Tinción Histológica Tutora: TM Solange Zapata Universidad de Chile Facultad de Medicina Curso Histopatología 2007 Tinción Histológica Tutora: TM Solange Zapata Residente: Dr Jorge Chamorro Ruiz 3 de Mayo del 2007

Técnica Histológica Fijación Deshidratación Aclaramiento Inclusión Corte Tinción Montaje Seminario Anterior

Tinción y Montaje Corte Desparafinado – Rehidratación Tinción Deshidratación Montaje Cubreobjetos: funciones Protección del tejido ↓ refracción de luz polarizada

Colorantes ¿Por qué colorear una muestra? Los diversos elementos de los tejidos poseen prácticamente el mismo índice de refracción, lo que hace que el reconocimiento de distintas estructuras sea una tarea difícil.

Definición de Colorante Un colorante es un cuerpo coloreado que puede comunicar su color a otro cuerpo. La coloración es la propiedad que tienen ciertos cuerpos de ejercer una absorción selectiva sobre la luz. Dicho de otra manera un cuerpo se ve de tal color porque trasmite por transparencia o por difusión las radiaciones complementarias de las que él absorbe.

Tipos de Colorantes Colorantes que diferencian los componentes ácidos y básicos de la célula. Colorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz extracelular. Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y forman depósitos de metales en ellos.

Tipos de Coloraciones Directas: se producen por inmersión en el baño colorante. Indirectas: en este tipo de coloración, el colorante no puede actuar directamente, el objeto a colorear debe ser tratado de antemano por otra sustancia que lo prepare para admitir el colorante, esta se llama mordiente.

Fundamentos Químicos de la Coloración Clasificación colorantes según afinidad: Colorantes nucleares o básicos: su componente colorante activo es una base coloreada que se combina con los ácidos nucleicos. Colorantes citoplasmáticos o ácidos: su componente activo es un ácido coloreado que se combina con el citoplasma. Colorantes neutros, tanto el ácido como la base son coloreadas.

Colorantes básicos ANILINA+ Cl- Los colorantes básicos reaccionan con los GRUPOS ANIÓNICOS de los componentes texturales, que son los grupos fosfato de los ácidos nucleicos (ADN y RNA), los grupos SULFATO de los glucosaminoglucanos y los GRUPOS CARBOXILO de las proteínas. La reacción de estos grupos varía según el pH.

Colorantes ácidos Na+ ANILINA- Los colorantes ácidos se unen primariamente a los componentes texturales por medio de enlaces electrostáticos de manera similar pero opuesta a la de los colorantes básicos. Las anilinas ácidas reaccionan con grupos catiónicos, como los grupos amino ionizados de las proteínas.

Entonces: Elementos que se tiñan con colorantes básicos (ej. Hematoxilina) son basófilos: La Heterocromatina y los Nucleolos por los grupos Fosfato ionizados. Ergatoplasma por grupos Fosfato ionizados. Matriz del Cartílago por grupos Sulfato ionizados Elementos que se tiñan con colorantes ácidos (ej. Eosina) son acidófilos: La mayor parte del citoplasma no especializado. Filamentos Citoplasmáticos. Fibras extracelulares. Todos estos debidos a grupos Amino ionizados.

Metacromasia Fenómeno por el cual un colorante cambia de color tras reaccionar con un componente textural. Se debe a que en tejidos con altas concentraciones de POLIANIONES, la molécula del colorante se polimeriza entre si y sus propiedades de absorción son diferentes de las propiedades de las moléculas individuales. Cromótropos: Glucosaminoglucanos sulfatados, nucleoproteínas, cartílago, gránulos de los mastocitos. El cristal violeta también genera metacromasia al teñir amiloide Azul de Toluidina tiñe gránulos mastocito púrpura

Tinción (coloración) de cortes Diferentes componentes celulares y tisulares poseen diferentes afinidades tintoriales.

Tinción (coloración) de cortes

Hematoxilina-Eosina Técnica de tinción más usada. Hematoxilina: Colorante natural. Propiedades similares a las anilinas básicas. Tiñe todas las estructuras celulares, pero principalmente el núcleo (Histonas). Eosina: Colorante ácido. Acción es la de una anilina ácida. Tiñe ppalmente citoplasma celular.

Cortes de piel Tinción Hematoxilina-Eosina

Técnica de Tinción H/E Tinción con hematoxilina. Lavado con abundante agua. Aplicar Borato de Potasio. Cambia el color generado por la hematoxilina del morado al azul. Aumenta el contraste de color.

Técnica Tinción H/E II Eosina Diferenciación: Azuleamiento: Eliminación selectiva del exceso de colorante. Se obtiene pasando el corte por un baño de alcohol ácido. Resalta núcleos. Azuleamiento: La tinción queda de color rojizo se vira a azul intenso Sumerge la placa en agua corriente alcalina o carbonato de litio al 1% en agua. Eosina Obtenemos núcleos azules, citoplasma rosado y colágeno y fibras musculares rosado pálido.

Cubre-objeto Una vez teñido el tejido debe ser protegido con un cubre-objeto. Deshidratar Medio de montaje

Limpieza de láminas

Análisis de placas TÉCNICAS ESPECIALES DIAGNÓSTICO ±10% biopsias 80-90% bp

Tinciones Especiales

Tinciones para Amiloide Rojo Congo (cortes ±30 mm) H/E

Tinciones para Amiloide Birrefringencia

d FITE: bacilos ácido resistentes Bacterias c c Gram negativo: colonias bacterianas se tiñen rojas a d b a y b Gram positivos: tinción azul d FITE: bacilos ácido resistentes se tiñen rojo

Bacterias II Ambas placas con tinción Ziehl Neelsen Bacilos ácido resistentes se tiñen rojo brillante

Calcio Von Kossa-Azul Toluidina Von Kossa: depósitos de calcio Se tiñen café oscuro-negro

Colágeno I: proteína extracelular, predominante en dermis, función estructural b b e a a y b Picrosirius: Colágeno I color amarillo-rojizo e Van Gieson: colágeno I rojo d c c y d Tricromico Masson: colágeno I verde

Colágeno III: o fibras de Reticulina, en dermis perineural, perivascular Impregnación con Nitrato de Plata: fibras de reticulina se tiñen negras

Eosinófilos Tinción Giemsa, eosinófilos se ven rojos

Fibras elásticas HE Orceína ácida de Pinkus/Giemsa: fibras de coloración pardo oscura

Fibrina ambas, Tinción de Picro-Mallory: Fibrina se tiñe rojo claro También PAS

Hemosiderina a Gránulos de Hemosiderina sin teñir, de colora ción amarillo-café birrefringentes a b Ferrocianuro de Potasio de Perls: azul b

Hongos b b b PAS para Criptococo (rojo) a a Mucicarmin para teñir Criptococo: hongos de coloración azul-violácea c Tinción de PAS evidenciando Blastomicosis c c

Hongos II c Tinción de Gomori para Criptococo c a a PAS esporas fungicas b PAS Coccidiomicosis en ambas, hongos se tiñen rojos b

Lípidos sólo en tj fijado en formalina + cortes por congelación b b Sudan III: adipocitos rojos a a Sudan IV: adipocitos anaranjados c c Sudan black b: Lípidos azul-negruzcos

Mastocitos ambas, Tinción con Azul de Toluidina: gránulos de Mastocitos azul-púrpura (metacromasia)

Mastocitos ambas, Tinción de Giemsa, donde los gránulos de los Mastocitos son teñidos púrpura

Melanina ambas, Tinción de Fontana Masson pigmento melánico se tiñe negro

Principales colorantes

Tricrómico de Masson Principal Uso: Colágeno. Tiñe: Colágeno Verde. Núcleo, músculo y nervios  Rojo oscuro. Citoplasma  amarillo

Van Gieson Principal Uso: Tejido Fibroso Tiñe: Colágeno  rojo. Núcleo  azul negro Músculos, nervios  amarillos (+Verhoeff) fibras elásticas  negro

Fontana Masson Principal Uso: Melanina Tiñe: Melanina  Negro.

Plata Metenamina Principales Usos: Hongos y Cuerpos de Donovan Tiñe: Paredes micóticas  Negros. Cuerpos de Donovan  negro

PAS Principales Usos: Glucógeno, MPS neutros y Hongos, Membrana basal. Tiñe: Glucógeno  Diastasa lábil. MPS neutros y Paredes micóticas  Diastasa resistentes.

Reacción positiva para glucógeno y polisacáridos neutros. Reacción positiva sólo para polisacáridos neutros. + DIASTASA

Azul alcián Principal Uso: Mucopolisacáridos ácidos Tiñe Mucopolisacáridos ácidos (mucina) Azul.

Azul de toluidina Principal Uso: Mucopolisacáridos ácidos Tiñe Mucopolisacáridos ácidos  Purpura metacrómico.

Giemsa Principales usos: Gránulos mastocitarios, MPS ácidos, eosinófilos, leishmanias, médula ósea Tiñe: Gránulos mastocitarios, Mucopolisacaridos ácidos  Púrpura. Eosinófilos, leishmanias  Rojo. Eosinófilos en mucosa gástrica

Ferrocianuro de Potasio de Perls. Principal Uso: Hemosiderina Tiñe: Hemosiderina  Azul

Rojo Congo Principal Uso: Amiloide. Tiñe Sustancia amiloide  Roja con luz, Verde con luz polarizada

Von Kossa Principal Uso: Calcio Tiñe: Calcio  Negro.

Naftol AS-D cloroacetato esterasa Principal Uso: Mastocitos y Neutrófilos Tiñe: Gránulos de mastocitos y neutrófilos Rojo

Orceína ácida de Pinkus/Giemsa Principal Uso: Fibras elásticas. Tiñe: Fibras elásticas  Pardo oscuro.

Histopatología es como la espada del augurio hacen ver más allá de lo evidente