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Publicada porMiguel Benítez Domínguez Modificado hace 9 años
1
Integración de DNA en microorganismos: herramientas genéticas II
2
Uso de sistemas de recombinación sitio- específica Preparación de GMOs Integración en el cromosoma Expresión de genes tóxicos
3
Ab Liberación de GMOs: el problema de las resistencias
4
Ab Resolvasa Ab GMOs sin resistencias
5
Integrasa Ab Integrando en el cromosoma de un modo específico
6
++ + + - Camino de ida pero no de vuelta
7
Invertasa Expresión de genes tóxicos: una solución...
8
Resolvasa Txt STOP...y otra
9
Integración de DNA exogeno en el genoma bacteriano Recombinación homóloga Recombinación sitio-específica Recombinación ilegítima –Transposición
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Integración ilegitima: transposición Transposones: via intermediario de ADN –Secuencias de inserción Tipo I: IS50 Tipo II: IS3 –Transposones TipoI (IS tipoI, Tn5) TipoII (IS tipo II, Tn3) TipoIII (fago Mu) Retrotransposones: via intermediario de ARN
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tnpAIR Clase I tnpAtnpRresIR Clase II Secuencias de inserción
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tnpA OE IE IS50 5’CTGACTCTTATACACAAGT3’ DnaA 5’CTGTCTCTTGATCAGATCT3’ Tnp Inh
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5’ 3’ 5’ 3’ H-O-H 5’ 3’ 5’ 3’ O H 5’ 3’ 5’ 3’ IS50: cortar y pegar
14
H-O-H 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ O H 5’ 3’ O H IS50: cortar y pegar
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Dimerización Papel de Inh Acción en cis Acoplamiento con replicación IS50: mucho es malo
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DNA bindingdimerization 476 aa Papel de la dimerización
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476 aa dimerization 421 aa Inh y la dimerización
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Acción en cis tnpAIR en cis tnpAIR en trans tnpAIR tnpAIR
19
Acoplamiento con replicación
20
tnpA OE IE OE tiene un sitio dnaA (OE y OI son suboptimos) 5’CTGACTCTTATACACAAGT3’ DnaA P2 se activa por metilación dam GATC CTAG GATC CTAG GATC CTAG GATC CTAG GATC CTAG
21
Tn5 OE IE OE IE IS50L IS50R kan bleostr Mutación stop Sitios dnaA
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