Análisis espectroscópico de p-nitrofenol Wilmarie Morales Torres, Angel G. Arroyo Ortiz, Mariangelys Ojeda Marrero, Edward Hernández Lara

Introducción Objetivos Importancia Determinación de el largo de onda mediante un barrido en la cual p-nitrofenol es visible en luz. Utilizar el largo de onda máximo de p-nitrofenol para determinar absorbancia a concentraciones difentes de volumenes de una solución a 0.1mM de p-nitrofenol. Determinar la concentración de un desconocido mediante la ecuación de regreción lineal. La importancia de este experimento se basa en la medición cuantitativa de de p-nitrofenol a diferentes concentraciones por medio de los cálculos de la absorbancia. La utilización de este experimento se puede utilizar tambien para la identificación cuantitativa de una proteína por medio de su absorbancia.

Teoría Ley de Beer-Lambert es una ralción empirica que relaciona la absorción de luz con las propiedades del material atravesado. A=ε∙l∙c l – longitud de la cubeta C – concentración del soluto en mol/L ∈ - absortividad molar

pKa= 7. 16 ph< se obtendria esta estructura pKa= 7.16 ph< se obtendria esta estructura. Estructuras > cambia la estructura resonante

Metodología Equipos y Materiales Espectrofotómetro Cubetas Tubos de ensayo Matraz volumétrico 10mL Amortiguadores pH5 y pH10 Pipetas y bulbo

Instrumentación El espevtrofotometro se compone de una fuente de lus, un monocromador, compartimiento de la muestra, detetorr, foto detectores y celdás. El eje de x representa el largo de onda en la qe se encuentra y el eje de y la absorbancia obtenida por el nitrofenol. El espectrofotometro puede medir el % de transmitancia [T] y la absorbancia [A].

λ máximo de P-nitrofenol Procedimiento λ máximo de P-nitrofenol 1mL de p-nitrofenol en 2 cubetas 2mL de amortiguador pH5 y pH10 en cubetas diferentes 4mL del amortiguador como blanco Se determinó absorbancia máxima 0.98 en λ398nm en solución pH10. pH5 no tuvo absorbancia en λ398nm Curva de Calibración Se prepararon 4 soluciones de 0.1mM p-nitrofenol Volumen total 10mL #1 – 7.5mL p-nitrofenol #2 – 5.0mL p-nitrofenol #3 – 3.0mL p-nitrofenol #4 – 1.0mL p-nitrofenol Se midió la absorbancia con λ máximo obtenido en el paso anterior. Desconocido Se determinó la absorbancia utilizando el λ máximo de p-nitrofenol Se obtuvo la concentración del desconocido utilizando la ecuación de regresión lineal que se obtiene de la curva de calibración (y=mx+b).

Resultados Se determinó la absorbancia de p-nitrofenol en un barrido en el espectronic 20. El largo de onda fue de 398nm que en el barrido es igual al largo de onda maximo (λmaximo).

Cálculos Moles de p-nitrofenol en la solución #1 Malaridad de la solución #1 Concentración del desconocido

Volumen de p-nitrofenol Tabla 1.1: Dilucines de la solucion de 0.1 mM de p-nitrofenol absorbancia y concentraciones. Soluciones Volumen de p-nitrofenol Absorbancia Concentración (mM) 1 7.5mL 0.546 0.075 2 5.0mL 0.494 0.050 3 3.0mL 0.378 0.030 4 1.0mL 0.372 0.010 Desconocido -- 0.536 0.071

Gráfica 1.1: Concentración vs la absorbancia de p-nitrofenol

Discusión Se determinó que el lambda máximo para el p-nitrofenol es el largo de onda de 398nm. Dicho largo de onda fue el utilizado para examinar las diferentes soluciones de p-nitrofenol preparadas en el experimento. La primera solución fue preparada con 7.5mL de 0.1mM p- nitrofenol llevando el volumen a 10mL con agua destilada. La solución preparada contenía 0.00075mmol de p-nitrofenol, teniendo una concentración de 0.075mM. Las soluciones preparadas contenían 0.00050mmol, 0.00030mmol y 0.00010mmol de p- nitrofenol respectivamente. Se calculó las concentración de cada una. La solución #2 tenía una concentración de 0.050mM, la solución #3 de 0.030mM y la #4 de 0.010mM. Las soluciones fueron examinadas en el espectrofotómetro para determinar la absorbancia de cada una de ellas y luego construir una regresión lineal para calcular la concentración de un desconocido. Utilizando la ecuación de la regresión lineal se sustituyó el valor de y para despejar para x y obtener el valor de la concentración del desconocido, lo cual arrojó un resultado de 0.071mM.

Conclusión Se determinó que el largo de onda para p-nitrofenol es 398nm y se utilizó para determinar absorbancia y concentraciones de 4 soluciones de p-nitrofenol y un desconocido (Absorbancia 0.536 y concentracion 0.071mM). Absorbancias de las soluciones son directamente proporcionales a las molaridades (concentraciones) de estas. A mayor molaridad, mayor absorbancia observada. Ej. Solución #1 0.0755mM, 0.546 absorbancia Solución #2 0.050mM, 0.536 absorbancia Consideramos que obtuvimos un alto grado de presición pues los vaores obtenidos en la regrecion linenal eran cercanos a los esperados (R² = 0.90955). Posibles fuentes de error: Cubetas sucias, error al medir los volumenes, mala calibración del equipo, largo de onda mal seleccionado.

Referencias Fernandez, G. Espectroscopia visible-Ultravioleta: Ecuacacion de Lambert-Beer. http://www.quimicaorganica.org  Urzúa, P. U. (12 de Agosto de 2009). Fenoles y Aminas. Recuperado el 8 de Marzo de 2016, de Slideshare: http://es.slideshare.net/uurzua/fenoles-y-aminas