El uso de genes reporteros para definir elementos reguladores de DNA

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1 El uso de genes reporteros para definir elementos reguladores de DNA
El uso de genes reporteros para definir elementos reguladores de DNA. Un fragmento de DNA que porta elementos cis reguladores (triángulos, cuadrado, círculos en el diagrama) que provienen del gen en cuestión —en este ejemplo, aproximadamente 2 kb de DNA 5′-flanqueantes y promotor cognado— es ligado hacia un vector plásmido que contiene un gen reportero idóneo —en este caso, la enzima luciferasa de luciérnaga, que se abrevia LUC—. Independientemente de cuál gen reportero se utiliza en estos experimentos, el reportero no puede estar presente en las células que fueron objeto de transfección. En consecuencia, cualquier detección de estas actividades en un extracto celular significa que la transfección de la célula por el plásmido fue exitosa. No se muestra aquí, pero típicamente se efectúa cotransfección de un reportero adicional como luciferasa de Renilla para que sirva como un control de la eficiencia de la transfección. Las condiciones de análisis para las luciferasas de luciérnaga y de Renilla son diferentes, de ahí que las dos actividades se puedan analizar de manera secuencial usando el mismo extracto celular. Por ejemplo, un aumento de la actividad de la luciferasa de luciérnaga sobre la cifra basal después de la adición de una o más hormonas, significa que la región de DNA insertada en el plásmido del gen reportero contiene elementos de respuesta a hormona (HRE) funcionales. Se pueden construir fragmentos progresivamente más cortos de DNA, regiones con deleciones internas, o regiones con mutaciones puntuales, e insertarlos para señalar con precisión el elemento de respuesta (en la figura se presenta el mapeo de deleción de los HRE importantes). De: Regulación de la expresión de gen, Harper. Bioquímica ilustrada, 29a edición Citación: Murray RK, Bender DA, Botham KM, Kennelly PJ, Rodwell VW, Weil P. Harper. Bioquímica ilustrada, 29a edición; 2013 En: Recuperado: October 09, 2017 Copyright © 2017 McGraw-Hill Education. All rights reserved