ACTIVIDAD 6 ANÁLISIS DE UN ESTUDIO REALIZADO POR HPLC Br. Erik D. Gómez Br. Eduardo A. Diaz González. Br. Nubia A. González Rivero Br. Laura Rivero Medina.

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1 ACTIVIDAD 6 ANÁLISIS DE UN ESTUDIO REALIZADO POR HPLC Br. Erik D. Gómez Br. Eduardo A. Diaz González. Br. Nubia A. González Rivero Br. Laura Rivero Medina Licenciatura en QFB Métodos Ópticos, Electroquímicos y Cromatográficos M. En C. Alfredo Araujo León Universidad Autónoma de Yucatán Campus Ciencias de la Salud Facultad de Química

2 CARACTERIZACIÓN E IDENTIFICACIÓN DE ALCALOIDES DE TIPO DIHIDROINDOL DE SEMEN STRYCHNI PROCESADA, POR CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA EFICIENCIA ACOPLADA A ESPECTROMETRÍA DE MASAS DE TRAMPA DE IONES Y TIEMPO DE VUELO (HPLC- ESI/IT-TOF/MS) Tian, J., Tian, Y., Xu, L., Zhang, J., Lu, T., Zhang, Z. J. Phytochemical Analysis. 2013

3 Introducción Semen Strychni (SS) es la semilla de la planta Strychnos nux-vomica. Ha sido utilizada como una medicina herbal en el continente Asiático. A pesar de eso, su contenido de alcaloides de tipo Dihidroindol aun no se conoce.

4 Retos y sus soluciones Detección de estos analitos por espectrometría de masas Utilización de un Filtro de Defectos de Masa (MDF). Identificación de isómeros Se aplicaron cálculos químicos cuánticos.

5 Métodos Experimentales  Materiales:  Strychnina (97%)  Bruicina (95.99%).  Metanol grado HPLC.  Agua doblemente destilada  Semillas no procesadas de S. nux-vomica.

6 Las semillas se calentaron en un baño de arena a 240°C por 3 min. Las SS se maceraron y suspendieron en etanol- agua (7:3). La mezcla se sonicó por 40 min a 30°C. Se filtraron los extractos y se concentraron a sequedad por vacío a 50°C. El residuo se diluyó en 5 mL de etanol-agua 7:3 para ser filtrado. Se tomó una alícuota de 5 μL. Métodos Experimentales  Tratamiento de muestra

7 Análisis por HPLC-ESI/IT-TOF/MS  Separación por HPLC  Bomba binaria  Automuestreador  Horno para columna.  Columna Longitud: 150 mm Diámetro: 4.6 mm Diámetro interno: 5 μm  Fase estacionaria: C18  Temperatura de análisis: 35°C  Flujo: 0.7 mL/min.

8 Análisis por HPLC-ESI/IT-TOF/MS  Separación por HPLC  Fase móvil: CH3COONH4 (pH 3) (A) Metanol (B)  Gradiente A:B: Inicial: 95:5 5 min. 92:8 20 min. 87:13 50 min. 85:15 70 min. 80:20 85 min: 0:100

9 Análisis por HPLC-ESI/IT-TOF/MS  Detección por ESI/IT-TOF/MS  Modo ión positivo.  Soluciones estándar: Strychnina Bruicina  Voltaje del detector: 1.6 kV  Gas nebulizador: N2, con un flujo de 1.5 L/min.  La MDF se realizó con un software de Predictor de Composición de Fórmula.

10 Resultados Dihidroalcaloides identificados

11 Discusiones MDF se utilizó para remover la mayoría de las interferencias de iones y facilitó la detección de alcaloides de tipo dihidroindole vía HPLC Filtro de referencia: Strychnina protonada (C12H23N 2 O2 +, defecto de masa: 0.1754 Da) Usando el defecto de masa de sustituyentes, el rango del defecto de masa fue de 0.1601 Da a 0.2122 Da. El filtro de ventana se determinó como C21H23N 2 O2 + ± 50mDa por encima del rango de 335-441 Da determinando 25 alcaloides tipo dihidroindole, incluyendo la Strychnina.