Cartografía del genoma en eucariotas. II. Mapa físico Tema 11 Cartografía del genoma en eucariotas. II. Mapa físico 1. Hibridación somática interespecífica - Híbridos somáticos - Concordancia y discordancia 2. Hibridación “in situ” cromosómica - FISH 3. Secuenciación 4. Mapeo comparativo
HIBRIDACIÓN CELULAR SOMÁTICA INTERESPECÍFICA homocariontes hamster(2n=44) homocariontes humano(2n=92)
Mapeo mediante celulas híbridas: un ejemplo
* Tienen el factor a mapear y el cromosoma ( +/+ ) CLONES CONCORDANTES % CONCORDANCIA * Tienen el factor a mapear y el cromosoma ( +/+ ) * No tienen el factor a mapear y tampoco está presente el cromosoma ( -/-) CLONES DISCORDANTES % DISCORDANCIA * Tiene el factor y no el cromosoma (+/ -) * No tienen el factor y si el cromosoma ( - / + )
Localiza el gen en una banda o zona cromosómica HIBRIDACIÓN “ IN SITU” Localiza el gen en una banda o zona cromosómica ( > poder de resolución ) Leucocitos en metafase (bandas G) Desnaturalización DNA cromosomas (formamida) Hibridación con sonda específica Antes : marcada con 3H Ahora: marcada con fluorescencia (FISH) (sonda con nucleótidos unidos a la biotina. El fluorocromo se unirá a la biotina y será visible en un microscopio de fluorescencia)
CARTOGRAFÍA COMPARADA