Ciencias y Tecnologías Químicas Inmovilización de enzimas

Presentación del tema: "Ciencias y Tecnologías Químicas Inmovilización de enzimas"— Transcripción de la presentación:

1 Ciencias y Tecnologías Químicas Inmovilización de enzimas
Curso Posgrado Ciencias y Tecnologías Químicas Procesos de Química Sostenible utilizando enzimas como catalizadores Inmovilización de enzimas

2 VENTAJAS DE INMOVILIZAR ENZIMAS
Curso Posgrado 2012 VENTAJAS DE INMOVILIZAR ENZIMAS Enzimas en forma de catalizadores heterogéneos Posibilidad de reutilización del catalizador No necesidad de separar la enzima de los productos de reacción Mayor versatilidad en elección de reactores Mejora de las propiedades (actividad, estabilidad y selectividad) Mejora del control de los procesos

3 ESTABILIZACION POR INMOVILIZACIÓN PURA
Curso Posgrado 2012 ESTABILIZACION POR INMOVILIZACIÓN PURA No hay agregación No hay interacciones con interfases No hay posibilidad de proteolisis Las burbujas de gas o gotas de disolvente no pueden penetrar en los poros Las moléculas de enzima están dispersas

4 MÉTODOS DE INMOVILIZACIÓN DE ENZIMAS
Curso Posgrado 2012 MÉTODOS DE INMOVILIZACIÓN DE ENZIMAS No todos los métodos de inmovilización estabilizan todas las enzimas

5 INMOVILIZACIÓN DE ENZIMAS POR MÉTODOS DE ADSORCIÓN
Curso Posgrado 2012 INMOVILIZACIÓN DE ENZIMAS POR MÉTODOS DE ADSORCIÓN Método muy simple Este método permite valores elevados de carga enzimática Las interacciones implicadas son resultantes de fuerzas de van der Waals, efectos hidrofóbicos y de carga iónica La selección del soporte pasa por su capacidad de retener la enzima, sin dejar desorber nuevamente al seno del liquido, actividad enzimática obtenida, posibilidad de regeneración y costo. Como ejemplos de soporte tenemos materias orgánicas neutras (carbón activo y celulosa) y cargadas (quitina, intercambiadores aniónicos y catiónicos), además de materia inorgánica (bentonita, alúmina, vidrio y sílica porosa).

6 Adsorción por mecanismo de intercambio multipuntual
Curso Posgrado 2012 MECANISMO DE LOS PROCESOS DE ADSORCIÓN + - Adsorción por mecanismo de intercambio multipuntual

7 Reuso del soporte/ reactor
Curso Posgrado 2012 DISEÑO DE NUEVOS SOPORTES PARA LA INMOVILIZACIÓN MUY SENCILLA Y REVERSIBLE DE ENZIMAS Reuso del soporte/ reactor Adsorciones físicas muy fuertes Efecto estabilizante: Adsorción multisubunidades de proteínas multiméricas Soportes muy estables Condiciones de inmovilización muy suaves No es necesario bloquear

8 Gran concentración de grupos: adsorción fuerte
Curso Posgrado 2012 INMOVILIZACIÓN REVERSIBLE SOBRE SOPORTES RÍGIDOS RECUBIERTOS DE POLÍMEROS POLIFUNCIONALES COO - SO4-2 NH3+ Gran concentración de grupos: adsorción fuerte Biotechnol. Bioeng , Biotechnol. Progr , Biotechnol. Progr ,

9 ADSORCIÓN A SOPORTES PEI DESORCIÓN A pH 7
Curso Posgrado 2012 COMPARACIÓN DE SOPORTES PEI FRENTE A SOPORTES CONVENCIONALES: ADSORCIÓN DE INVERTASA DE SACCHAROMYCES CEREVISAE Sobrenadante ADSORCIÓN A SOPORTES PEI Suspensión DESORCIÓN A pH 7 Biotechnol. Progr ,

10 INACTIVACIÓN TÉRMICA DE INVERTASA ADSORBIDA SOBRE
Curso Posgrado 2012 INACTIVACIÓN TÉRMICA DE INVERTASA ADSORBIDA SOBRE SEPABEADS - PEI Tiempo (h) Actividad remanente, (%) Sepabeads-PEI DEAE Enzima soluble Tª 55º C pH 7 Enzimas multiméricas : Adsorción multi-subunidades Biotechnol. Progr ,

11 Métodos sencillos y eficientes de mejorar
Curso Posgrado 2012 SOPORTES RECUBIERTOS DE POLÍMEROS Adsorciones muy rápidas y sencillas Adsorción más fuerte que soportes convencionales Adsorción muy poco distorsionante (actividad 100%) Adsorción estabilizante: adsorción multi-subunidades estabilización frente a disolventes Permiten reuso del soporte/reactor Métodos sencillos y eficientes de mejorar las propiedades de las enzimas

12 Adsorción de Proteínas Recombinantes sobre Quelatos Metálicos
Curso Posgrado 2012 Adsorción de Proteínas Recombinantes sobre Quelatos Metálicos Adsorción unipuntual a través de una interacción muy fuerte con único quelato Proteínas naturales His - +2 En 1º lugar voy a comentar el desarrollo de estrategias de adsorcion de enzimas recombinantes con colas de Poli-His sobre soportes activados con quelatos metalicos, este tipo de adsorciones, es un método muy eficiente de purificacion enzimas recombinantes. Así a la enzima, se le añade un resto de 6 His, bien en el amino terminal, bien en el carboxilo terminal, cada una deste colas, es capaz de formar un complejo muy fuerte, con un unico grupo quelato del soporte quedandoase, así retenidas en el soporte. El problema, reside si esta proteina va acompañada de muchas otras proteínas no reconbinantes del microorganismo usado en la expression, muchas de estas proteínas ,tb ppueden interacionar, fundamentalmente si usamos soportes quelatos altamente activados. Estas otras proteínas ya no interaciónan por una unica interacion, con un unico quelato, sino q intereracionan a traves de interaciones debiles, entre varias His dsitribuidas por una zona relactivamente amplia de su superficie y varios grupos quelato del soporte. O sea, q en principo tenemos 2 mecanismos bastante disitntos de adsorción y apartir de alli podremos diseñar varias estrategias para provocar la adsorción selectiva de las proteínas recombts. Proteínas recombinantes con colas poli-His Adsorción multipuntual a través de varios grupos quelato

13 INMOVILIZACIÓN DE ENZIMAS MEDIANTE COORDINACIÓN A METALES
Curso Posgrado 2012 INMOVILIZACIÓN DE ENZIMAS MEDIANTE COORDINACIÓN A METALES His Enzimas naturales His Adsorción multipuntual a través de varios grupos quelato Enzimas recombinantes con colas poli-His COO- Zn+2 His Adsorción unipuntual a través de una interacción muy fuerte

14 Útil cuando la enzima requiere ser estabilizada
Curso Posgrado 2012 UNION COVALENTE Posibilidad de estabilización por unión multipuntual La unión de la enzima al soporte es muy fuerte Tras inactivación hay que eliminar el soporte y la enzima Útil cuando la enzima requiere ser estabilizada previa a su utilización

15 Rigidificación de la estructura 3-D
Curso Posgrado 2012 ESTABILIZACIÓN DE ENZIMAS MEDIANTE PROCESOS DE INMOVILIZACIÓN MECANISMOS DE INACTIVACIÓN DE ENZIMAS Alta temperatura Disolventes pHs extremos M. acuoso pH neutro 4º C + Rigidificación de la estructura 3-D Estabilización de la estructura cuaternaria

16 MECANISMOS DE ESTABILIZACIÓN POR INMOVILIZACIÓN
Curso Posgrado 2012 MECANISMOS DE ESTABILIZACIÓN POR INMOVILIZACIÓN RIGIDIFICACIÓN DE LA ESTRUCTURA 3D ESTABILIZACIÓN DE LA ESTRUCTURA CUATERNARIA +

17 ESTRATEGIA GENERAL DE ESTABILIZACIÓN DE ENZIMAS POR
Curso Posgrado 2012 ESTRATEGIA GENERAL DE ESTABILIZACIÓN DE ENZIMAS POR INMOVILIZACIÓN COVALENTE MULTIPUNTUAL Muchos residuos de la enzima Brazos espaciadores muy cortos Soporte rígido Posiciones relativas invariables durante cualquier cambio conformacional inducido por cualquier agente distorsionarte ESTABILIZACIÓN 3-D COMO CONSEGUIR ESTE TIPO DE INMOVILIZACIONES

18 RIGIDIFICACIÓN DE DIFERENTES REGIONES
Curso Posgrado 2012 RIGIDIFICACIÓN DE DIFERENTES REGIONES Región más rica en lisinas Región cercana al centro activo Bucle inestable 18

19 Muy reactivo cuando está ionizado Mayoritariamente en la superficie
Curso Posgrado 2012 GRUPOS AMINO NH2 Muy reactivo cuando está ionizado Mayoritariamente en la superficie Abundante Amino terminal (pK=7.5) … muy reactivo a pH neutro Lisinas (pK=10.5) ……… poco reactivas a pH neutro 19

20 Curso Posgrado 2012 INMOVILIZACIÓN SOBRE SOPORTES CON GRUPOS MUY REACTIVOS (glutaraldehído, CNBr, etc) NH3 + NH2 NH3 + NH3 + -OH NH3 + Reactividad mayor en el amino más reactivo (pk 7,5 <<< 10.7 (lys) Muy difícil rigidificar la superficie a pH alcalino 20

21 GRUPOS MUY POCO REACTIVOS
+ NaBH4 GRUPOS MUY POCO REACTIVOS Reaccion intermolecular muy lenta Bases de Schiff muy inestables En principio muy poco útiles para la unión covalente enzima-soporte a pH neutro pero los hemos convertidos es los mejores para inmovilización estabilización Curso Posgrado 2012 21

22 LOS RESIDUOS Y LA REGION
Curso Posgrado 2012 LOS RESIDUOS Y LA REGION - NH2 (muy buen nucleófilo sin necesidad de activación) .. Los grupos amino: un amino terminal muy reactivo y numerosos residuos lisina poco reactivos La región : a.- el amino mas reactivo b.- las mas ricas en grupos amino

23 INMOVILIZACIÓN POR EL AMINO MÁS REACTIVO
Curso Posgrado 2012 INMOVILIZACIÓN POR EL AMINO MÁS REACTIVO NH2 NH3+ NH3

24 + + H2N NH3 + H2N R’ H2N R C O H O CH2 H2N R INMOVILIZACION DE ENZIMAS
Curso Posgrado 2012 INMOVILIZACION DE ENZIMAS A TRAVÉS DE SUS GRUPOS AMINO H2N NH3 + H2N R’ + H2N R C O H O CH2 + H2N R

25 Curso Posgrado 2012 LA REACCION INICIAL ENTRE ENZIMAS Y SOPORTES GLIOXIL NH2 NH2 H2N pH (NO) pH (NO) NH2 H2N Regiones muy ricas en grupos aminos pH (SI)

26 EL PROCESO DE MULTI-INTERACCIÓN ENZIMA - SOPORTE
Curso Posgrado 2012 EL PROCESO DE MULTI-INTERACCIÓN ENZIMA - SOPORTE Tiempo hasta 72 horas después del final de la primera inmovilización Temperatura (25 ºC >>> 4 ºC)

27 NaBH4 1mg/ml PUNTO FINAL DE LA MULTI-INTERACCION ENZIMA-SOPORTE
Curso Posgrado 2012 PUNTO FINAL DE LA MULTI-INTERACCION ENZIMA-SOPORTE NaBH4 1mg/ml

28 .. LOS GRUPOS GLIOXIL: SOPORTE-O- CH2 - CHO
Curso Posgrado 2012 LOS GRUPOS GLIOXIL: SOPORTE-O- CH2 - CHO Muy estables y muy cercanos al soporte rígido Reacción unipuntual reversible con grupos amino a.- orientación adecuada para inmovilización multipuntual b.- multi-interacción no distorsionarte Ausencia de impedimentos estéricos .. NH2 Modificación química mínima + Soportes completamente inertes e hidrofílicos

29 SOPORTES GLIOXIL PARA LA ESTABILIZACION DE ENZIMAS
Curso Posgrado 2012 SOPORTES GLIOXIL PARA LA ESTABILIZACION DE ENZIMAS alta densidad superficial de grupos glioxil, µEq. / m2 Soportes formados por grandes superficies con un elevado grado de activación Brazos espaciadores muy pequeños La enzima se inmoviliza siempre por regiones muy ricas en NH2 Los grupos glioxil son muy estables y no tienen impedimentos estéricos durante la multi-interacción La modificación química de la enzima es mínima

30 ENZIMAS ESTABILIZADAS POR INMOVILIZACION MULTIPUNTUAL
Curso Posgrado 2012 ENZIMAS ESTABILIZADAS POR INMOVILIZACION MULTIPUNTUAL SOBRE SOPORTES GLIOXIL ENZIMA ACTIVIDAD ESTABILIZACION Tripsina Quimotripsina Penicilina G acilasa de E. Coli Penicilina G acilasa de K. citrophila Ferredoxina NADP reductasa de Anabaena Lipasa de C. rugosa Glutamato racemasa Esterasa de B. stearothermofilus Termolisina de B. thermoproteolyticus 75% 70% 60% 50% 100% 10.000 60.000 8.000 7.000 1.000 150 100 >>> estable <<

31 Orientacion correcta: regiones muy ricas en aminos
Curso Posgrado 2012 Orientacion correcta: regiones muy ricas en aminos No inmoviliza soportes muy activados a pH 7.0 No inmoviliza soportes poco activados a pH 10.0 Inmovilizacion muy rapida sobre soportes muy activados a pH 10.0 Inmovilizacion muy rapida de tripsina (autolisada) sobre soportes muy activados a pH 7.0 Efecto espectacular de la concentracion de grupos activos sobre la velocidad inmovilización Efecto espectacular de la temperatura sobre la velocidad de inmovilización Estabilización muy elevada de todas las enzimas evaluadas glioxil muy diferente de BrCN, glutaraldehido…

32 pH 8 Unión de enzimas con varios aminos terminales a soportes
Curso Posgrado 2012 Unión de enzimas con varios aminos terminales a soportes activados con grupos glioxil pH 7 Hipótesis multiméricas: NH2 NH2 NH2 pH 8 Si hubiera varios aminos terminales en un mismo plano de la proteína esta se podría inmovilizar multipuntualmente sobre glioxil a pH 7-8 Ésta inmovilización debería involucrar a muchas subunidades

33 Curso Posgrado 2012

34 LOS SOPORTES EPÓXIDO PARA LA UNIÓN COVALENTE MULTIPUNTUAL.
Curso Posgrado 2012 LOS SOPORTES EPÓXIDO PARA LA UNIÓN COVALENTE MULTIPUNTUAL. NH2 SH H2N OH NH2 NH2 Grupos estables Posibilidad de reacción con muchos residuos de la enzima Brazos espaciadores cortos Muchos grupos activados

35 INMOVILIZACIÓN DE ENZIMAS SOBRE SOPORTES EPÓXIDO
Curso Posgrado 2012 INMOVILIZACIÓN DE ENZIMAS SOBRE SOPORTES EPÓXIDO NH2 .. NH2 NH2 Inmovilización extremadamente lenta Reacción amino-epoxido : Intermolecular muy lenta Intramolecular muy rápida e intensa

36 NH3+ NH3+ NH3+ NH3+ .. .. NH2 NH2 .. NH2 NH3+
Curso Posgrado 2012 MECANISMO DE INMOVILIZACIÓN-ESTABILIZACIÓN DE ENZIMAS A SOPORTES EPÓXIDO NH3+ NH2 .. NH3+ NH3+ pH 7.0 NH3+ NH2 .. Adsorción física pH 7.0 NH2 .. NH3+ pH 10 Interacción multipuntual Inmovilización covalente Biomacromolecules , Nature Protocols ,

37 Curso Posgrado 2012 1) 2) Me+2 Biomacromolecules ,

38 Proteína inmovilizada
Curso Posgrado 2012 INMOVILIZACIÓN COVALENTE DE ENZIMAS DE UN EXTRACTO CRUDO DE Escherichia coli EN DIFERENTES SOPORTES EPÓXIDO HETERO-FUNCIONALES. SOPORTE Proteína inmovilizada Eupergit Hidrofóbico* Eupergit Cu+2 Eupergit boronato Eupergit – NH3+ 70% >85% 75% 65% Condiciones: pH 7 y 25ºC * 1 M de fosfato sódico La utilización secuencial de 3 soportes permite la inmovilización de “todas” las proteínas del extracto. Un alto porcentaje de enzimas se pueden inmovilizar sobre diferentes soportes .... diferentes orientaciones. Biomacromolecules ,

39 Curso Posgrado 2012 ACTIVIDAD ENZIMÁTICA EN FUNCIÓN DEL SOPORTE Epóxido hidrofóbico NH2-Epóxido M+2-Epóxido Lipasa C. rugosa 100 95 70 PGA E. coli 75 nd -galactosidasa A.oryzae -galactosidasa Thermus.sp.T2 40 35 Epóxido hidrolasa A.niger 30 Biomacromolecules ,

40 Actividad, (%) Tiempo (horas) pH 6,5; 70ºC
Curso Posgrado 2012 ESTABILIDAD TÉRMICA DE DIFERENTES DERIVADOS SEPABEADS EPÓXIDO HETEROFUNCIONALES DE -GALACTOSIDASA DE Thermus sp. T2 Actividad, (%) Boronato-Epóxido M+2-Epóxido NH2-Epóxido Hidrófobico - Epóxido Soluble pH 6,5; 70ºC Tiempo (horas) Biotechnol. Progr , 388 – 392.

41 OPTIMIZACIÓN DE LOS SOPORTES HETEROFUNCIONALES
Curso Posgrado 2012 OPTIMIZACIÓN DE LOS SOPORTES HETEROFUNCIONALES + + Suficientes grupos nuevos para favorecer la adsorción y muchos grupos epóxido fácilmente accesibles para favorecer la inmovilización covalente.

42 Nuevo soporte comercial Resindion
Curso Posgrado 2012 TERCERA GENERACIÓN DE SOPORTES EPÓXIDOS - NH2 - NH2 pH 7 pH 7 Incubación a pH 10 Máxima densidad de grupos amino Máxima densidad de epóxidos Nuevo soporte comercial Resindion Biomacromolecules , Patente aplicada industrialmente por la empresa Resindion S.R.L. ( )

43 UNA MISMA ENZIMA POR DIFERENTES REGIONES
Curso Posgrado 2012 UNA MISMA ENZIMA POR DIFERENTES REGIONES BOLSILLO HODROFÓBICO ZONA RICA EN HISTIDINAS + - + - + - + -

44 Curso Posgrado 2012 CUARTA GENERACIÓN DE SOPORTES EPÓXIDO:INTERCAMBIADORES TIOL-DISULFURO S R pH 7 SH S S Incubación a pH 10 Grupos reactivos La mayoría de las proteínas no tienen cisteínas superficiales Podemos introducir cisteína en la región más conveniente Inmovilización dirigida de la enzima Posibilidad de rigidificación dirigida Biotechnol Bioeng. 2005, 90,

45 Derivados con muy alta actividad y estabilidad
Curso Posgrado 2012 Amplia gama de soportes Epoxido heterofuncionales Rigidificación de diferentes regiones de la superficie de enzimas industriales Derivados con muy alta actividad y estabilidad

46 SOPORTES GLIOXIL HETEROFUNCIONALES
NaOH NaIO4 Curso Posgrado 2012

47 INMOVILIZACIÓN EN TRES PASOS
NH3+ NH2 pH 7.0 Adsorción física Incubación a pH 10 Inmovilización covalente multipuntual muy intensa intramolecular suave Incubación a pH 7 INMOVILIZACIÓN EN TRES PASOS Curso Posgrado 2012

48 Curso Posgrado 2012 BTL2 inmovilizada en aminos sin groups glioxil (■); BTL2 inmovilizada en soportes amino-glyoxyl a pH 8 durante 12 h (▲); BTL2 inmovilizada en amino-glioxil a pH 8 e incubada durante 3 horas a pH 10 (♦).

49 Immobilized BTL (%) (A)
Curso Posgrado 2012 Table 3: Immobilization of BTL on different glyoxyl supports. Support ( pH of immobilization) Immobilized BTL (%) (A) Recovered Activity after adsorption (%) (B) Recovered Activity after incubation of adsorbed enzyme at pH 10 (%) (B) Chelate-glyoxyl (pH 7.0) 94 21 11 Amino-glyoxyl 100 90 Monofunctional glyoxyl (pH 10.0) 60 Boronate-glyoxyl 95 71 67 A.- percentage of soluble enzyme incorporated to the activated support. B - percentage of activity regarding to the soluble enzyme that has been incorporated to the activated support

50 CONDICIONES EXPERIMENTALES ORIENTACIÓN DE LA ENZIMA
Curso Posgrado 2012 SOPORTE ACTIVADO CONDICIONES EXPERIMENTALES ORIENTACIÓN DE LA ENZIMA Glioxil monofuncional pH 10 Región más rica en lisinas pH 8 Región con más de un amino terminal pH 8 + compuestos tiolados (DTT) Región del amino terminal Ionizado amino-glioxil pH 7 + baja fuerza iónica Región con mayor carga negativa neta Ionizado carboxi-glioxil Región con mayor carga neta positiva Metal quelato-glioxil pH 7; 200mM NaCl Región más rica en histidinas Grupo hidrofóbico-glioxil pH 7; alta fuerza iónica Región más rica en residuos hidrofóbicos Baja densidad de grupos capaces de adsorber y alta densidad de grupos glioxil pH 7; baja fuerza iónica Región que expone la mayor superficie

51 PROTOCOLO DE ACTIVACIÓN-INMOVILIZACIÓN
Curso Posgrado 2012 PROTOCOLO DE ACTIVACIÓN-INMOVILIZACIÓN Activation of agarose gels with epiclorhydrine : glyceril-epoxy supports Modification of epoxy groups with ligands bearing nucleophiles Oxidation of glyceryl groups with periodate: glyoxil groups Adsorption of enzymes at pH 7.0 ( through different regions) on different immobilized ligands Long-term incubation at pH 7.0: mild intramolecular covalent immobilization with glyoxyl groups Long-term incubation at pH 10: intense intramolecular multipoint covalent attachment Mild borohydride reduction to stabilize amine-glyoxyl attachments

52 Todo el sólido es proteína No hay gasto de soporte
Curso Posgrado 2012 DERIVADOS SIN SOPORTE Todo el sólido es proteína No hay gasto de soporte Estabilización operacional Rigidificación ? Microambiente ?

53 POSIBILIDADES CLECs Enzimas puras y cristalinas
Curso Posgrado 2012 POSIBILIDADES Crosslinked Enzyme Crystals Crosslinked Enzyme Aggregates CLECs Enzimas puras y cristalinas Necesidad de enzima pura Estabilizacion de proteinas multimericas CLEAs Enzimas con trazas de impurezas Coagregacion de enzimas Agregacion de enzima y polimero Estabilizacion de enzimas

54 CLECs (Cross Linked Enzyme Crystals)
Curso Posgrado 2012 CLECs (Cross Linked Enzyme Crystals) Entrecruzante Ventajas: - Alta actividad catalítica - Posibilidad de estabilización de estructuras multiméricas Inconvenientes: - Necesidad de enzimas puras y cristalizables - Necesidad de procesos sencillos de cristalización

55 CLEAs precipitante PEG sales, disolventes Agente entrecruzante
Curso Posgrado 2012 PREPARACIÓN DE CLEAs precipitante PEG sales, disolventes Agente entrecruzante CLEAs

56 CLEAs Alta actividad Co-agregación volumétrica de enzimas No necesario
Curso Posgrado 2012 Alta actividad volumétrica Co-agregación de enzimas No necesario soporte CLEAs Co-agregación enzimas-polímeros Estabilización

57 Effect of dilution on the thermal stability of
Curso Posgrado 2012 Effect of dilution on the thermal stability of CLEA from M. lysodeiktycus catalase Actividad residual (%) Las condiciones experimentales fueron: 60ºC , pH 7, 10000 IU/ml Tiempo (h) Inmovilización convencional de enzimas: Disociación de subunidades es posible CLEA: Disociación de subunidades no es posible

58 Estabilización frente a disolventes Estabilización frente a oxígeno
Curso Posgrado 2012 AGREGADOS DE ENZIMAS Y POLÍMEROS: CLEAS CON MICROAMBIENTES Entrecruzamiento Agregación Estabilización frente a disolventes Estabilización frente a oxígeno Biocatal. Biotransfor. 19,

59 Curso Posgrado 2012 PENICILLIN G ACYLASE Cinética de inactivación de CLEAs, a 4 ºC en 75 % (v/v) dioxano en 100 mM de tampón fosfato a pH 7.0.

60 LENTIKATS + Usado normalmente con células Enzima soluble escapa
Curso Posgrado 2012 LENTIKATS + Usado normalmente con células Enzima soluble escapa

61 Enzima soluble Enzima precipitada CLEA CLEA LentiKatsTM
Curso Posgrado 2012 REPRESENTACION DE LA PRODUCCIÓN DE LENTIKATS® A PARTIR DE CLEA. CLEA G PVA Enzima soluble Enzima precipitada CLEA CLEA LentiKatsTM PRECIPITACIÓN ENTRECRUZAMIENTO ENCAPSULACIÓN

62 Curso Posgrado 2012 INACTIVACIÓN POR CODISOLVENTE. Experimento hecho a 4 ºC en 75 % (v/v) dioxano y 25 % (v/v) 100 mM de tampón fosfato a pH 7.0.

63 J. Mol. Catal. B: Enzymatic. 2006, 38, 154-57.
Curso Posgrado 2012 ESTABILIZACIÓN DE NITRILASA USANDO MICROAMBIENTES EN ATMÓSFERA DE OXÍGENO Nitrilasa Actividad, % Tiempo, (h) J. Mol. Catal. B: Enzymatic. 2006, 38,

64 Permite obtener catalizadores muy activos Estabilización de enzimas:
Curso Posgrado 2012 DESARROLLO DE CLEAs Permite obtener catalizadores muy activos Estabilización de enzimas: (multiméricas, disolventes, O2, etc) Coagregación de varias enzimas Coagregación de enzimas y polímeros