MYCOPLASMAS CHLAMYDIAS Y RICKETTSIAS Bacterias sin pared y Bacterias intracelulares obligadas Cátedra de Microbiología General – FACENA – UNNE 2012

Bacterias sin pared y Bacterias intracelulares obligadas Objetivo Conocer las principales características biológicas de los Mycoplasmas, Chlamydias y Rickettsias, su capacidad para producir infecciones, las posibilidades diagnósticas y las medidas profilácticas

Mycoplasmas - Taxonomía Clase Mollicutes Familia Mycoplasmataceae Géneros Mycoplasma Ureaplasma Especies M. pneumoniae M. hominis U. urealyticum

Mycoplasmas - Características generales No poseen pared celular (Bacterias carentes de pared celular) Poseen esteroles en su membrana celular Requerimiento de lípidos complejos preformados (colesterol) Anaerobios facultativos y algunos anaerobios estrictos Son pleomórficos (esféricos hasta filamentosos) Pueden desplazarse por movimiento ameboide en medios líquidos Pueden existir como saprófitos o producir enfermedades Genoma pequeño Resistencia natural a los beta lactámicos

FACTORES DE VIRULENCIA Capacidad de adherirse a los epitelios mediante glicoproteinas: Proteína P1 (Mycoplasma pneumoniae) P50 y P100 (Mycoplasma hominis) Glicopéptido sulfatado Fosfolipasa (Ureaplasma urealyticum) Disminución de la actividad macrofágica Nucleasas No se conoce la producción de toxinas No son invasivos

Mycoplasma pneumoniae El determinante de patogenicidad es la producción de peróxido de hidrógeno que produce la muerte de las células epiteliales por mecanismos desconocidos. Coloniza las vías respiratorias superiores Se adhiere a las células de la mucosa respiratoria inferior. Produce neumonía atípica primaria Se propaga por contacto directo de hombre a hombre Afecta a todas las edades y suelen producirse brotes familiares

M. pneumoniae - Diagnóstico Cultivo a partir de secreciones respiratorias: no es muy utilizado pues se necesitan medios especiales, muy enriquecidos y con inhibidores para otras bacterias. Detección de anticuerpos en el suero del paciente: puede hacerse por ELISA, aglutinación de látex o inmunofluorescencia indirecta Los síntomas y los datos epidemiológicos contribuyen mucho al diagnóstico etiológico

M. hominis y U. urealyticum Son flora habitual del aparato génitourinario. Su determinante de patogenicidad es la producción de amoníaco a partir de la urea (U. urealyticum) y de la arginina (M. hominis) Pueden producir inflamación oportunista tanto en el hombre como en la mujer. Las manifestaciones son uretritis en el hombre y vaginosis en la mujer por asociación con otras bacterias. Pueden producir complicaciones en el hombre, la mujer y en el recién nacido.

DIFICULTADES DIAGNÓSTICAS No se colorea al Gram Necesitan medios especiales (ricos, antibióticos, suero equino) Método comercial costoso Medio de cultivo artesanal - Obtención del suero equino Limitaciones presupuestarias

Mycoplasmas urogenitales - Diagnóstico Cultivo a partir de secreciones genitales: no es muy utilizado pues se necesitan medios especiales, muy enriquecidos y con inhibidores para otras bacterias. Detección de anticuerpos en el suero del paciente: puede hacerse por ELISA o inmunofluorescencia indirecta. Los síntomas y los datos epidemiológicos contribuyen mucho al diagnóstico etiológico

Chlamydias - Taxonomía Familia Chlamydiaceae Géneros Chlamydia Especies C. psittaci C. pneumoniae C. trachomatis Biovar LGV (linfogranuloma venéreo) Biovar TRIC (Tracoma-conjuntivitis de inclusión) Otros (enfermedades genitourinarias)

Chlamydias - Características generales Parásitos intracelulares obligados Son incapaces de sintetizar ATP Por mucho tiempo se los consideró virus Estructura de pared de gramnegativas Son cocoides e inmóviles No observables con Gram por su pequeño tamaño Poseen dos formas biológicas: Cuerpo elemental (CE): infectivo y no replicante Cuerpo reticulado (CR): no infectivo y replicante

Chlamydias - Ciclo vital

Determinantes antigénicos LPS: Específico de género MOMP (proteína mayor de la membrana externa): Contiene epítopes específicos de género, especie, subgrupo y serovariedad.

Patogenia C. trachomatis sintetiza proteínas “de stress” que se expresan en la membrana de la célula huésped. La reacción inflamatoria y cicatrizal desencadenada contra estas proteínas explica la obstrucción tubaria en infecciones genitales, y la ceguera en el tracoma.

Chlamydias - Patologías

Chlamydias - Diagnóstico MÉTODOS DIRECTOS Cultivo en líneas celulares Observación con Lugol y Giemsa (Cuerpos de inclusión) Detección por Inmunofluorescencia directa o ELISA Detección por PCR MÉTODOS INDIRECTOS Detección de anticuerpos por IFI o ELISA

C. trachomatis es del 80-90% y Inmunofluorescencia La sensibilidad y especificidad de la IF con el uso de anticuerpo monoclonales para el MOMP (Mayor Outer Membrane Protein) de C. trachomatis es del 80-90% y 98-99 % respectivamente. La IF tiene mayor sensibilidad que la EIA ya que permite detectar de 10 a 100 cuerpos elementales. Ventajas: Se independiza del transporte Se puede utilizar para una gran variedad de muestras Tiene alta especificidad Se puede utilizar como método confirmatorio de otros métodos cuando existen discrepancias. Desventajas Necesita de un microscopio de fluorescencia de gran resolución

PCR Las técnicas moleculares (PCR) tienen hasta un 96% de sensibilidad. Detectan en forma directa el ADN bacteriano. Permite detectar 1 cuerpo elemental presente en la muestra Ventajas Se independiza del transporte Se pueden utilizar muestras no invasivas (Ej. Orina) Muy alta sensibilidad y especificidad. Desventajas Se pueden tener falsos negativos por presencia de inhibidores Alto costo

Rickettsias y Coxiellas - Taxonomía Familias Rickettsiaceae Coxiellaceae Géneros Rickettsia Coxiella Ehrlichia Especies R. rickettsii C. burnetii R. prowasekii R. typhi E. chaffeensis

Rickettsiales - Características generales Parásitos intracelulares obligados Son incapaces de sintetizar ATP Estructura de pared de gramnegativas Pueden ser cocoides, bacilares o pleomórficas No observables con Gram por su pequeño tamaño Habitan en artrópodos hematófagos que actúan como vectores o huéspedes primarios.

Rickettsia y Coxiella - Patogenicidad Estas bacterias infectan eritrocitos, células retículoendoteliales y epitelio vascular. Penetran a la célula huésped induciendo la endocitosis Rickettsia abandona el endosoma y se reproduce en el citoplasma mientras que Coxiella se reproduce en el endolisosoma luego de la fusión del endosoma con el lisosoma. Finalmente la célula del huésped estalla, liberando organismos nuevos. Además de los efectos de la lisis celular el huésped padece los efectos de la toxicidad de la pared. Los síntomas aparecerán en función del tejido afectado (epitelio pulmonar, endotelio vascular o monocitos circulantes)

Epidemiología

Diagnóstico MÉTODOS DIRECTOS MÉTODOS INDIRECTOS Cultivo en líneas celulares Observación con Giemsa (Excepto para Coxiella) Detección por Inmunofluorescencia directa en las muestras Detección por PCR MÉTODOS INDIRECTOS Detección de anticuerpos por IFI IgG > 1/128 e IgM > 1/32