PROTEINAS RECOMBINANTES El ADN recombinante es una molécula de ADN formado por recombinación de fragmentos de ADN de orígenes diferentes. La (o las) proteína que codifica es una proteína recombinante. Se construye mediante la unión de un fragmento de ADN de origen diverso a un vector. El vector “se abre” por un sitio específico, se le inserta entonces el fragmento de ADN de origen diverso y se cierra de nuevo. El ADN recombinante se multiplica en un célula huésped en la que puede replicarse el vector

Aspectos generales sobre la producción de proteínas recombinantes Identificación y clonación del gen de interés. Elección del sistema de expresión adecuado. Clonación del gen de interés en un vector compatible con el sistema de expresión elegido.

Los sistemas de expresión se pueden clasificar en dos grandes categorías: Procariotas Escherichia coli Bacillus subtilis 2. Eucariotas Levaduras: Saccharomyces cerevisiae Hongos filamentosos : del género Aspergillus Insectos/baculovirus Células de mamífero

Los elementos que debe llevar un plásmido de expresión son:

PREGUNTAS PARA EL GRUPO 1. ¿Cuál es el sistema y el vector de expresión que están utilizando en la práctica? 2. ¿Qué proteína se desea producir? 3. ¿Cómo sabrán que se llevó a cabo la inducción?

¿Cuál es el sistema y el vector de expresión que están utilizando en la práctica? Sistema de expresión : Escherichia coli Vector de expresión: vector pET

Gen resistencia a kanamicina Elementos del vector pET: Promotor de la RNA polimerasa T7 Región operadora del operón LAC Gen que codifica para la proteína represora I del operón LAC Gen resistencia a kanamicina

Cromosoma de Escherichia coli El sistema de expresión también debe tener las siguientes características: Cromosoma de Escherichia coli

Organización del operón lac de Escherichia coli

Operón lac, es un sistema inducible que está bajo control negativo, de manera que la proteína reguladora, producto del gen regulador i, es un represor que impide la expresión de los genes estructurales en ausencia del inductor. El inductor del sistema es la lactosa.

El verdadero inductor del sistema es la Alolactosa En presencia del inductor (la lactosa), este se une a la proteína reguladora que cambia su conformación dejando libre la región operadora para que la ARN-polimerasa tenga un libre acceso a la región promotora y se transcriban los genes estructurales

Análogos de la lactosa

¿ Qué está ocurriendo durante la incubación en presencia de IPTG?

RESULTADOS DEL SEMESTRE PASADO 30 60 90 120 30 60 90 120 min