Técnicas moleculares II “Tecnología de Proteínas”
Estructura y características de las proteínas
Propiedades físico-químicas de los aminoácidos
Procariotas vs Eucariotas: técnicas de extracción Ruptura mecánica directa Alta presión Sonicación Bolitas de vidrio Soluciones hipotónicas Detergentes
Fraccionamiento subcelular Centrifugación Diferencial vs. Centrifugación en gradiente
Técnicas electroforéticas: Isoelectroenfoque (relación carga/masa)
Técnicas electroforéticas: SDS-PAGE (independizarse de la carga)
SDS-PAGE ¿Por qué vemos las bandas proteicas en el gel? ¿Una banda en un gel SDS-PAGE corresponde a un único polipéptido?
Técnicas electroforéticas: Geles bidimensionales Los puntos rojos son proteínas comunes Los puntos azules proteínas específicas
Técnicas que involucran la utilización de anticuerpos Western blot Inmunohistoquímica Inmunoprecipitación ELISA
Western blot
Inmunohistoquímica
Técnicas cromatográficas
(High-performance liquid chromatrography) Técnicas cromatográficas: tipos de columnas HPLC (High-performance liquid chromatrography)
Extracción de proteínas totales Introducción a los TP 3, 4 y 5 Extracción de proteínas totales Cuantificación utilizando método de Bradford Chequeo del extracto mediante electroforesis en SDS-PAGE Análisis de una proteína pura mediante Western blot
TP nº 3: Extracción y cuantificación de extractos proteicos Extracción de proteínas a partir de distintos tejidos, utilizando métodos mecánicos y solución de lisis con detergentes. Cuantificación de proteínas por métodos colorimétricos: BRADFORD Curva de calibración Interpolar la absorbancia de las muestras en la curva
TP nº 4: SDS-PAGE y tinción con Coomasie blue Gel de distintas concentraciones de la proteína IgG Gel de proteínas extraídas de distintos tejidos de rata Rf = Dc/Dt Graficar log(PM) vs Rf para el ladder Extrapolar el Rf de las bandas de las muestras en la curva
TP nº 5: Western blot