Integración de DNA en microorganismos: herramientas genéticas I

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Transcripción de la presentación:

Integración de DNA en microorganismos: herramientas genéticas I

Integración de DNA exogeno en el genoma bacteriano Recombinación homóloga Recombinación sitio-específica Recombinación ilegítima Transposición

Recombinación homóloga Homologous pairing Resolution One-strand repair/replication

Recombinación homóloga: respuesta a DSB 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ RecBCD

Recombinación homóloga: RecBCD y Chi 3’ 5’ RecBCD 3’ 5’ RecBCD Chi sites: E. coli 5’GCTGGTGG3’ B. subtilis 5’ACTGCG3’ L. lactis 5’GCGCGTG3’ RecA 3’ 5’

Recombinación homóloga: desplazamiento de hebra 3’ RecA 5’ RecA

Intermediario de Holliday RuvABC A B A B RuvAB RuvC

Integrando DNA por recombinación homóloga Integración tipo Campbell Conversión génica

Intercambio alélico marker marker

Resolución de secuencias en tandem marker marker marker

Chi mejora el intercambio alélico marker 3’ 5’ RecBCD

Genes marcadores de selección positiva y negativa Production of levansucrasa in presence of 5% sacarosa es tóxica en Gram - sacBR (B.subtilis) Necesario para asimilar nitrato, tóxico en presencia de clorato nar1

Conversión génica Ab Ab

Conversión génica y Chi, haciendo más facil el trabajo

Conversión génica: para KOs y mas... Ab X Ab X X Ab

Integración de DNA exogeno en el genoma bacteriano Recombinación homóloga Recombinación sitio-específica Recombinación ilegítima Transposición

Recombinación específica de sitio

Estructura de una diana de SSR

SSR en acción

SSR en acción

SSR en acción

SSR en acción

Invertasas

Sistemas de variación de fase

Resolvasas/Integrasas

Estabilidad plasmidica, transposición...