Rapid Susceptibility Testing and Microcolony Analysis of Candida spp. Cultured and imaged on Porous Aluminum Oxide Para las levaduras patógenas, las pruebas.

Presentación del tema: "Rapid Susceptibility Testing and Microcolony Analysis of Candida spp. Cultured and imaged on Porous Aluminum Oxide Para las levaduras patógenas, las pruebas."— Transcripción de la presentación:

1 Rapid Susceptibility Testing and Microcolony Analysis of Candida spp. Cultured and imaged on Porous Aluminum Oxide Para las levaduras patógenas, las pruebas fenotípicas convencional necesitan por lo menos 24 h Cultivos en un soporte de oxido de aluminio poroso (PAO) Combinado con el microscopio ofrece una alternativa de resultados mas rápidos La detección de microcolonias se ha utilizado para acelerar los ensayos basado en los cultivos de hongos.

2 Desarrollar un método basado en microcolonias para pruebas rápidas de sensibilidad de Cándida SPP utilizando un soporte en PAO Este nuevo enfoque se comparo con el EUCAST comúnmente utilizado y el E-TEST. El objetivo era un ensayo con mayor velocidad, reducción de costos y menos desechos clínicos

3 La formación de imágenes de microcolonias después del cultivo Y puesta en soporte de oxido de aluminio poroso se ha usado Para la pruebas de sensibilidad Cultivos en PAO permite la manipulación de microcolonias intactas La tinción con colorantes fluoregenicos y la imagen por microscopia La cuantificación de microcolonias es cada ves mas accesible y automatizable

4 Microcolonias de Cándida spp fueron cultivadas en PAO Teñidas con los colorantes fluorogénicos Fun-1 blanco de calcofluor Luego fueron fotografiadas por microscopia de fluorescencia. Las imágenes fueron capturadas por una cámara La imagen de microcolonia fue usada para calcular la sensibilidad de la levadura A la AMB, Caspofungina y Onidalofungin (3 h de cultivo); y el voriconazol e intraconzal (7 h de cultivo)

5 C. albicans cepa 3003 que crece en PAO y reflejada por microscopía electrónica de barrido.A, Estructura de PAO visto desde arriba con una alta resolución. Los poros (áreas oscuras; ejemplo marcado P) intervalo de 50 a 200 nm sobre esta cara del material. B, C albicans que crecen en PAO vistos desde arriba. C, C albicans microcolonias visto desde arriba, en un ángulo de 45 °. La barra de escala indica 100 nm cuando se aplican al panel A, 1 m para el panel B y 5 micras para el panel C.

6 Pruebas de MIC en PAO Ensayos en cultivos y penetración en PAO Determinación de MIC por métodos estándar Los fármacos anti fúngicos Cepas y cultivos

7 Cándida spa fue cultivada en agar nutritivo y puesta en un soporte de oxido de aluminio poroso, la tinción Fun-1/blanco de calcofluor dio una imagen excepcionalmente nítida utilizando un objetivo de 10 x observando de 50 a 250 microcolonias Cuando se tanteo la suceptibilidad de Fun-1 se observo que fue mayor en cepas sensibles a los triazoles con concentraciones cercanas a la MIC, esta tendencia no se observo con VOR- ITR en cepas resistentes

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10 Ensayos de susceptibilidad de microcolonias fue desarrollado dando resultados precisos Con 3,5 a 7 h de cultivo en comparación con el E-test de dura de 24 a 48h Los triazoles necesitan un tiempo mas largo de incubación y de precisión ligeramient6e inferior En comparación con la equinocandinas y AMB pero también pueden dar buenos resultados

11 Las pruebas convecionales no revelan sobre el estado de la celula en la microlonia Las celulas que se encuentran en la periferia de la microcolonia se ven mas afectadas por lo s triazoles que las que se encuentran en el interior Los beneficios clinicos de aumento de la velocidad de los metodos convecionales (24-48) requiere investigacion por que hay que tener en cuenta que Candida puede amenazar la vida de forma inmediata