Argentina
Otros estudios: Período  0.94 % ( prevalencia a nivel Nacional) Banco de Sangre de la Ciudad de Buenos Aires, año 2002  0.46 al 0.60% No está legislado el Dx serológico específico para detectar B. canis Vacunación obligatoria de los animales susceptibles por resolución 375/82 de la Sec de Agricultura y Ganadería de la Nación

5 Brucella spp Gran capacidad de supervivencia en el ambiente
Sobreviven por muchos años en restos de animales congelados Sensibles al calor Sensibles al UV (5 min) Son sensibles a los desinfectantes

6 Supervivencia de Brucella en el medio ambiente

7 Brucelosis Infección en animales: cabras, ovejas, vacas, cerdos, perros, búfalos, renos. En animales preñados  prolifera en el útero y en las glándulas mamarias aborto Infección humana

8 Vías de transmisión contacto directo con tejidos de animales infectados ( piel erosionada, conjuntiva o mucosa nasal) Ingestión de carnes o productos lácteos contaminados Inhalación de organismos aerosolizados Inoculación ( vacunas vivas o muestras contaminadas ) a través de piel sana.

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10 Brucella spp Familia Brucellaceae
6 especies: B. abortus ( vacas) con 7 biovares B. melitensis ( cabras, ovejas) con 3 biovares B. suis (cerdos) con 5 biovares B. canis ( perros) B. ovis (carneros) B. neotomae ( ratas) B. ovis y B. neotomae no infección humana

11 Brucella :Taxonomía Clase: alfa-Proteobacteria Sub-Grupo alfa- 2
Orden: Rhizobiales Familia: Brucellaceae ( junto con Ochrobactrum y Micoplana)

12 Brucella spp: ubicación taxonómica

13 Factores de virulencia
LPS  determinantes antigénicos A y M, ausentes en B. canis. No exotoxinas Microorganismos intracelulares B. melitensis y B. suis  sp más virulentas B. abortus y B. canis  infección de comienzo insidioso, síntomas más leves y complicaciones menos severas

14 Fisiopatogenia Fagocitosis por PMN y evasión de los mecanismos de defensa Transporte a través del SRE ( hígado, bazo y MO) Multiplicación intracelular, muerte celular y liberación de los microorganismos. Diseminación hematógena y a órganos clave Manifestación clínica

15 Presentación clínica Período de incubación: 2 a 3 semanas (1 sem a 2 o 3 meses ) Comienzo de los síntomas ( abrupto o insidioso) Fiebre, sudoración nocturna, escalofríos, malestar. A menudo dolor de cabeza, mialgias y artrargias, linfoadenopatía, hepato y esplenomegalia, manifestaciones cutáneas

16 Presentación clínica Fiebre ondulante (cíclica) durante la tarde y noche por 2 a 3 semanas Puede evolucionar a la cronicidad Complicaciones que afectan varios sistemas( esquelético, SNC, TR, TGI, cardiovascular y piel).

17 Presentación clínica Complicación más frecuente compromiso articular y óseo Artritis y sacroileítis  infección aguda en pacientes pediátricos Espondilitis, OM vertebral y abscesos paravertebrales  infecciones crónicas en pacientes adultos

18 Presentación clínica Neurobrucelosis
Infecciones pulmonares  neumonitis, empiema y derrame pleural Compromiso hepático  granulomas caseosos ( o no ) y microabscesos

19 Presentación clínica Compromiso TGU  epididimitis, orquitis y granulomas renales, liquido amniótico y placenta de mujeres con brucelosis Compromiso cardiovascular  < 2% endocarditis de válvula nativa o protésica, miocarditis , pericarditis, embolias sépticas y aneurismas aórticos

20 Presentación clínica Compromiso cutáneo  poco frecuente, lesiones mucocutáneas ulcerativas y abscesos subcutáneos En el SRE  granulomas y abscesos Compromiso hematológico  leucopenia, pancitopenia, trombocitopenia severa, anemia hemolítica microangiopática ( transientes)

21 Cultivo y aislamiento Muestras de elección  sangre ( 70% +) y médula ósea ( 92% +) En infecciones complicadas  LCR, biopsias y tejidos ( hígado, bazo, abscesos) Procesamiento en cabina de seguridad biológica ( nivel 2 para muestras y 3 para cultivos y vacunas). Alerta médica al laboratorio ante la sospecha clínica de brucelosis

22 Cultivo y aislamiento Medio bifásico de Castañeda  4 a 6 semanas de incubación Medios para hemocultivos automatizados: BACTEC radiométrico, BACTEC no radiométrico, BACTALERT  3 semanas de incubación ( +  7 días ) En todos los casos subcultivos terminales a ciegas (  CO2) Métodos de lisis centrifugación   rendimiento  de elección para cultivo de MO

23 Identificación presuntiva
Cocobacilo muy pequeño Crecimiento lento en agar sangre o chocolate. 48 hs colonias puntiformes, no hemolíticas No crece en medios entéricos Ureasa rápida ( sp dependiente): B. abortus  1- 2 hs ( algunas cepas son negativas) B.suis y B. canis  0-30 min B. melitensis variable ( algunas cepas son negativas)

24 Identificación presuntiva
Metabolismo oxidativo Oxidasa positiva ( excepto B. canis) Catalasa positiva Historia de exposición ocupacional, viaje a países exóticos o ingestión de carnes no cocidas o lácteos no pasteurizados Muestras Sangre, MO, hueso, hígado

25 Medios de aislamiento primario
Agar Tripticasa soya, agar Brucella, agar infusión cerebro-corazón (con o sin el agregado de sangre) o agar chocolate. Incubar durante 7 días Agar Thayer Martin como medio selectivo para muestras contaminadas

26 Identificación a nivel de especie
Requerimiento de CO2 Producción de ureasa Producción de SH2 Sensibilidad a los colorantes: fucsina básica, tionina y azul de tionina identificación de especies, y biovares de B. abortus y B. suis, no de B. melitensis Identificación serológica ( antisueros monovalentes para cepas lisas y rugosas) Solo en CENTROS DE REFERENCIA

27 Diferenciación con otros géneros de BNF ureasa positiva
Oxidasa positiva ( B. abortus; B. melitensis; B. suis) B. zoohelcum  Indol +; inerte a H de C O. ureolytica, B. bronchiseptica, C. pauculus  inertes a H de C; móviles O. antrophi y R. radiobacter  crecen en medios entéricos; móviles P. phenylpiruvicus  Gram; inerte a H de C

28 Diferenciación con otros géneros de BNF ureasa positiva
Oxidasa negativa ( B. canis) B. parapertussis  NO3 negativo

29 Diagnóstico serológico
Aglutinación en placa: Rosa de Bengala  prueba cualitativa (screening), IgM e IgG Huddleson   prueba cuantitativa; IgM, IgG e IgA; (>1:40) Aglutinación en tubo (STA)  IgM e IgG ( con y sin 2ME). (> 1:20) EIA  Igual S pero > E ; detecta IgM, IgG e IgA Fijación de complemento  alta/ E, es el método de referencia internacional ( > 1:20) IFI ( >1:80)

30 Diagnóstico serológico
Prueba de Coombs  detecta Ac completos e incompletos Ag B. abortus  detecta B. abortus, B. melitensis y B. suis; para B. canis se necesita Ag espeífico de especie Proteína citoplasmática de 18 kDa  presente en infección aguda; ausente en infección no activa o no infectados ( Goldbaum et al; JCM; 1993) Son de DIAGNÓSTICO PRESUNTIVO

31 Diagnóstico serológico
Serología negativa  descarta brucelosis Serología positiva  no necesariamente implica infección activa Falsos positivos por reacción cruzada o por memoria inmunológica en población expuesta

32 Tratamiento Terapia combinada y prolongada Esquemas propuestos:
Tradicional:Tetra oral ( 6 sem) + estrepto IM ( 2 a 3 sem) Habitual: Doxi + Rifa (oral) por 6 sem Beta-lactámicos falla de tto (Cro) Quinolonas  buena actividad in vitro( ofloxa, la más activa) pero recurrencia in vivo Ambos activos en terapia combinada (rifa)

33 Tratamiento Neurobrucelosis y endocarditis  rifa + doxi + TMS
La endocarditis muchas veces requiere la cirugía ( reemplazo valvular) Niños  TMS + Rifa Embarazadas  TMS o TMS + Rifa Prueba de sensibilidad NO estandarizada!

34 Conclusiones Diagnóstico presuntivo
Fiebre de más de una semana de evolución Epidemiología compatible Serología para Brucella + Diagnóstico definitivo  aislamiento del microorganismo de sangre, MO o tejidos