MARTHA ISABEL DELGADO CORDOBA JOHAN ANDRES AMAYA ROMERO ELISA SANDWICH (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) (Ensayo de inmunoabsorción ligado a enzima) MARTHA ISABEL DELGADO CORDOBA JOHAN ANDRES AMAYA ROMERO

HISTORIA 1959 Yalowy Berson, precursor de los ensayos inmunoenzimáticos que fueron descritos originalmente en 1971 por Engvall y Perlmann, y Van Wemeny y Schuurs. Se llama Elisa en sándwich porque el antígeno queda en medio de anticuerpos. La prueba de Elisa es una prueba de rastreo, es la primera que debemos descartar frente a la presencia de un agente infeccioso

ELEMENTOS PARA LLEVAR A CABO LA PRUEBA

PRIMER PASO Se coloca en un vaso con inmunoglobulina La prueba se realiza en un laboratorio certificado. Los anticuerpos están en fase solida El anticuerpo debe tener memoria contra el antígeno especifico ANTICUERPOS MONOCLONALES BIEN RECUBIERTOS

SEGUNDO PASO Se agregará el suero que contenga el antígeno (o no) que se quiera investigar. Si el antígeno está presente se unirá al anticuerpo propio para él que está anclado en la fase sólida. De media hora a 1 hora el anticuerpo interacciona con el antígeno (periodo de incubación)

Los anticuerpos específicos se unen a los antígenos para los cuales están destinados, esto permite ser precisos y seleccionar el antígeno o anticuerpo que se está buscando. Pues, quedará anclado al que se encuentre en la fase sólida. El antígeno se une al anticuerpo

TERCER PASO Posteriormente se lava, pero los anticuerpos al estar fijos no se quitan. Solo se elimina el suero y los otros componentes. Los anticuerpos específicos se unen a los antígenos para los cuales están destinados, esto permite ser precisos y seleccionar el antígeno o anticuerpo que se está buscando. Pues, quedará anclado al que se encuentre en la fase sólida. Un segundo anticuerpo monoclonal, se vincula a la enzima y se une al antígeno inmovilizado

CUARTO PASO Por lo tanto, si el antígeno estaba presente se habría unido primeramente al anticuerpo fijado, posteriormente otro anticuerpo contra ese antígeno se uniría a él, se agrega el sustrato con lo cual, la generación de color indica que el antígeno sí está presente Se añade el sustrato y se convierte por las enzimas en el producto de color, la tasa de formación de color es proporcional a la cantidad de antígeno

Si no hay presencia del agente infeccioso no voy a ver color Cuando hay color se demuestra la presencia del agente infeccioso La muestra debe ir por triplicado, se monta 3 veces. La muestra debe ser igual en los 3 lados en la microplaca Los resultados deben ser iguales en ambos lados Si da positivo en un extremo y negativo en otro la prueba esta mala y debe repetirse la prueba

RESUMEN DE LOS PASOS