LAB HEMATOLOGÍA 2011 RECUENTOS CELULARES
Pueden ser: Manuales o automatizados. Materiales: Cámara de Neubauer Pipetas de Thoma Tips Pipeta automática Diluyente Microscopio Aspirador o pipetor.
CÁMARA DE NEUBAUER Esta hecha de vidrio óptico. Especial de precisión. Base rectangular y gruesa. En el tercio medio se hallan cuatro ranuras longitudinales. La superficie del puente central es más profunda que los dos puentes exteriores. En el puente central (fondo de la cámara) están grabadas las redes de conteo.
Cuando se coloca la cubrecámara:
PIPETAS THOMA Pipetas de leucocitos perla blanca Pipetas de rojos perla roja 11 0.5 0.5 101
DILUCIONES Blancos: 1:20 (0.5 + 9.5 ) Rojos: 1: 200 (0.5 + 99.5) Soluto + solvente soluto Blancos: 1:20 (0.5 + 9.5 ) 10 uL+190 uL/10 uL= 20 20 uL+380 uL/20 uL= 20 Rojos: 1: 200 (0.5 + 99.5) 5 uL+ 995 uL/10 uL = 200 Cantidades exactas Evitar burbujas Mezclar gentilmente y descartar 3 gotas
Colocar la punta de la pipeta de Thoma en el borde Empezar a llenar la cámara y por capilaridad se llena la hendidura. Evitar el rebalse de la muestra. Sedimentar 2-3 min. Contar
RECUENTO CELULAR
ACEPTABLE: diferencia 10%
LECTURA DE LA CÁMARA Para recuento celular de góbulos blancos enfocar cámara en 10X. Para recuento celular de glóbulos rojos enfocar cámara en 40X en el cuadrante de en medio.
CÁLCULO 20*10/4 = 50 (FACTOR BLANCOS) RG/mm3 = # células * FD * inverso de volumen # cuadrantes contados 20*10/4 = 50 (FACTOR BLANCOS) 200*250/5 = 10,000 (FACTOR ROJOS)
EJEMPLOS R/ 8,050 GB/mm3 R/ 5.07*106 GR/mm3 Leucocitos 1. Células contadas: 161 leucocitos 2. Superficie recontada: 4 cuadrados 3. Volumen del cuadro: (1mm x 1 mm x 0.1 mm) 0.1 mm3 4. Dilución 1 : 20 Eritrocitos 1. Células contadas: 507 eritrocitos 2. Superficie recontada: 5 cuadrados 3. Volumen del cuadro: (0.2 mm x 0.2 mm x 0.1 mm) 0.004 mm3 4. Dilución 1 : 200 R/ 8,050 GB/mm3 R/ 5.07*106 GR/mm3
LIMPIEZA DE LA CÁMARA Limpiar con agua o con una solución limpiadora suave. Secar con un paño blando y acetona. Las pipetas de Thoma se limpian con agua y se secan con acetona.
OBSERVACIONES Diafragma del condensador cerrado en su mayoría Diferencia < 10 células entre cuadrantes Realizar dobles determinaciones Tener en cuenta que la cámara no esté reseca Cámara limpia Cubrecámara colocada correctamente No tener burbujas de aire en el relleno de la cámara/pipeta Cámara sobrellenada Tiempo de sedimentación corto