Integración de DNA en microorganismos: herramientas genéticas II
Uso de sistemas de recombinación sitio- específica Preparación de GMOs Integración en el cromosoma Expresión de genes tóxicos
Ab Liberación de GMOs: el problema de las resistencias
Ab Resolvasa Ab GMOs sin resistencias
Integrasa Ab Integrando en el cromosoma de un modo específico
Camino de ida pero no de vuelta
Invertasa Expresión de genes tóxicos: una solución...
Resolvasa Txt STOP...y otra
Integración de DNA exogeno en el genoma bacteriano Recombinación homóloga Recombinación sitio-específica Recombinación ilegítima –Transposición
Integración ilegitima: transposición Transposones: via intermediario de ADN –Secuencias de inserción Tipo I: IS50 Tipo II: IS3 –Transposones TipoI (IS tipoI, Tn5) TipoII (IS tipo II, Tn3) TipoIII (fago Mu) Retrotransposones: via intermediario de ARN
tnpAIR Clase I tnpAtnpRresIR Clase II Secuencias de inserción
tnpA OE IE IS50 5’CTGACTCTTATACACAAGT3’ DnaA 5’CTGTCTCTTGATCAGATCT3’ Tnp Inh
5’ 3’ 5’ 3’ H-O-H 5’ 3’ 5’ 3’ O H 5’ 3’ 5’ 3’ IS50: cortar y pegar
H-O-H 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ O H 5’ 3’ O H IS50: cortar y pegar
Dimerización Papel de Inh Acción en cis Acoplamiento con replicación IS50: mucho es malo
DNA bindingdimerization 476 aa Papel de la dimerización
476 aa dimerization 421 aa Inh y la dimerización
Acción en cis tnpAIR en cis tnpAIR en trans tnpAIR tnpAIR
Acoplamiento con replicación
tnpA OE IE OE tiene un sitio dnaA (OE y OI son suboptimos) 5’CTGACTCTTATACACAAGT3’ DnaA P2 se activa por metilación dam GATC CTAG GATC CTAG GATC CTAG GATC CTAG GATC CTAG
Tn5 OE IE OE IE IS50L IS50R kan bleostr Mutación stop Sitios dnaA