SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES MEDIANTE CROMATOGRAFÍA EN PAPEL. Profesor.- Daniel MONTILLA CASTILLO. Escuela Europea Luxemburgo I.

FUNDAMENTO: La energía que necesitan los organismos fotosintéticos proceden de la luz. Ésta es captada por los pigmentos que poseen todas las plantas en los cloroplastos. Estos orgánulos contienen una mezcla de pigmentos con diferentes colores: clorofila-a (verde intenso), clorofila-b (verde), carotenos (amarillo claro), xantofilas (amarillo anaranjado),... Estos pigmentos se encuentran en diferentes proporciones, y pueden separarse mediante cromatografía en papel. La técnica se basa en la diferencia de solubilidad de los pigmentos en el disolvente y en el arrastre que ejerce el disolvente sobre los distintos compuestos, que hace que estos se desplacen con distinta velocidad, separándose poco a poco.

MATERIALES Hojas verdes de espinaca y/o otras especies vegetales. Mortero. Tijeras. Embudo con papel de filtro o gasa. Erlenmeyer. Cajas de Petri de cristal. Capilares o micropipetas. Tira de papel cromatográfico o papel de filtro. Acetona. Solución cromatográfica (23 ml de éter de petróleo + 2 ml. De acetona).

PROCEDIMIENTO. 1. Cortar las hojas verdes y colocarlas en el mortero junto con la arena lavada.

2. Empezar a moler (presionando fuerte para destruir las células) y, al mismo tiempo, añadir un poco de acetona (3-4 ml), y seguir triturándolas hasta obtener una pulpa fina. (La arena facilita la disgregación de las estructuras de las hojas).

3. Filtra el preparado sobre un tubo de Erlenmeyer, procurando que la pulpa y la arena se queden en el mortero. (Es mejor utilizar gasa en lugar de papel de filtro).

Ahora tenemos ya el filtrado de clorofila.

4. Cortar el papel de filtro en rectángulos de 10 x 15 cm 4. Cortar el papel de filtro en rectángulos de 10 x 15 cm. Dibujar una ralla con lápiz a un centímetro y medio del extremo. Doblar en V. 5. Con el capilar poner gotas del filtrado de clorofila (o los filtrados si hemos probado con distintas especies) sobre la raya.

6. Poner en la caja de Petri la solución de cromatografgía de modo que cubra el fondo de la caja hasta unos 4 ó 5 mm de altura sobre el fondo de la caja de Petri). 7. Ahora, el papel de filtro doblado en V, se coloca en el fondo de la placa de Petri, con la raya a lápiz paralela al fondo de la caja de Petri.

Inmediatamente, la mezcla disolvente comienza a ascender por capilaridad por el papel, arrastrando los pigmentos.

A los pocos minutos, ya se pueden observar como los pigmentos se van depositando a distintas alturas.

Finalmente podremos observar el depósito de los diferentes pigmentos.

RESULTADOS – CONCLUSIONES - EVALUACIÓN A continuación, medir la altura alcanzada por cada pigmento, y comparar los resultados obtenidos al aplicar la técnica a diferencias especies vegetales. Sacar CONCLUSIONES y realizar una EVALUACIÓN de la práctica realizada.