Propiedades químicas de aminoácidos, péptidos y proteínas

Presentación del tema: "Propiedades químicas de aminoácidos, péptidos y proteínas"— Transcripción de la presentación:

1 Propiedades químicas de aminoácidos, péptidos y proteínas

2 74th Meeting of the Society of German Scientists and Physicians
74th Meeting of the Society of German Scientists and Physicians. 1902, Karlsbad Franz Hofmeister ( ) Emil Fischer ( )

3 Enlace peptídico G°= 10kJ/mol 1/2=7 años, pH=7 y 25°C R1R2

4 Secuencia: AlaGluGlyLys o AEGK

5 COO- COO- NH2 NH2 NH2 COO-

6 Análisis químico Composición? Detección? Secuencia?
Reacciones del enlace peptídico Reacciones del grupo amino terminal Reacciones del grupo carboxilo terminal

7 Reacciones del enlace peptídico
Hidrólisis ácida (ClH 6M a 100 C, 24hs). Hidrólisis alcalina. Reacción de Biuret ( SO4Cu/tartrato alcalino 540nm). Baja sensibilidad. Reacción de Lowry et al. (Reactivo de Folin-Ciocalteau = mezcla de óxidos de tungsteno y molibdeno) nm

8 Reacciones del grupo amino (terminal)
Ninhidrina (570 nm) Pro a 440nm Fluorescamina (producto fluorescente). Alta sensibilidad 1-Fluoro-2,4 dinitrobenceno(FDNB, reactivo de Sanger) Cloruro de dansilo o-ftalaldehído (en sn con mercaptoetanol, producto fluorescente). Alta sensibilidad

9 Reacciones del grupo Carboxilo
Hidrazina (H2NNH2) (hidrazinolisis) Carboxipeptidasa (exopeptidasas)

10 Frederick Sanger ( ) Premio Nobel 1958, 1980

11 Secuenciación Purificación de la proteína o péptido
Determinación de la composición y PM Determinación del número de cadenas (ruptura de los puentes disulfuro) Determinación de los extremos amino-terminales y carboxilo-terminales Corte específico de la secuencia principal en fragmentos menores, al menos en dos formas distintas Purificación de cada segmento y secuenciación Determinación de la secuencia total

12 3 Ruptura de –S-S-

13 DTNB ( ácido ditio-bis-nitrobenzoico)
nitrotiobenzoato

14 4 Determinación de extremos

15 Producto púrpura

16

17

18 5 Cortes y producción de fragmentos
Métodos enzimáticos

19

20 5 Cortes y producción de fragmentos
Métodos químicos

21 6 Secuenciación de fragmentos (Edman, 1950)
pH=9

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