Introducción al estudio de la Histología y Morfología Celular Professor: Verónica Pantoja . Lic. MSP. “Kinesiologia” Objetivo : Especificar las herramientas que utiliza la histología para el estudio ultraestructural de tejidos y de la célula como unidad morfológica y funcional del organismo IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014 ¿Qué es la Histología? Etimológicamente: histo= tejido logos: estudio Es la rama de la biología encargada del análisis microscópico de la anatomía celular y tisular de los tejidos biológicos. Marcello Malpighi es reconocido como el fundador de la Histología Las primeras investigaciones histológicas se hicieron en el siglo XVII gracias a la invención del microscopio óptico por Antonio Van Leeuwenhoek IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014 Obtención de la muestra de material humano: El material humano puede provenir de tres fuentes: Las necropsias, las biopsias y las piezas operadas. Necropsias Son las piezas que se obtienen de un cadáver. IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014 Biopsias Son trozos de tejido que se obtienen de un sujeto con vida con el objeto de estudiarlos al microscopio y efectuar un diagnóstico histopatológico. Piezas operadas Los tejidos que han sido extraídos de las intervenciones quirúrgicas, generalmente tumores u órganos inflamados, también pueden darnos material de investigación. IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

METODOS HISTOLOGICOS: 2- Examen mediato o post-morten: 1-Examen inmediato o in vivo: a) En fresco: animales unicelulares y células libres. b) Coloración vital: usando soluciones de colorantes no tóxicos (colorantes vitales), coloración intravital o in vivo, y la coloración supravital, donde pueden colorearse células libres o porciones de órganos. Requiere de la muerte celular y supone seguir una serie de pasos, la Técnica histológica IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014 PASOS DE LA TECNICA: 1.Obtencion del material 2.Fijacion 3.Inclusion 4.Obtencion del corte 5.Coloracion 6.Montaje Deshidratación Aclararamiento IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014 1- Obtención del material: Pueden provenir de: * biopsias quirúrgicas * material obtenido de necropsias * utilizando animales de laboratorio * estudios experimentales en animales * material de cultivos de tejidos * frotis o extendidos IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014 2- Fijación Es el proceso Físico (Histoquímico) que logra una situación estable de los constituyentes tisulares, interrumpiendo las reacciones enzimáticas de autólisis. IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

Cualidades de un buen fijador: 1) Actuar con rapidez y detener los procesos autolíticos. Poder de penetración. Conservación 4) No interferir y facilitar los procesos posteriores. 5) Endurecer el tejido y darle mayor consistencia. 6) Insolubilizar los componentes de los tejidos. 7) No producir estructuras artificiales. IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

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Mecanismo de acción de los fijadores: Por reducción, al contacto co la sustancias orgánicas Formando un precipitado fino: Ácido ósmico,bicloruro de mercurio. Por coagulación de las proteínas, sin combinarse con ellas: alcohol, formol, ácido Pícrico, etc. FIJADORES Formando combinaciones químicas con las sustancias orgánicas: ácido crómico, bicromato de potasio, de amoniaco, etc Por oxidación: bicromato de potasio. IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014 3- Inclusión Es impregnar la pieza con una sustancia que le confiere dureza y permite obtener cortes uniformes y delgados. En la técnica corriente, se utiliza la parafina; que es insoluble en agua, está condicionada por la extracción de toda el agua del material a incluir. Los pasos de la inclusión son los siguientes: XILOL IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014 Confección del taco: Es la inclusión definitiva del trozo de tejido. Se utiliza un molde metálico especial denominado barras de Leuckart, donde se vierte parafina liquida (60°C). IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014 4- Obtención del corte Para obtener cortes finos se utilizan aparatos denominados micrótomos, hay varios tipos. Tipo Minot: (Mas Usados) dispone de 4 posiciones de ajuste, según el corte sea de 1-10 µm, 11-20 µm, 21-30 µm o 31-40 µm así como ajuste del ángulo de la cuchilla graduado, inmovilización de la rueda y mecanismo de avance de gran precisión IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014 Montaje del corte: Se colocan sobre una platina con agua caliente. Luego se levantan los cortes con un portaobjeto, se extiende sobre una película de Albúmina de Mayer, que es una mezcla de partes iguales de albúmina de huevo, glicerina con un cristal de timol. Los portaobjetos con los cortes adheridos se llevan a la estufa. IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014 5 COLORACION: Los colorantes se pueden clasificar de diferente manera: 1-Colorantes naturales: a) animales: carmín. b) vegetales: hematoxilina, orceina. 2-Colorantes artificiales o sintéticos: (colorantes de anilina). a) ácidos: Son colorantes citoplasmáticos. b) básicos: Son colorantes nucleares. c) neutros: Tiñen citoplasma y núcleo de diferente color 3-Colorantes indiferentes: no forman sales. Sudan III, rojo escarlata, etc. Sustancias basofilas se tiñen con los colorantes básicos Sustancias acidofilas se tiñen con los colorantes ácidos Sustancias neutrofilas se tiñen con los colorantes neutros. IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

Los pasos de la coloración son: a) Desparafinización: b) Hidratación: c) Coloración propiamente dicha IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

6) Montaje final Las fases del montaje final son: Deshidratación: mediante la acción de alcoholes de gradación creciente: 70°, 80°, 90° y 100°, sucesivamente. b) Homogenización o aclaración: se emplea el benzol o xilol a los que se le puede agregar ácido carbónico o fénico para aumentar su eficacia, estos son muy ávidos de agua. c) Colocación del cubreobjeto: con el objeto de proteger el preparado, se la recubre con una laminilla de vidrio de 0,2 mm de espesor, o cubreobjeto. Para adherir el cubreobjeto al portaobjeto, se emplea una resina, el Bálsamo de Canadá. IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

Antes de evaluar ¿PREGUNTAS, DUDAS, COMENTARIOS? IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014

IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014 Responda 1.Nombre dos pasos de la técnica histológica. 2.De dos características de un buen fijador 3.¿Cual es la función de un fijador? 4.¿Como se llama el instrumentos para cortar el taco con la muestra.? 5.Nombre un colorante 6.Nombre una fase del proceso de montaje final y explíquela. IPCHILE - DOCENTE: Veronica Pantoja S. 2014