Procedimiento de electrotransferencia

Presentación del tema: "Procedimiento de electrotransferencia"— Transcripción de la presentación:

1 Procedimiento de electrotransferencia
Procedimiento de electrotransferencia. En una electrotransferencia Southern, o de DNA, el DNA aislado a partir de una línea celular o de un tejido se digiere con una o más enzimas de restricción. Esta mezcla se transfiere con pipeta hacia un pozo en un gel de agarosa o de poliacrilamida, y se expone a una corriente eléctrica directa. El DNA, al tener carga negativa, migra hacia el ánodo; los fragmentos de menor tamaño se mueven con mayor rapidez. Luego de un tiempo idóneo, el DNA que está dentro del gel se desnaturaliza mediante exposición a álcalis leves, y se transfiere hacia papel de nitrocelulosa o nailon, lo que origina una réplica exacta del modelo en el gel, por medio de la técnica de electrotransferencia ideada por Southern. El DNA se une al papel mediante exposición a calor o rayos UV, y a continuación el papel se expone a la sonda de cDNA marcada, que se hibrida hacia fragmentos complementarios en el filtro. Después de lavado exhaustivo, el papel es expuesto a placa de rayos X o a un escrutinio de imagen, que se revela para mostrar varias bandas específicas que corresponden al fragmento de DNA que reconoció las secuencias en la sonda de cDNA. La electrotransferencia de RNA, o Northern, es similar desde el punto de vista conceptual. El RNA se sujeta a electroforesis antes de electrotransferencia. Esto necesita algunos pasos diferentes de los de la transferencia de DNA, principalmente para asegurar que el RNA permanezca intacto, y por lo general es un poco más difícil. En la electrotransferencia de proteína o Western, las proteínas se someten a electroforesis y se transfieren hacia papel especial que se une con avidez a macromoléculas, y luego se sondea con un anticuerpo específico u otra molécula sonda. (Los asteriscos significan marcado, sea radiactivo o fluorescente.) En el caso de la electrotransferencia Southwestern (véase el texto; no se muestra), una electrotransferencia de proteína similar a la que se muestra arriba bajo “Western” se expone a ácido nucleico marcado, y los complejos de proteína-ácido nucleico formados se detectan por medio de autorradiografía o técnicas de imagen. De: Genética molecular, DNA recombinante y tecnología genómica, Harper. Bioquímica ilustrada, 29a edición Citación: Murray RK, Bender DA, Botham KM, Kennelly PJ, Rodwell VW, Weil P. Harper. Bioquímica ilustrada, 29a edición; 2013 En: Recuperado: October 28, 2017 Copyright © 2017 McGraw-Hill Education. All rights reserved