Crecimiento Bacteriano MICROBIOLOGÍA PRACTICA

Crecimiento microbiano Tiene lugar en dos niveles: La célula sintetiza nuevos componentes celulares, e incrementa su tamaño. El numero de células de la población se incrementa.

Crecimiento Bacteriano Aumento de número (no de tamaño) Multiplicación bacteriana: fisión simple o binaria Elongación Auto duplicación de ADN cromosómico Tabicado central Invaginación membrana celular Síntesis de pared

Efecto de la concentración de sustrato en el crecimiento máximo de microorganismos. Conforme la concentración de sustrato se incrementa, también lo hace la producción máxima de microorganismos.

Fisión binaria de una bacteria en forma de bacilo a) Célula joven b)La célula madre alarga su pared y membrana celular. Se empieza a formar un septum y el cromosoma se duplica. c)Los cromosomas duplicados se colocan en lados opuestos de la célula. d)El septum es sintetizado completamente y la membrana celular se separa en dos células distintas. e) Las células hijas se dividen.

Matemáticas del crecimiento de una población a)Empezando con una célula, si cada producto de la reproducción se divide por fisión binaria, la población se doblara con cada nueva generación. Este proceso puede ser representado con logaritmos (2 elevado a un exponente). b)Al dibujar el log de las células se produce una línea que indica el crecimiento exponencial: si se dibuja el numero de células aritméticamente, se obtiene una línea curva.

Curva de Crecimiento Bacteriano Bacteria en medio adecuado Gráfico de coordenadas: número de bacterias (logaritmo) versus lapso de tiempo. Distinta para cada bacteria En todas se identifican cuatro etapas

Fase de Latencia El número de microorganismos no varía Adaptación al medio, producción de enzimas Tiempo variable: entre una hora a días. Tamaño relativo aumentado por división

Fase exponencial o de crecimiento logarítmico Relación casi lineal entre el tiempo y el número de elementos. Actividad metabólica incrementada Depende del tiempo de generación de cada bacteria Los antimicrobianos son mas activos Puede haber variaciones entre el crecimiento in vitro e in vivo.

Fase Estacionaria En determinado punto el crecimiento disminuye La población no aumenta Células nuevas reemplazan a las células muertas Actividad metabólica mas lenta Células en animación suspendida Producción de metabolitos secundarios Antibioticos Toxinas Fase de Esporogenesis para las especies productoras de esporas

Fase de declinación o muerte Recuento de células disminuye sensiblemente El numero de células muertas supera al número de células vivas Acumulación de productos tóxicos Disminución de nutrientes Aparición rápida : autolimitar diseminación infecciones

Curva de crecimiento bifásica

RECUENTO BACTERIANO

CONTEO DE CÉLULAS VIABLES ALIMENTO CAJA PETRI MICROSCOPIO La célula viable es aquella capaz de dividirse y formar una colonia en el medio de cultivo. Se basa en que cada colonia surge de una simple célula. Cada colonia contiene una sola especie bacteriana.

RECUENTO BACTERIANO

CONTEO DE CÉLULAS VIABLES El número de bacterias viables por muestra se expresa en: UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS (UFC) Representa cada colonia contada y su número total representa el número total de bacterias viables en la muestra.

DETERMINACIÓN No. UFC Método de vertido en placa Método de extensión

CONTEO DE CÉLULAS VIABLES MÉTODO DE EXTENDIDO EN PLACA Es el método de elección para anaerobios facultativos y cultivo de microaerófilos.

CONTEO DE CÉLULAS VIABLES MÉTODO DE VERTIDO EN PLACA. Esta técnica se usa generalmente para bacterias aerobias obligatorias.

CONTEO DE CÉLULAS VIABLES Útil para la técnica de vertido en placa o extensión en placa. Se siembran volúmenes conocidos de cada dilución Luego se incuba a 35 – 37 0C durante 24 – 48 horas.

TÉCNICAS DE RECUENTO Finalizado el tiempo de incubación, se realiza el recuento. Se toman en cuenta únicamente aquellas cajas Petri que tengan entre 30 y 300 colonias. Este número de colonias es estadísticamente representativo. Aquellas placas que tengan más de 300 colonias se reportan como “INCONTABLES”.

TÉCNICAS DE RECUENTO Para el recuento bacteriano se puede usar cuentacolonias.

RECUENTO CON CUENTACOLONIAS Puede ser contada toda la placa o por cuadrantes. Cuando la carga bacteriana es alta, se toma en cuenta un cuadrante con carga alta, un cuadrante con carga media y un cuadrante con carga baja. Se realiza la sumatoria de los tres cuadrantes y se saca el promedio. Finalmente el promedio se multiplica por 65 No. Colonias = (CA + CM + CB /3) * 65

CA = 32 CM = 19 CB = 10 Sumatoria Σ = 61 Promedio 61/3 = 20.33 Factor = 20.33*65 = 1322

OBTENCIÓN DE RESULTADOS Terminado el conteo por cualquier método, se debe aplicar la siguiente fórmula para obtener el No. de UFC/ ml o UFC/g. UFC/ml ó UFC/g = No. de colonias por placa X el factor de dilución * ml de la muestra sembrada *Factor de dilución: inversa de la dilución.

EJEMPLOS EJEMPLO 2 EJEMPLO 1 No. de colonias: 56 No. de colonias: 280 Dilución: 10 -4 Volumen de siembra: 0.2 ml UFC/ ml = 56 X 10000 /0.2 UFC/ ml= 2 800.000 EJEMPLO 1 No. de colonias: 280 Dilución: 10 -3 Volumen de siembra: 1 ml UFC/ ml = 280 X 1000 /1 UFC/ ml= 280.000

UFC / ml parámetro = UFC / ml dilución A + UFC / ml dilución B Cuando se realiza más de una dilución para cada uno de los parámetros se garantiza los resultados obtenidos. Este método disminuye el margen de error y valida la calidad de las pruebas. Para obtener los resultados por duplicado se aplica la siguiente fórmula: UFC / ml parámetro = UFC / ml dilución A + UFC / ml dilución B 2

EJEMPLOS Ejemplo 1 Dilución A: 5 600.0000 Dilución B: 6 000.000 Resultado : 5 600.000 + 6 000.000 / 2 = 5 800.000 UFC / ml FLORA TOTAL Ejemplo 2 Dilución A: 1 245.647 Dilución B: 2 340.500 Resultado: 1 245.647 + 2 340.500 / 2 = 1 793.074 UFC / ml FLORA COLIFORME

Otros métodos Directos Filtración Método del número más probable Recuento microscópico directo

Métodos indirectos Turbidimetría Actividad metabólica Peso seco