REPLICACIÓN VIRAL
1. Fijación, penetración y pérdida de la cubierta (Fase de Iniciación): Consiste en la unión del virión con un sitio receptor específico de la superficie celular. Las moléculas receptoras difieren para los distintos virus (son proteínas en algunos y oligosacáridos en otros) Penetración, viropexia o fagocitosis. Después de la fijación la partícula viral entra en la célula. En algunos sistemas, se efectúa por endocitosis mediada por receptores, con captación de las partículas virales ingeridas dentro de endosomas. La pérdida de la cubierta ocurre de manera concomitante con la penetración o poco después de la misma. En este momento se pierde la infectividad del virus original.
2. Síntesis de los componentes virales: (Fase de Replicación) Poco después de quedar descubierto el genoma viral, se inicia la fase sintética del ciclo de replicacíón del virus. consiste en que deben transcribirse los RNA específicos del ácido nucleico viral para que se exprese y duplique con éxito la información genética. Los sitios intracelulares en los que ocurren los diferentes acontecimientos de la replicación viral, varían de un grupo a otro. Es posible plantear algunas generalizaciones: Las proteínas virales se sintetiza en el citoplasma, sobre los polirríbosomas compuestos por RNAm específico del virus y ribosomas de la célula huésped El DNA viral suele replicarse en el núcleo. El RNA genómico viral se duplica generalmente en el citoplasma celular, aunque hay excepciones.
3. Morfogénesis y liberación: (Fase de Liberación) Los genomas virales recién sintetizados y los polipéptidos de la cápside se ensamblan para formar los virus descendientes. las nucleocápsides de los virus de simetría helicoide no pueden formarse sin RNA viral. Los virus cubiertos maduran por un proceso de gemación. Se insertan glucoproteínas de cubierta específica del virus en las membranas celulares y, a continuación, las nuclecocápsides hacen gemación a través de la membrana a nivel de estos sitios modificados y, al hacerlo así, adquieren su cubierta. Los virus cubiertos no son infecciosos hasta que han adquirido sus cubiertas. Pueden acumularse cantidades excesivas de componentes virales y participar en la formación de cuerpos de inclusión en la célula. Como resultado de los profundos efectos dañinos de la replicación viral, se desarrollan por último efectos citopáticos celulares y la célula muere. Aunque a veces la célula no muere.
MÉTODOS DE ESTUDIO
CULTIVOS CELULARES conjunto de técnicas que permiten el mantenimiento de las células 'in vitro', manteniendo al máximo sus propiedades fisiológicas, Bioquímicas y genéticas.
a. Cultivo de órganos. Implica que la arquitectura característica del tejido 'in vivo' se mantiene al menos en parte. Para ello el órgano se mantiene en un medio del que obtiene los nutrientes y al que puede liberar los desechos y en el que mantiene su estructura tridimensional, en general esférica.
c. Cultivo celular. Supone una disgregación celular ya sea por medios enzimáticos o mecánicos. La suspensión celular se puede cultivar como una monocapa adherente o en suspensión en el medio de cultivo. Este tipo de cultivo permite su propagación, aumentando notablemente la masa celular del cultivo a lo largo de las generaciones. la población se hace uniforme y homogénea al predominar en el cultivo aquellos tipos celulares que tienen superior tasa de crecimiento.
Las denominadas células diploides, obtenidas de embrión humano (Wi-38, MRC-5), se propagan en pases sucesivos de hasta unas 50 veces, manteniendo sus características cromosómicas sin presentar signos estructurales de modificación. Para su desarrollo exigen de líquidos nutritivos compuestos de soluciones salinas balanceadas, enriquecidas con suero bovino fetal, aminoácidos, extracto de levadura, vitaminas y otros. El crecimiento se logra en láminas excavadas, tubos o frascos especialmente diseñados, mediante siembra en pequeños fragmentos, mejor aún en células aisladas a través de la digestión del tejido por acción de enzimas proteolíticas (tripsina), que dará como resultado una capa delgada (manocapa de Dulbecco) o simplemente células en suspensión.
Cuando se establecen cultivos sucesivos, o "lineas", las células pierden gran parte de sus características morfológicas y metabólicas, para convertirse en los llamados fibroblastos o epiteliales. Existen diferentes líneas celulares en el mercado internacional ejmplo: Hep-2, BHK (hamsters), HELA y KB (derivadas de carcinomas humanos
BHK: Fibroblastos de riñón de hamster sirio dorado CrFK: Fibroblastos de riñón de gato doméstico MDCK: Epitelio de riñón canino (Cocker Spaniel) CHO: Epitelio de ovario de hamster chino VERO: Fibroblastos de riñón de mono verde africano HeLa: Epitelio tumoral de cuello uterino humano MDBK: Epitelio de riñón de bovino adulto HUVEC: Endotelio de vena umbilical humana FHBE: Endotelio de corazón fetal bovino
Existen diferentes vías de inoculación pueden ser: Membrana corialantoidea, saco amniótico, saco o cavidad alantoidea y saco vitelino, entre otras
Inoculación en animales Los animales se emplean en el aislamiento e identificación de los virus, comprobación de la inocuidad y poder protector de vacunas (poliomielitis), elaboración de éstas (rabia, viruela), su importancia se restringe cada vez más por los avances logrados con los cultivos de tejidos. Se emplean monos, conejos, aves, ratas y ratones; estos últimos más que ningún otro. Las vías de inoculación son diversas (intracerebral, nasal, peritoneal, venosa, dérmica y por escarificación), y las cantidades a inyectar varían con las vías de administración. La acción se manifiesta por lesiones locales y síntomas generales, cambios patológicos dependientes del tipo de virus (vesículas, neumonías, encefalitis, cuerpos de inclusión, meningitis y otros).
Plantas indicadoras:- Los virus de plantas suelen ser transmitidos en condiciones de laboratorio a diferentes plantas de ensayo donde pueden ser observados los síntomas típicos que estos provocan