GUÍA de Lab. A. Q. GRADO-FARMACIA Salvador Sagrado sagrado@uv.es Dpto. Q. Analítica (Farmacia) GUÍA de Lab. A. Q. GRADO-FARMACIA TAREAS EVALUABLES (SE VALORARA LA FECHA DE ENTREGA) - Previo al Lab (Entregables al comenzar las prácticas) [1] Cuestiones (Leer la introducción del cuadernillo de prácticas en pdf. y acceder a los enlaces allí indicados. Hacer el cuestionario on-line en aula virtual) [2] Esquemas prácticas 1, 3, 4 y 5 (presentar el 1er día, según modelo para la práctica 2, resuelto al final del cuadernillo). El prof. Lo valorará y devolverá. - Sesiones experimentales (Laboratorio). Breve explicación + 5 sesiones prácticas [3] Informe parcial-resultados. Al final de cada día/práctica presentar al prof. el borrador cumplimentado (tras los cálculos) del informe (al final del cuadernillo). El prof. lo valorará in situ. - Posterior al Lab. Sesión seminario post-prácticas: [1] Desarrollo Prácticas (discusión grupal participativa. El prof. valorará in situ la participación activa, sobre todo el cuadernillo, el experimental, los esquemas) [2] Presentación Informe (discusión grupal participativa. El prof. valorará in situ la participación activa sobre los resultados del informe en el cuadernillo) [3] Informe-resultados (Entrega del informe, hoja de informe suelta-impresa aparte. El prof. valorará posteriormente los resultados de dicha hoja) ------------------------- Calificación final: Examen [1] 30% + Memoria [2] 20% + Resultados [3] 50%

ANÁLISIS ANALITOS MUESTRAS TÉCNICA (método) 1) DUREZA (Ca, Mg) AGUA VOLUMETRÍA (complejos) 2) N-acetíl-L-cisteína MEDICAMENTO ESPECTROFOTOMETRÍA (Vis.) 3) FLUORURO DENTÍFRICO POTENCIOMETRÍA 4) Ca MEDICAMENTO ABSORCIÓN ATÓMICA 5) PARACETAMOL MEDICAMENTO HPLC ASPIRINA CAFEÍNA TÉCNICA (método)

ANÁLISIS ORGANIZACIÓN PRACTICAS: ANALITOS MUESTRAS 1) DUREZA (Ca, Mg) AGUA 2) N-acetíl-L-cisteína MEDICAMENTO 3) FLUORURO DENTÍFRICO 4) Ca MEDICAMENTO 5) PARACETAMOL MEDICAMENTO ASPIRINA CAFEÍNA Parejas días exp. 1º 2º 3º 4º 5º 1,2 3,4 5,6 7,8 7,8 5,6 7,8 3,4 5,6 7,8 1,2 3,4 5,6 7,8 1,2 3,4 5,6 1,2 3,4 1,2

Ejemplos... y algunos datos esperables INFORME (por pareja) Pedir al profesor junto con la muestra o patrón-verificación PRÁCTICA (ANALITO) ETAPA (Código) (Resultado previsto, unidades) RESULTADOS (Completar. Media y s con cifras significativas) INCIDENCIAS (código) (Describir por detrás) DUREZA Muestra: Agua MUESTRA Dm . 750-1350 mg.L-1 CaCO3 Media ±s = 1230 ± 50 (Verificado) RSD(%) = <5% ; n = . Verificar Nº patrones de Calibrado: 5 ó (justificar) N-acetíl-L-cisteína Muestra: Medicamento CALIBRACIÓN VERIFICACIÓN Nv . 10-40 % MUESTRA Nm . Fabricante mg/unidad np = 5 (o incidencia) ; R2= >0.99 Media ±s = RSD(%) = ; n = 3 (o incidencia) RSD(%) = ; n = . N1 N2 INCIDENCIAS: N1 . Eliminación de 1 patrón de calibrado por que se alejaba de la recta de calibrado, por lo que np= 4 N2 Eliminación de 1 réplica de la muestra discrepante por que superaba el ensayo Q, por lo que n = 2

CÁLCULOS (ver Guía en Cuaderno de prácticas): Opcionalmente o para verificar... HOJA EXCEL statreg.xls (ordenadores prácticas) Calibrado + interpolación Media ± s, RSD%, n (+ ensayo Q)

Calibración del método (instrumental) - Patrón (p): NAC (puro, desecador) Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC) Protocolo operativo (Equipos) … sólo para cálculos (ver NOTA) Datos primarios [Ap- 5.2] Pesar con precisión en balanza analítica 0.010 g de N-acetíl-L-cisteína… enrasar a 250 mL con agua. (aforado) mp Vp ~[0.01] g =0.25 L [Ap- 6.1] Tomar alícuotas de la disolución de N-acetíl-L-cisteína de 0 a 5 mL (por ejemplo, 0, 1, 2, 3, 4 y 5 mL) (pipeta grad.) e introducir en matraces de 25 mL. (aforado) ... vi vp =[0 – 5] mL =25 mL NOTA: mirar el procedimiento completo (cuadernillo) para ver el resto de reactivos a añadir Esquema Marcar (rotular) material ‘Recta de calibrado’: Blanco, ‘Cero’ instrumento seco * Cp1 Ap1 vi Cp Api mp Vp Cpi(mg/L) mp : masa de patrón Vp : volumen disolución patrón (madre) vi : volumen alícuotas patrón (alícuotas i ) vp: volumen disolución patrones calibrado Cpi : concentración patrones calibrado (mg/L) Api : absorbancia patrones calibrado Informe np=5 (R2 >0.99) Cp5 Ap5 vp

Verificación del método (instrumental) - Patrón verif. (pve); [20-30%]-Analito (a): NAC Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC) Protocolo operativo (Equipos) … sólo para cálculos (ver NOTA) Datos primarios [Ap- 6.2] Pesar en balanza analítica 0.04 g del patrón de verificación… enrasar a 100 mL con agua (aforado). Por triplicado, tomar 1 mL (pipeta grad.) de esta disolución, trasvasar a un aforado de 25 mL … mpve Va vi va ~[0.04] g =0.1 L =1 mL =25 mL NOTA: mirar el procedimiento completo (cuadernillo) para ver el resto de reactivos a añadir Esquema Marcar (rotular) material seco * Interpolar en ‘Recta de calibrado’: Aa1 Ca1 vi Ca ma mpve Va Aai Ca-pvei (%) ? Aa3 Ca3 va mpve : masa de patrón-verif. Va: volumen disolución analito-pve (madre) vi : volumen alícuotas (réplicas i ) va: volumen disolución analito (réplicas) Ca-pvei : concentración de analito en el pve (%); incógnita Aai : absorbancia analito Cai : concentración estimada analito (mg/L) Cai Cai

Análisis de muestra (m) Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC) - Analito (a): NAC (contenido según fabricante) Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC) Protocolo operativo (Equipos) … sólo para cálculos (ver NOTA) Datos primarios [Ap- 6.3] Pesar en balanza analítica el contenido de un sobre o cápsula. Triturar en un mortero. Pesar 0.125 g de muestra… llevar a 250 mL en un matraz aforado. Por triplicado, tomar 1mL de esta disolución, trasvasar a un aforado de 25 mL… mc mm Va vi ~[0.125] g =0.25 L =1 mL =25 mL NOTA: mirar el procedimiento completo (cuadernillo) para ver el resto de reactivos a añadir Esquema Marcar (rotular) material seco * Interpolar en ‘Recta de calibrado’: Aa1 Ca1 Ca ma vi mc mm Va Aai ma-c (mg/unid.) ? Aa3 Ca3 mc : masa de comprimido mm : masa de muestra Va: volumen disolución analito-muestra (madre) vi : volumen alícuotas (réplicas i ) va: volumen disolución analito (réplicas) ma-ci : masa de analito por comprimido (mg/unid.); incógnita Aai : absorbancia analito Cai : concentración estimada analito (mg/L) va Cai Cai

Calibración del método (instrumental) - Patrón (p): NAC (puro, desecador) Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC) Protocolo operativo (Equipos) Datos primarios [Ap- 5.2] Pesar con precisión en balanza analítica 0.010 g de N-acetíl-L-cisteína… enrasar a 250 mL con agua. (aforado) mp Vp ~[0.01] g =0.25 L [Ap- 6.1] Tomar alícuotas de la disolución de N-acetíl-L-cisteína de 0 a 5 mL (por ejemplo, 0, 1, 2, 3, 4 y 5 mL) (pipeta grad.) e introducir en matraces de 25 mL. (aforado) ... vi vp =[0 – 5] mL =25 mL Cpi (mg/L) = mp(g) / Vp(L) x 103(mg) / 1(g) x vi(L) / vp(L) = (mp(g) 103 vi(L)) / (Vp(L) vp(L)) Cálculo ‘Recta de calibrado’: Blanco, ‘Cero’ instrumento * Cp1 Ap1 vi Cp Api mp Vp Cpi(mg/L) mp : masa de patrón Vp : volumen disolución patrón (madre) vi : volumen alícuotas patrón (alícuotas i ) vp: volumen disolución patrones calibrado Cpi : concentración patrones calibrado (mg/L) Api : absorbancia patrones calibrado Informe np=5 (R2 >0.99) Cp5 Ap5 vp

Verificación del método (instrumental) - Patrón verif. (pve); [20-30%]-Analito (a): NAC Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC) Protocolo operativo (Equipos) Datos primarios [Ap- 6.2] Pesar en balanza analítica 0.04 g del patrón de verificación… enrasar a 100 mL con agua (aforado). Por triplicado, tomar 1 mL (pipeta grad.) de esta disolución, trasvasar a un aforado de 25 mL … mpve Va vi va ~[0.04] g =0.1 L =1 mL =25 mL Ca-pvi (%) = 100 ma(g) / mpve(g) = (Cai(mg/L) x va(L) / vi(L) x Va(L) x 1(g) / 103(mg)) / mpve(g) = (Cai(mg/L) va(L) Va(L)) / (vi(L) 10 mpve(g)) Cálculo * Interpolar en ‘Recta de calibrado’: Aa1 Ca1 vi Ca ma mpve Va Aai Ca-pvei (%) ? Aa3 Ca3 va mpve : masa de patrón-verif. Va: volumen disolución analito-pve (madre) vi : volumen alícuotas (réplicas i ) va: volumen disolución analito (réplicas) Ca-pvei : concentración de analito en el pve (%); incógnita Aai : absorbancia analito Cai : concentración estimada analito (mg/L) Cai Cai

Análisis de muestra (m) Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC) - Analito (a): NAC (contenido según fabricante) Práctica 2. N-acetíl-L-cisteína (NAC) Protocolo operativo (Equipos) Datos primarios [Ap- 6.3] Pesar en balanza analítica el contenido de un sobre o cápsula. Triturar en un mortero. Pesar 0.125 g de muestra… llevar a 250 mL en un matraz aforado. Por triplicado, tomar 1mL de esta disolución, trasvasar a un aforado de 25 mL… mc mm Va vi ~[0.125] g =0.25 L =1 mL =25 mL ma-ci (mg/unid.) = ma(mg) x mc(g) / mm(g) = (Cai(mg/L) x va(L) / vi(L) x Va(L) ) x mc(g) / mm(g) = (Cai(mg/L) va(L) Va(L) mc(g) ) / (vi(L) mm(g)) Cálculo * Interpolar en ‘Recta de calibrado’: Aa1 Ca1 Ca ma vi mc mm Va Aai ma-c (mg/unid.) ? Aa3 Ca3 mc : masa de comprimido mm : masa de muestra Va: volumen disolución analito-muestra (madre) vi : volumen alícuotas (réplicas i ) va: volumen disolución analito (réplicas) ma-ci : masa de analito por comprimido (mg/unid.); incógnita Aai : absorbancia analito Cai : concentración estimada analito (mg/L) va Cai Cai

Ejemplo de Registro de ensayo (basado en los esquemas y cálculos)