Determinación de la dosis mínima por inducción de Vtg en 24 horas en Anolis pulchellus Cristine Candelaria, Fabiola Fernández, Lorraine Díaz, Keishla Torres, José A. Cardé Universidad de Puerto Rico, Recinto de Aguadilla ObjetivosMateriales y MétodosDiscusiónReferencias Delete me & place your LOGO in this area. Determinación de la dosis minima por inducción de Vtg en 24 horas en Anolis pulchellus. 1. Cruz JC. Marzo Evaluación del Catán (Atractosteus spatula) como especie monitora de contaminación utilizando bioindicadores bioquímicos [Doctoral thesis]. [Internet]. [Nuevo León, Mx.]: Universidad Autónoma de Nuevo León; citado [2013, Mayo 22]. Disponible en: a_Ra%C3%BAl_Rangel_Frias.pdf a_Ra%C3%BAl_Rangel_Frias.pdf 2. Martínez A, Lavin S, Cuenca R Hematología y citología sanguínea en reptiles. Clin.Vet.Peq.Anim.31: Wikipedia Contributors. Sistema de determinación del sexo [Internet], Wikipedia, The Free Encyclopedia; 2013, Mayo 16, 17:23 UTC [ citado 2013, Mayo 22] Disponible en: minaci%C3%B3n_de_sexo Trasfondo Anolis pulchellus mejor conocido como lagartijo jardinero o lagartijo rayon, el mas comun en la isla. La vitelogenina es una proteína precursora de la yema de huevo se expresa en las hembras de casi todas las especies ovíparas. La presencia del gen Vtg en machos puede ser indicador de contaminantes ambientales. Si la inducción con 17-β Estradiol en machos produce el gen Vtg, entonces por medio de la técnica SDS-PAGE se podría observar las bandas asociadas a las proteínas del gen Vtg que se encuentran aproximadamente a kDa. Hipótesis Recolección de Anolis pulchellus Preparación del reactivo Inducción en Anolis pulchellus Recolección de sangre Preparación de plasma Preparación Biorad Preparación de electroforesis Resultados Figura 1. Biorad Protein Assay (Método Bradford). Determinación de la concentración de µg de proteínas por cada µl de la muestra. La inducción con 17-β- EST sería a una concentración de 5μg, 25μg y 50μg. En el gel de SDS-PAGE se observó la produccion del gen Vtg a concentraciones de 25 y 50, por lo tanto, se tomó la decisión de aumentar las concentraciones. Estas concentraciones no se pudieron confirmar, ya que las muestras se regaban en el "running buffer" o no decendían de forma correcta dentro de la fosa. La concentración preferida para observar la separación correcta de las bandas de vitelogenina es de 7% aunque la concentración en la cual se observó mejor fue de 10%. Atribuyéndole a éstos cambios en el voltaje, o que no se dejaba el tiempo suficiente para que las bandas se definieran o adquirieran más resolución. (Ver Figura #2). Se puedieron observar bandas (Ver Fig.#2 columna 8y 9) lo que indicaba que se indujo la activación del gen ya que activa el receptor estrogénico las gonódas del macho y eventualmente la traducción para la producción de la proteína (Cruz, 2011) Figura 2. SDS-PAGE. Determinaci ón de la presencia y peso molecular del gen Vtg en las muestras utilizando un marcador molecular (LONZA- Positive Unstain Protein, Cat ). Se observó la resolución definida de las bandas de albúmina (50-35 kDa). Confirmamos la producción del gen debido a la presencia de la banda del gen Vtg ( kDa). Proyectos futuros Como proyectos futuros sobre esta investigación sería realizar una confirmación de los datos que se obtuvieron. Además de disminur la concentración de 17-β- EST para saber específicamente cuanto es la cantidad mínima del químico se necesita, para que pueda induccir la producción de vitelogenina. Además verificar el equipo para evitar ese tipo de errores, estandarizar el porciento de los geles. 5- Marcador Molecular 6- Macho Control 7-5 μg de 17-β-EST 8-25 μg de 17-β-EST μg de 17-β-EST 10- Loading Buffer kDa