Biología Molecular Vanessa Z. Cardona Cardona Biol 3051
Objetivos o Analizar el DNA o Conocer los principios básicos de la técnica de electroforesis y aplicarla al análisis del DNA. o Descubrir como funcionan las enzimas de restricción para cortar el DNA.
¿Que es la biología molecular? o Estudia el AND y los genes que contiene. o El AND es el material genético que caracteriza a los organismos vivos. o Es una herramienta potente para estudiar las relaciones evolutivas entre los organismos de la tierra.
Enzimas de restricción o Las enzimas de restricción o endonucleasas se extraen de bacterias, donde actúan como un mecanismo de defensa para degradar material genético extraño que entra a la célula. o Las endonucleasas cortan o digieren el material genético en una secuencia que reconocen.
o La mayoría de estas secuencias son palindromicas. o El nombre se estas enzimas esta dado por el genero y especie de donde se aisló la misma por primera vez. o Eco R1E= genero Escherichia co= especie coli R= cepa RV 13 1= primera enzima aislada de esta cepa Enzimas de restricción
Cortes de las endonucleasas o Cortes cohesivos: o Cortan el DNA de manera escalonada o Algunas enzimas que hacen este corte lo son: Eco R1, Hin dIII, Bam H1 o Cortes abruptos: o Cortan el DNA en la misma posición. o Algunas enzimas que hacen este corte lo son: Ssp I, Sma I
Factores que afectan la actividad de las endonucleasas. o Pureza del DNA= compuestos como proteínas y altas concentraciones de sal pueden inhibir la actividad de la enzima. o Temperatura y pH o Amortiguador adecuado= este va a proveer el ambiente necesario para que la enzima trabaje en condiciones optimas.
Electroforesis o Se separan macromoléculas a través de un flujo de corriente eléctrico y se puede determinar el tamaño de los fragmento de AND. o Los fragmentos se separan por: o Tamaño de la molécula o Conformación del AND o Tamaño de los poros de la gel o Carga nata de la molécula
Carga del DNA En la fosa se coloca la muestra y esta va a estar el en electrodo negativo El DNA va a correr del electrodo negativo al positivo
Practica o Practicando el uso de las micro pipetas. o Preparación del gel para la electroforesis. o Corrida del gel de electroforesis.