ACTIVACIÓN DE LOS Dr. Iván Palomo G. Depto. de Bioquímica Clínica e Inmunohematología Facultad de Ciencias de la Salud Universidad de Talca LINFOCITOS

Estructura de los receptores de LT, LB, Cél. NK ε δ ε αβ  ζζ TCR Igα IgM Igβ BCR ζζ CD 16 (Fc  IIIR) ζζζ  NKp46 (NCR) CD94 NKG2A KIR

Reconocimiento antigénico LT y CPA Algunas interacciones moleculares LT CPA CD40L CD5 CD40 CD72 CD2LFA-3 CD4 O CD8 TCRMHC LFA-1ICAM-1 CD28B7

ACTIVACIÓN DE LT Señal específica: TCR-MHC-Ag Señal inespecífica: de CPA IL-1 IL-6 IFN 

MOLÉCULAS ACCESORIAS CD2 LFA1 ICAM-1 CD43 CD5 CD28 CD45 CD4 CD8

SEÑALES QUE SE GENERAN EN LA MEMBRANA O INTRACELULARMENTE - Hidrólisis de PIP 2 (Fosfatidil inositol difosfato) - Ca 2+ intracitoplasmático - Fosforilación de proteínas

HIDRÓLISIS DE PIP 2 Y Ca 2+ INTRACITOPLASMÁTICO - Reconocimiento de Ag por TCR- (CD3) - PIP 2 IP 3 + DAG Fosfolipasa C (FLC)

IP 3 DAG Ca 2+ intracitoplasm. Ca 2+ - Calmodulina Activación Prot--Kinasas Activación PKC Fosforilación de proteínas

FOSFORILACIÓN Fundamental en la secuencia de activación Proteínas tirosina-kinasas (PTKs) Fosforilación de proteínas (en cascada). Especialmente residuos de Tirosina (Y)

Transducción de señales en los linfocitos Dominios estructurales de proteínas familia src (lck, fyn,blk) familia syk (zap-70 y syk) NH 2 U M Y K Y Y R COOH SH3 SH2 Y K NH 2 YY R COOH SH2 Tirosinas kinasas

LAT NH 2 COOH PY SH3 SH2 NH 2 COOH SH2 PYPPPP NH 2 COOH Grb2 SLP-76 Proteinas adaptadoras (memb. y citopl.) Transducción de señales en los linfocitos Dominios estructurales de proteínas P: Prolina, Y: Tirosina,

Y: Tirosina, L: Leucina, I: Isoleucina ITAM: Dominio de Activación basado en Tirosinas del Inmuno-receptor

ε δ αβ ε  ζ ζ CD45 CD4/CD8 TCR p56 lck Zap-70 a) Mecanismo básico de activación de los LT Diapositiva 1 de 2 SH 2

Cambios en la expresión genética. Cambios morfológicos y adquisión de funciones ayudadoras o citotóxicas. b) CPA MHC-I SLP-76 Ras Sos Grb2 P13K LAT Gads FL-C  1 Ca +2 PIP2 IP3DAG LT O Sitio de fosforilación Vía de los PTKVía de los MAP-kinasa CaM Calcineurina Vía de PK-C Mecanismo básico de activación de los LT Diapositiva 2 de 2 PK-C

ACTIVIDAD TRANSCRIPCIONAL EN LT ACTIVADOS Unión Ag-TCR-CD3 Segundos mensajeros Fosforilación de proteínas Transcripción de genes (codifican proteínas involucradas en la activación) (en minutos)

CLASIFICACIÓN DE LOS GENES Inmediatos, Tempranos, Tardíos Proto-oncogenes celulares (c-fos, junc, c-myc) Genes de Citoquinas (IL-2, IFN-  ) Genes para receptores citoquinas (IL-2R,...)

TCR Activación de Células T

Evolución de la Respuesta Inmune Respuesta Inmune: Reconocimiento Activación Proliferación (clon y céls. de memoria) Eliminación del Ag Célula en reposo

ACTIVACIÓN DE LT: MEDICIÓN Producción de citoquinas Actividad mitótica

Mecanismo básico de activación de los LB a) Diapositiva 1 de 2 CD21/CD19 CD22 P53/56 lyn BCR SH 2 p72 syk

Diapositiva 2 de 2 Mecanismo básico de activación de los LB b) Antígeno + C3d PIP3 Btk BLNK Grb2 Ras Sos FL-Cy Ca 2+ PIP2 IP3DAG PK-C Vía de las PTK (Btk, Lyn, syk) Vía de las MAP-kinasa CaM Calcineurina Vía de PK-C Cambios en la expresión genética. Cambios morfológicos y funcionales O Sitio de fosforilación

ACTIVACIÓN DE LB BCR - Reconocimiento antigénico - Transducción de señales LB vírgenes - Vida media corta (semanas) - Contacto con Ag - Activación, Proliferación - Diferenciación a Céls. Plasmáticas Ac

Activación de células NK SLP-76 Célula blanco Ras Sos P13K Grb2LAT FL-Cy1 Ca +2 PK-C PIP2 IP3 DAG Vía de las PTKVía de las MAP-kinasa CaM Calcineurina Vía de PK-C O Sitio de fosforilación Cambios en la expresión genética. Cambios morfológicos y adquisición de funciones citotóxicas y secretora Gads