Biología 2009 Biotecnología Técnica de transferencia de genes Catalina Bonadeo José Hereñu
Etapa 1: obtener el gen para la transferencia: Las enzimas de restricción se utilizan para cortar el gen útil que debe ser transferido.
Etapa 2. Preparar un vector para el gen transferido: “plasmidos” son pequeñas moléculas de ADN circulares encontradas en bacterias Estas se pueden reducir con la misma enzima de restricción que la anterior Los “plasmidos” se pueden reducir en sitios particulares, llamados sitios de restricción.
Etapa 3: ADN recombinante ( Esquema con referencias ) (a) plasmid que será el vector (b) plasmid se reduce en el sitio de reducción Pstl. (c) La fuente de ADN se reduce con la misma enzima de reducción que la del plasmid (d) ADN recombinante (e) plasmid no se ve afectada Vectores de expresión: generalmente si al gen eucariota se inserta en el genoma de la Célula procariota que hacer muy poco del producto gen deseada. Por lo tanto, se incluyen factores adicionales en vector de la plasmid 'paquete' que incluye los tipos de RNA. El plasmid final como trazada anteriormente que contienen estas factores adicionales que se llama una "expresión de los vectores '.
Etapa 4. Aislamiento de las células transformadas Se introduce el ADN recombinante en las celdas de host · Muchas células no son transformadas · algunas células se transforman para contener el ADN recombinante. · estas células transformadas deben separarse de las no transformadas
Etapa 5. Fabricación de productos Las células bacterianas transformadas están aisladas. · se introducen en un Fermenter ser clonada. · la población bacteriana crece por asexual reproducción. · el ADN recombinante es copiado junto con el resto del genoma bacteriano. · en un fermenter las condiciones para crecimiento y reproducción están controlados. · una vez que las bacterias expresan el gen transformado el producto es producido. · el siguiente paso (largo) es aislar y purificar el producto. Esto se denomina río abajo de procesamiento.