FUNCION DEL LABORATORIO EN EL DIAGNOSTICO DIFERENCIAL Y EL TRATAMIENTO DE PACIENTES CON ALTERACIONES METABOLICAS DE LA GLUCOSA.

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1 FUNCION DEL LABORATORIO EN EL DIAGNOSTICO DIFERENCIAL Y EL TRATAMIENTO DE PACIENTES CON ALTERACIONES METABOLICAS DE LA GLUCOSA

2 La demostracion de hiperglucemia o hipoglucemia en condiciones especificas se emplea para diagnosticar diabetes y condiciones hipoglucemicas. Se han desarrollado otras pruebas de laboratorio para identificar insulinomas y monitorear el control glucemico y el desarrollo de complicaciones renales.

3 Metodos de medición de glucosa La glucosa se puede medir del suero, plasma o sangre completa. En la actualidad, la mayor parte de las mediciones de glucosa se realizan en suero o plasma. La concentración de glucosa en sangre completa es alrededor de 15% mas baja que la concentracion de glucosa en suero o plasma. El suero o el plasma se deben refrigerar y separar de las células en el plazo de una hora para evitar la perdida sustancial de glucosa por fraccionamiento celular, en particular si es alta la cuenta de leucocitos. Se emplean iones de fluoruro de sodio como anticoagulante y conservador de sangre completa, en particular si se retrasa el analisis. El fluoruro inhibe las enzimas glucoliticas. La glucosa sanguinea de ayuno (GSA) se debe obtener despues de un ayuno de casi 10 horas (no > 1 6 h). El liquido cefalorraquideo y la orina tambien se pueden analizar. La medicion de glucosa en la orina no se emplea en el diagnostico de la diabetes; sin embargo, algunos pacientes usan esta medicion para propósitos de monitoreo.

4 La capacidad de la glucosa para funcionar como un agente reductor ha sido util en la deteccion y cuantificación de carbohidratos en liquidos corporales. La glucosa y otros carbohidratos son capaces de convertir los iones cupricos en disolucion alcalina a iones cuprosos. La disolución pierde su color azul intenso y se forma un precipitado rojo de oxido cuproso. Los reactivos de Benedict y Fehling, que contienen una disolucion alcalina de iones cupricos estabilizados por citrato o tartrato, respectivamente, han sido utilizados para detectar agentes reductores en la orina y otros liquidos corporales. Otra característica quimica que se aprovecha para cuantificar carbohidratos es la capacidad de estas moleculas para formar bases de Schiff con aminas aromaticas. La O-toluidina en una disolución acida caliente producira un compuesto coloreado con una absorbancia maxima a 630 nm.

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6 En los metodos mas comunes de analisis de glucosa se emplean las enzimas oxidasa de glucosa o hexocinasa. La oxidasa de glucosa es la enzima mas especifica que reacciona solo con p-D-glucosa. La oxidasa de glucosa convierte a la p-D-glucosa en acido gluconico. La mutarrotasa se puede anadir a la reaccion para facilitar la conversion a-D-glucosa en fl-D- glucosa. Se consume oxigeno y se produce peroxido de hidrogeno. La reacción se puede monitorear polarograficamente ya sea midiendo la tasa de desaparicion de oxigeno con un electrodo de oxigeno o consumiendo peroxido de hidrogeno en una reaccion secundaria. La peroxidasa de rabano se emplea para catalizar la segunda reaccion, y el peroxido de hidrogeno se emplea para oxidar un compuesto colorante. Dos cromogenos de uso comun son la hidrazona de 3-metil- 2-benzotiazolinona y la N,N-dimetilanilina.

7 Se considera que el metodo de hexocinasa es mas exacto que los metodos de oxidasa de glucosa porque la reacción de acoplamiento con deshidrogenasa de glucosa-6-fosfato es muy especifica; por tanto, tiene menos interferencia que el procedimiento de oxidasa de glucosa. La hexocinasa en presencia de ATP convierte a la glucosa en glucosa 6-fosfato. La glucosa 6-fosfato y el cofactor NADP+ se convierten a 6-fosfogluconato y NADPH mediante la deshidrogenasa de glucosa-6-fosfato. El NADPH tiene un maximo de absorbancia fuerte a 340 nm; la tasa de aparición del NADPH se puede monitorear por medio de un espectrofotometro y es proporcional a la cantidad de glucosa presente en la muestra. Aceptado en general como metodo de referencia, este metodo no es afectado por el acido ascorbico o el acido urico.

8 Es importante saber que… La hemolisis total y la concentracion extremadamente alta de bilirrubina puede causar una disminucion falsa en los resultados. El método de la hexocinasa se puede llevar a cabo en suero o plasma recolectado con heparina, acido etilendiaminotetracetico (EDTA), fluoruro, oxalato o citrato. El metodo se puede usar tambien para orina, liquido cefalorraquideo y liquidos serosos.

9 Tambien… Los metodos no especificos de medicion de glucosa aun se usan en la seccion de analisis de orina del laboratorio sobre todo para detectar sustancias reductoras distintas a la glucosa. El metodo siguiente es una modificacion de Benedict, llamada tambien reaccion Clinitest.

10 Automonitoreo de glucosa sanguinea (AMGS) La ADA ha recomendado que individuos con diabetes deben automonitorear sus concentraciones de glucosa sanguinea en un esfuerzo por mantener las concentraciones lo mas normal posible. Para personas con diabetes tipo 1, la recomendacion es 3 a 4 veces/dia; para personas con diabetes tipo 2, se desconoce la frecuencia optima. Es importante ensenar a los pacientes como usar disoluciones de control y calibradores para asegurar la exactitud de sus resultados.9 La prueba de glucosa en orina se debe reemplazar por el AMGS; sin embargo, la prueba de cetona en orina se conserva para la diabetes tipo 1 y gestacional.