Coliformes, Coliformes Fecales and E. coli Laboratorio de Microbiologia de Alimentos

Coliformes Aerobicos y facultativos anaerobicos Gram negativo No formadores de esporas Forma de bacilo Fermentan lactosa, con produccion de acido y gas dentro de 48 hr a 35 C

Coliformes- Porque son importantes Organismo indicador (no necesariamente un patogeno) Coliformes fecales Potencial contaminate en carne Patogeno potencial Enterobacter en formula de infantes Coliformes no fecales – agua, suelo, ambiente

Métodos para Detectar Coliformes MPN Basado en probabilidad estadistica NO es contaje directo Técnica líquida Sólido Contaje directo en medio

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MPN - Continuación El objetivo es “diluir el organismo Seleccione la muestra más diluída con todos los tubos positivos y los próximos dos 3,2,1 – Nuestra combinación Determine el MPN utilizando la tabla de MPN

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MPN Puede tambien utilizarse 5 tubos para MPN – Aumenta la exactitud EXACTITUD – Cuan cercano a los valores reales PRECISION – Cuan cercano son los números uno al otro Asegúrate de usar la tabla apropiada

Se asume en MPN Distribución al azar de la bacteria Los organismos no se aglutinan Si hay un microorganismo presente, crecera Existen las condiciones apropiadas para crecer

Ventajas sobre el uso de placas El tamano de la muestra puede ser mayor Mejor para números bajos de organismos El medio líquido es más suave para el organismo porque no se expone al calor Requiere preparación de medio con antelación

Medio - LST Lauryl Sulfate Tryptose Broth Prueba PRESUMPTIVA para coliformes Se informa como “presumptive coliforms/g” Ingredientes Lauryl Sulfate – Algunas bacterias no pueden crecer - Selectivo Lactosa – Producción de gas – Diferencial w/durham tubo NaCl – Aumenta razón de reproducción Tryptona – Fuente de Nitrógeno Incube a 35 C por 48 horas

Medio - BGLB Brilliant Green Lactose Bile Incube a 35 C por 48 horas Producción de gas – Positivo Ingredientes Oxgall – forma de bilis Brilliant Green Dye – Inhibe Gram + Resultados son coliformes confirmados No utilize BGLB directamente – Altamente inhibitorio

Medio – EMB Agar Eosine Methylene Bule Agar Placas ya servidas Estriado para aislar del MPN Ingredientes - Diferencial Peptona – Proteina Lactosa – Produccion de acido Tinte Eosine – Inhibitorio Azul de metileno – Indicador de pH E. coli and Enterobacer Nucleated, dark centered, with or without a metallic green sheen – CONFIRMED COLIFORMS

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Método Sólido VRBA Violet Red Bile Agar Peptone – Nitrogen Source Lactose – Acid Production Neutral Red – Indicator (6.8 red, 8.0 yellow) Crystal Violet – Inhibits Gram + NaCl – Increase Growth Rate Bile Salts

VRBA Típica – Rojo-púrpura, Colonias Elípticas, puede ser una zona de precipitación Se recomiendan placas con 10-100 colonias– Colonias más grandes Ponga una capa de agar luego que la primera solidifique Resultados – Presumptive Coliformes

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