UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOTECNOLÓGICO MICOLOGÍA INTEGRANTES: AROCA EVELYN, AYALA.

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1 UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOTECNOLÓGICO MICOLOGÍA INTEGRANTES: AROCA EVELYN, AYALA GABRIELA, BALSECA KARLA GRUPO : N°5 TEMA: CÁNDIDA ALBICANS 2017-2018

2 CANDIDA ALBICANS

3 FACTORES DE VIRULENCIA DE CANDIDA ALBICANS

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5 El aislamiento en cultivos es imprescindible para establecer la identificación de Candida al nivel de género y especie, para efectuar las pruebas de susceptibilidad “in vitro” a los antifúngicos,

6 Pruebas de Identificación. La producción de tubos germinativos es además una prueba rápida (puede evaluarse tras 2 a 4 horas de incubación) que puede emplearse como tamiz.

7 Desarrollo de colonias de C albicans en medio de Sabouraud prueba de producción de tubos germinativos positiva.

8 Tubo Germinal: diferenciar C.albicans/C.dubliniensis de Cándida NO albicans..Se realiza a partir de una colonia fresca (24-48 h de crecimiento) utilizando plasma fresco o suero humano con glucosa incubando a 37 °C por máximo 3 horas. El tubo germinal es una extensión filamentosa de la levadura, sin estrechamiento (constricción) en su sitio de unión con la blastoconidia, que da lugar a hifas verdaderas

9 Sólo C. albicans/C.dubliniensis son capaces de producir verdaderos tubos germinales; sin embargo, otras especies como C. tropicalis pueden producir seudohifas de aspecto similar a los tubos germinales pero con blastoconidias mas grandes que las de C.albicans. Para considerar una prueba como positiva deben observarse más de 5 tubos germinales.

10 C. albicans son tubo germinal positivo y también se presentan falsos negativos (hasta 5% C. albicans son negativas) POSITIVO NEGATIVO

11 Pruebas Bioquímica para determinar las especies de Cándida Puede llegarse a una determinación por medio de Pruebas Bioquímicas como la asimilación de fuentes de carbono, asimilación de fuentes de nitrógeno, pruebas de fermentación y otras más. Hace unos años han aparecido en el comercio medios de cultivo diferenciales como el CHRO-Magar para hacer una primera tipificación

12 Se basan en la Fermentación (ZIMOGRAMA) y utilización (AUXONOGRAMA) de carbohidratos Zimograma: Medio de Cultivo líquido con una proporción de carbohidrato que fluctúa entre 1 y 5% Agregar un indicador de pH ácido (Rojo Fenol o Púrpura de bromocresol)y una campana de fermentación. Los medios se siembran a partir de colonias diferenciadasSe incuban a 25°C durante 5 a 15 días La lectura debe hacerse por el viraje del indicador, así como la formación de gas.

13 Auxonograma : Se realiza en medio sólido base peptonado, carente de carbohidratosSe agregan en forma de penicilindros o sensidiscos Con anticipación se siembra la cepa problema, y el carbohidrato a investigar Aplicar solución una solución del 1 al 2%Se incuban a 25°C durante 5 a 15 días El desarrollo de la colonia alrededor del carbohidrato indica una lectura positiva.

14 En la actualidad se han desarrollado diversos métodos comerciales de pruebas bioquímicas API-yeast (20 o 36 carbohidratos) AuxacolorMicroscanVytec Todos generan resultados muy similares y permiten una identificación sencilla de la mayoría de las levaduras

15 API- yeast Auxacolor Algunos métodos incluyen pocos carbohidratos, que permiten identificaciones rápidas pero no siempre precisas

16 EspecieResistencia al actidione Reducción de tetrazolio UreasaUtilización KNO2 C. albicans+--- C. dubliniensis+--- C. famata-+-- C. glabrata-+-- C. guilliermondii ++-- C. krusei-+- - C. parapsilosis -+-- C. tropicalis-+--

17 Es viable valorar otras características que ayudan en la tipificación como son resistencia a la cicloheximida Reducción de sales de tetrazolio, utilización de nitratos y presencia de ureasa. La resistencia al actidione puede medirse en forma simple con el crecimiento en medio de Sabouraud mas antibióticos.

18 API CANDIDA API 20C AUX SYSTEM(BIOMÉRIEUX): El equipo consiste en una tira de plástico descartable con 20 pocillos los cuales contienen 20 sustratos deshidratados para pruebas de asimilación. Se puede obtener resultados en 72 horas. La lectura se realiza visualmente y el crecimiento se determina por presencia de turbidez en el pocillo correspondiente. Los resultados se convierten en un biocódigo numérico de 7 dígitos el cual permite la identificación a través de un manual de códigos.

19 La identificación requiere la observación micromorfológica y a veces pruebas suplementarias como utilización de KNO3, crecimiento a 42 ºC y producción de ureasa. Permite identificar el 97% de los aislamientos comunes y un 88% de los menos comunes.

20 SENSIBILIDAD DE LA CANDIDA A LOS ANTIMICROBIANOS La Cándida Albicans se debe de incubar, sin agitación, en atmósfera normal, a 35ºC durante 24- 48 horas, tras este periodo de incubación se procede a leer los resultados. Lectura de resultados: La CIM es la concentración más baja de antifúngico que inhibe sustancialmente el crecimiento del microorganismo detectado visualmente. Se compara el crecimiento en cada concentración de antifúngico con el crecimiento en el tubo control de crecimiento y se califica de la siguiente forma: 0 = ópticamente claro 1 = ligeramente turbio 2 = disminución prominente de la turbidez 3 = ligera disminución de la turbidez 4 = sin disminución de la turbidez

21 La CIM para la anfotericina B, se define como la concentración más baja que tiene una puntuación de 0 (ópticamente claro). Para la 5-fluorocitosina, los azoles y las equinocandinas es la concentración más baja que tiene una puntuación de 2 (disminución prominente de la turbidez). Para aquellos aislamientos que producen grumos en el fondo, la dispersión de los mismos pipeteando o agitando puede ayudar a la interpretación de los resultados.

22 BIBLIOGRAFÍA http://www.scielo.org.ar/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0325-75412005000100003 http://slideplayer.es/slide/158211/ http://aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/moodle/mod/page/view.php?id=100778 http://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/file.php/118/MATERIALES_2013/Pruebas_de_sensibilidad_ a_los_antimicrobianos.pdf http://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/file.php/118/MATERIALES_2013/Pruebas_de_sensibilidad_ a_los_antimicrobianos.pdf