INVESTIGACIÓN DE BACTERIAS EN SALIVA EMITIDA POR TRIATOMINOS TRANSMISORES DE T. CRUZI.

 Trypanosoma cruzi se encuentra ampliamente en el continente Americano, con la distribución de transmisores del orden Triatominae.  El papel de los triatominos en el ciclo de vida del parásito es fundamental pues en ellos T. cruzi se reproduce en fase de epimastigote y se diferencia a la fase de tripomastigote metacíclico que posee la capacidad de infectar al huésped vertebrado.

 Se han realizado estudios tratando de demostrar la presencia de alguna fase de T. cruzi en saliva y por extensión, la transmisión del parásito por esta vía ha sido negativos en todos los casos.  Se ha estudiado la presencia de bacterias en las glándulas salivales de los triatominos se a indicado la posibilidad de encontrar cocos gram positivos.  Si la saliva de triatominos tuviera bacterias u otras simbiontes patógenas al humano, existe la posibilidad de su transmisión durante su alimentación podrían producir una respuesta inflamatoria local hasta una bacteremia grave.

Objetivo  Investigar la presencia de bacterias simbiontes en la saliva de Triatoma Infestans y discriminar si son potencialmente patógenas para el humano.

Material y Métodos  Se emplearon lotes de cuatro machos y de cuatro hembras de Triatoma infestans, se probaron los siguientes esquemas de alimentación artificial:  Esquema 1. Estimulación del Pronoto. Se procedió a estimular la emisión de saliva mediante contactos suaves con la yema del dedo índice directamente sobre el pronoto de los ejemplares, previamente se realizó una desinfección de la proboscis y se tomó una muestra de la zona externa de la misma como control negativo. Tras la emisión de saliva en ambiente estéril, se colectó y se sembró.

 Esquema 2. Método del Hisopo. Se procedió a embeber hisopos estériles con solución salina estéril precalentada a 37º C, se ofrecieron individualmente a los triatominos para que se alimentaran directamente del algodón rico en solución.  Esquema 3. Método de la Membrana de Látex: Se colocaron 2 ml de solución salina isotónica en recipientes estériles y se taparon con una membrana de látex estéril, se calentaron en baño Maria y se les ofrecieron a los triatominos para que se alimentaran a través de la membrana.

 El siguiente paso para todos los esquemas consistió en sembrar masivamente el material biológico colectado en placas con medio Agar Soya Tripticasa y Gelosa Sangre respectivamente. A continuación se procedió a incubar las placas a 37º C durante 24 horas. Se determinó su morfología colonial, morfología microscópica y tinción de Gram. Se sembraron las siguientes pruebas bioquímicas: Cátalasa, Oxidasa, Hemólisis, Vogues-Proskauer, Lactosa, Maltosa, Rafinosa, Dextrosa, Arginina, Manitol, Urea, Almidón, Bilis Esculina y Novobiocina

Resultados  La metodología de estimulación del pronoto arrojó resultados negativos, en ningún caso se logró obtener saliva para ser sembrada en los medios de cultivo.  En la metodología del hisopo, sólo dos ejemplares se alimentaron de él y al sembrar no hubo crecimiento bacteriano.  La metodología de la membrana de Látex dio resultados positivos en todos los casos de alimentación de los triatominos por lo cual fue la metodología de elección para el estudio y las pruebas se realizaron por cuadruplicado. La tabla 1 muestra los tipos de bacterias que se desarrollaron en los medios de cultivo de acuerdo a sus características coloniales y la tabla 2 las características microscópicas.

CARACTERÍSTICA COLONIA ACOLONIA BCOLONIA CCOLONIA D Tamaño1 mm3 mm1 mm ColorBlanco FormaCircularAmeboideCircular ElevaciónConvexa SuperficieLisa AspectoHúmedo BordeEnteroOndulado Entero Luz TransmitidaOpaca TranslucidaOpaca Luz ReflejadaBrillante ConsistenciaMucoide Butirosa Pigmento DifusibleS/pigmento Medio de CultivoTSA

Tabla 2. Características microscópicas de las colonias bacterianas obtenidas COLONIA ACOLONIA BCOLONIA CCOLONIA D GramPositivo MorfologíaCocos AgrupaciónRacimos Pares o CadenasCadenasPares

EXPERIMENTOTriatomino 1Triatomino 2Triatomino 3Triatomino 4 1A, B, DA, B, C, D Negativo 2A, B, C, DA, B, DNegativoA, B, C 3NegativoA, B, C, D A, B, D 4D A, B, C, DA Tabla 3: Presenta los tipos de bacterias que crecieron a partir de la saliva de cada triatominio machos en experimentos por cuadruplicado

EXPERIMENTOTriatomino 1Triatomino 2Triatomino 3Triatomino 4 1A, B,A, B, CA, B, C, D 2NegativoA, B, CNegativoA, B, C, D 3A, BNegativo A, B, 4A, B, C, DNegativoA, B,A, B, C, D Tabla 4: Presenta los tipos de bacterias que crecieron a partir de la saliva de cada triatominio hembras en experimentos por cuadruplicado

BIOQUÍMICACOLONIA ACOLONIA BCOLONIA CCOLONIA D Hemólisisγγγγ LactosaPositivo Vogues ProskauerPositivo **Negativo MaltosaPositivo RafinosaNegativo PositivoNegativo DextrosaPositivo **Positivo ArgininaPositivo **Negativo ManitolPositivoNegativo UreaPositivo **Negativo Almidón** Positivo** Bilis Esculina** Positivo** NovobiocinaRS**S OxidasaNegativo CatalasaPositivo NegativoPositivo **: NO DETERMINADAR: RESISTENTES: SENSIBLE Tabla 5: Los resultados muestran poca diferencias entre las bacterias aisladas

Discusión  La alimentación de los triatominos en condiciones de laboratorio debe de ser lo mas cercana a la real.  Los resultados obtenidos con las metodologías uno y dos nos confirmaron que cuando la consistencia de zona de la picadura es similar a la de la piel, los ejemplares pican en la mayoría de los casos.  La ausencia de crecimiento bacteriano para el material sembrado de algunos de los ejemplares como el triatomino cuatro en el experimento 1 o el tres en el experimento 2 pudo deberse al estrés por manipulación del ejemplar o al atravesar el látex no hubiera emisión de saliva, o a que no existían simbiontes en esos ejemplares al momento del estudio.

 Las características macroscópicas y microscópicas (tablas 1 y 2) de las bacterias obtenidas, no correlacionan con los grupos de microorganismos que son patógenos para el humano y que en un momento podrían causar septicemia o alguna infección grave.

 Las pruebas bioquímicas (tabla 5) en combinación con las características antes referidas, nos permitieron establecer tres especies de bacterias del genero Staphylococcus: S. saprophyticus, S. hominis, y S. caseolyticus, de ellas, solo S. saprophyticus tiene importancia medica como agente etiológico de infecciones del tracto Urinario, También se aisló Enterococcus sp., el cual no es considerado patógeno para el humano, pero todas las especies encontradas son potencialmente capaces de causar septicemia en casos excepcionales y de inmunocompromiso.

Conclusión Confirmamos la existencia de simbiontes en saliva de T. infestans y no se descarta la posibilidad de presencia de patógenos.

Bibliografía  1. Pan American Health Organization Regional Office of the World Health Organization (PAHO/WHO) Geoepidemiological Spaces for Surveillance and Control A Series of Four Maps. Pp 2-5.  2. Charles B. Bread, *Ravi V. Durvasula, and Frank F. Richards Bacterial Symbiosis in Arthropods and the Control of Disease Transmission. Vol 4 (4):  3. Eichler S, Schaub GA. Development of symbionts in triatomine bugs and the effects of infections with trypanosomatids. PMID: [PubMed - indexed for MEDLINE].  4. Barrow Ig and Rka Fel Tham Cowan and Steel´s. Manual for the Identification of Medical Bacteria. 3 RD ed. P Cambridge University Prees.  5. Clementina Magos Lopez, Francisco Sánchez Villareal, Gonzalo Gutiérrez, Roberto Tapia Conyer Banco Nacional de Sueros Vol. 34 (2).