1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos y de amida ( ppm), y de protones de carbono alfa y metínicos (< 5.8 ppm). Int. J. Biol Macromol (2001) 29; Desnaturalización de proteína

2 1 H RMN de insulina. Región de los protones de residuos aromáticos con diferentes concentraciones de ion cinc agregado. Los números indican las veces en exceso que se encuentra el Zn 2+. Unión de ligando a proteína

3 Zhuang, Z, et al (2002) Biochemistry, 41, NMR de 4-Hidroxibenzoil- CoA tioesterasa Unión de ligando a proteína

4 1 H RMN de la proteína nucleocápside HIV-1 (Bombarda, E. et al (2001) J Mol Biol 310, 659). Los diferentes puntos representan los protones del C  de la Cys36 (▲), Cys39 (● y ♦) y Cys49 (■) Propiedades de aminoácidos en proteínas

5 H 2 PO 4 - HPO H + pK a = 6.8 Determinación de pH intracelular

6 buffer Metabolismo de glucosa en E. coli FDP = fructosa 1,6-bisfosfato L = lactato A = acetato E = etanol S =succinato B = buffer Glucosa 13 C-1 50 mM a t = 0

7 Cinética enzimática en mitocondrias intactas fosfato inorgánico (1), fosfocreatina (2), fosfatos ,  y  (3-5) del ATP y fosfatos  y  del ADP (6-7).

8 PNAS, 92: 4748 Calbindina

9 Obtención de estructuras de proteínas por RMN Requisitos [Proteína] ~ 1 mM 0.5 mL estable por al menos 24 h a temperatura ambiente monomérica  c < 10 ns secuencia de aminoácidos Masa molecular... a confirmar

10 Distribución de pesos moleculares de proteínas resueltas hasta 1997

11 Distribución de pesos moleculares de proteínas resueltas hasta 2010

12 Ribonucleasa a 40 mHz JACS (1957) 79:3289 El inicio de la historia

13 Ribonucleasa a 56.4 mHz JBC (1962) 237:1807

14 Ribonucleasa a 60 mHz Science (1967) 157:257

15 Espectros de 1 H RMN de: nucleasa de estafilococo (156 aminoácidos) Inhibidor pancreático básico de tripsina (58 aminoácidos) Magainina 2 (23 aminoácidos)

16 Lisozima

17

18 Asignación de resonancias para grupos laterales

19 Magainina 2 con asignación de señales para una valina

20 Acoplamiento entre protones de amida y protones de C 

21 Medida de acoplamientos y estructura secundaria

22 Los núcleos intercambian constantemente su magnetización a velocidades que dependen de la sexta potencia de su distancia. Si se miden las velocidades del intercambio de magnetización se obtiene un conjunto de distancias internucleares. Este intercambio de magnetización se conoce como efecto nuclear Overhauser (NOE). Efecto nuclear Overhauser

23 Correlación a través del espacio

24 Correlación a través del espacio

25 NOESY región NN Hélice  entre los residuos 89 y 101

26 Contactos lejanos y estructura terciaria sin asignación de secuencia con asignación de secuencia

27 El resultado… Lisozima (1E8L)

28 Los resultados… Lisozima (1E8L)

29 Bibliografía