Selección de cepas de hongos entomopatógenos para el control de Demotispa neivai Bondar (Coleoptera: Chrysomelidae) Luis Guillermo Montes Bazurto1; Angie Barragán Ferreira2; Alex Enrique Bustillo Pardey3. 1. Investigador auxiliar, Programa de Plagas y Enfermedades, Cenipalma, lmontes@cenipalma.org; 2. Investigador Auxiliar, Programa de Plagas y Enfermedades, Cenipalma, abarragan@cenipalma.org; 3 Coordinador Programa de Plagas y Enfermedades, Cenipalma, abustillo@cenipalma.org Introducción El raspador de frutos de la palma de aceite Demotispa neivai Bondar (Coleoptera: Chrysomelidae) es una de las plagas de mayor importancia en el cultivo de la palma de aceite en Colombia, especialmente en plantaciones ubicadas en la Zona Central. El daño es causado por las larvas y los adultos al alimentarse de la epidermis de los frutos (Fig. 1). La lesión en los frutos de materiales Elaeis guineensis, causa pérdidas en cosecha y en la tasa de extracción de aceite que hacen de D. neivai una plaga de importancia económica en el cultivo de la palma de aceite. Resultados Bioensayo de patogenicidad. De las 50 cepas evaluadas 28 fueron patogénicas a adultos de D. neivai (Tabla 1). Las cepas CPMa1502 y CeMa9236 causaron las mayores mortalidades en condiciones de confinamiento sobre adultos 95 y 50%, respectivamente, y fueron estadísticamente diferentes (P<0.0001) (Fig. 2A). Del mismo modo, las dos cepas también fueron patogénicas a larvas de D. neivai y causaron una mortalidad de 96 y 84%, respectivamente y no mostraron diferencias estadísticas entre ellas pero si con el testigo (P<0.0001) (Fig. 2B). Tabla 1. Cepas de hongos entomopatógenas patogénicas a adultos de Demotispa neivai. En la Colección de Microorganismos Asociados a la Palma de Aceite de Cenipalma, se cuenta con cepas de hongos entomopatógenos aisladas de diferentes insectos plagas que pueden ser promisorias para el control del raspador de frutos, sin embargo, los hongos entomopatógenos son específicos, por lo tanto, se planteó la realización de bioensayos para seleccionar cepas de hongos entomopatógenos eficaces para el control de D. neivai en plantaciones de palma de aceite. B A Figura 1. Racimos de palmas de aceite. A. Racimo de Elaeis guineensis afectado por Demotispa neivai. B. Racimo de híbrido interespecífico afectado por Demotispa neivai (Elaeis oleifera x Elaeis guineensis). Materiales y métodos Bioensayos de patogenicidad. Se realizó en laboratorio en ocho bioensayos independientes. Se evaluaron 30 cepas (10 cepas de Beauveria bassiana, una de Isaria fumosorosea, seis de Isaria sp., 30 de Metarhizium anisopliae, una de Nomuraea rileyi y dos de Purpureocillium lilacinum). Las unidades de observación estaban constituidas por un tubo de PVC de 3 pulgadas de diámetro y 5 cm de alto; que en uno de sus extremos tenía muselina pegada con silicona y en el otro muselina ajustada con una banda de caucho. En cada bioensayo, los hongos reactivados se inocularon sobre adultos con una suspensión de conidias que contenía 1x107 conidias/ml mediante inmersión durante 1 min. Posteriormente, las dos cepas que causaron las mayores mortalidades en adultos, se evaluaron sobre larvas. La inoculación de las larvas se realizó depositando sobre el dorso, 15 µl con una micropipeta, de una suspensión de conidias que contenía 1x107 conidias/ml. El tratamiento testigo fue absoluto (sin aplicación). La unidad experimental se conformó con 10 unidades de observación. Los bioensayos se organizaron bajo un diseño completamente aleatorio con cinco repeticiones. La variable de respuesta fue la mortalidad de larvas o adultos de D. neivai. El análisis de la información se realizó a través de un análisis de varianza y una prueba de comparación de medias Tukey (P=0,05), separadamente para cada bioensayo. Bioensayo de virulencia. La mayor mortalidad de larvas de D. neivai fue causada por la cepa CPMa1502 de M. anisopliae. La mortalidad fue del 87,7% y fue estadísticamente diferente a la mortalidad causada por la cepa CeMa9236 (P<0.0001), por lo tanto, se seleccionó la cepa CPMa1502 como la más virulenta. A B Figura 2. A. Adulto de Demotispa neivai infectado por la cepa CPMa1502 de Metarhizium anisopliae. B. Larva de Demotispa neivai infectada por la cepa CPMa1502 de Metarhizium anisopliae. Tabla 2. Mortalidad de larvas de Demotispa neivai causada por la cepa CPMa1502 del hongo Metarhizium anisopliae, 14 días después de la aspersión con diferentes dosis. Evaluación de dosis. La mortalidad causada por la cepa CPMa1502 de M. anisopliae no fue estadísticamente diferentes al disminuir la dosis, sin embargo, si se encontraron diferencias estadísticas entre la mortalidad causada por el hongo en diferentes dosis y el testigo al que no se le realizó ninguna aspersión (P<0,0001) (Tabla 2). Bioensayo de virulencia. Se llevó a cabo con las cepas de los hongos seleccionados como patogénicos a D. neivai y que causaron las mayores mortalidades en condiciones de laboratorio. El experimento se realizó en palma de aceite material Elaeis guineensis, de 5 años de plantado infestado naturalmente por D. neivai. La unidad experimental la conformaron tres racimos en estadío fenológico 703. El experimento se organizó bajo un diseño de bloques completos aleatorios con cinco repeticiones. Los hongos se asperjaron con una fumigadora Royal Cóndor de 20 l de capacidad, calibrada para asperjar 0,979 l/palma de una suspensión de conidias que contenía 7,1x107 conidias/ml, equivalente a usar una dosis de 1x1013 conidias/ha de cada hongo, teniendo en cuenta que en una hectárea hay 143 palmas plantadas. Al testigo no se le hizo ninguna aspersión. Las suspensiones se prepararon con el aceite emulsionable Carrier®, usando 3 cc/l de agua. La evaluación se realizó 14 días después de la aspersión. Cada racimo se llevó al laboratorio y se desespigó recuperando todos los D. neivai, discriminando por estado de desarrollo y registrando si estaban vivos o muertos. La variable de respuesta fue la mortalidad de larvas. El análisis de la información se realizó a través de una análisis de varianza y una prueba de comparación de medias Tukey (P=0,05). *Letras diferentes en la misma columna indican que se encontraron diferencias significativas de acuerdo con la prueba de Tukey (P=0,05). **De acuerdo con la fórmula de Schneider – Orelli. Tabla 3. Mortalidad de larvas de Demotispa neivai causada por la cepa CPMa1502 del hongo Metarhizium anisopliae, 30 días después de la aspersión en una plantación de palma de aceite. . Evaluación en condiciones de una plantación de palma de aceite. La mortalidad causada por la cepa CPMa1502 de M. anisopliae, 30 días después de la aspersión del hongo fue del 80,8%. La mortalidad de larvas registrada en el testigo fue del 12,2% (Tabla 3). Evaluación de dosis. La determinación de la dosis se realizó para la cepa del hongo que registró la mayor mortalidad en el bioensayo de virulencia. Se realizó un en lote de palma de aceite material E. guineensis de 4 años de plantado infestado naturalmente por D. neivai. En el lote se seleccionaron racimos en estadío fenológico 703, igual que en el bioensayo de virulencia. La unidad experimental la conformaron dos racimos. El experimento se organizó bajo un diseño de bloques completos aleatorios con seis repeticiones. La variable de respuesta fue la mortalidad de larvas. Los hongos se asperjaron del mismo modos que en el bioensayo de virulencia. Se evaluaron las dosis 1x1013, 7,5x1012 y 5x1012 conidias/ha. Al testigo no se le hizo ninguna aspersión. La evaluación y el análisis de los resultados se realizó del mismo modo que en el bioensayo de virulencia. *De acuerdo con la fórmula de Schneider – Orelli. Conclusión La cepa CPMa1502 de M. anisopliae es eficaz para el control del raspador de frutos de la palma de aceite D. neivai en plantaciones de palma de aceite. La formulación de este hongo se someterá a evaluaciones de validación en plantaciones comerciales de palma de aceite, para que este control biológico pueda ser incorporado en el control de D. neivari en un programa de manejo integrado. Agradecimientos Los autores agradecen a la gerencia y al personal de sanidad de las plantaciones Palmeras de Yarima y Hacienda Zamarkanda por el apoyo brindado; y al Fondo de Fomento Palmero administrado por Fedepalma por la financiación. A la investigadora Hanna Alvarado por su colaboración en los primeros bioensayos. Además a los estudiantes de Ingeniería Agronómica Eider Cabezas, Yamid García, Yimer Peteche de la Universidad Nacional de Colombia, sede Palmira y Alfonso Enrique Gonzalez de la Universidad de Córdoba por su colaboración en la realización de los bioensayos. Evaluación en condiciones de una plantación de palma de aceite. Se realizó con la cepa del hongo más eficaz para el control de D. neivai asperjado en la dosis determinada en el experimento anterior, se realizó en un lote comercial de E. guineensis con infestación natural de D. neivai de 3,6 ha. La aspersión se realizó con una fumigadora estacionaria Royal Cóndor calibrada para asperjar 1 l/palma de una suspensión de 3,49x107 conidias/ml, equivalente a usar una dosis de 5x1012 conidias/ha, teniendo en cuenta que en una hectárea hay 143 palmas plantadas. Como testigo sin aspersión se seleccionaron 259 palmas (1,8 ha) del mismo lote. La evaluación se realizó 30 días después de la aspersión del mismo modo que en los bioensayos de virulencia y dosis.