OPERON LAC.

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1 OPERON LAC

2 OPERON LAC “Operón”: Es una unidad de trasncripción: genes estructurales regulados por un promotor y un operador . Ejemplo: Los genes involucrados en el uso de la Lactosa como fuente de carbono, se encuentran agrupados y codifican para enzimas que participan en la misma vía metabólica.

3 OPERON LAC

4 COMPOSICIÓN. a) Genes estructurales (en tándem).
gen lac Z codifica para la expresión de la β-galactosidasa el gen lac Y que codifica para la permeasa del galactósido. el gen lac A, codifica para la acetiltransferasa de tiogalactósido. Se transcriben desde un promotor común en un mRNA policistrónico, el cual es traducido para dar lugar a las tres enzimas.

5 COMPOSICIÓN b) Promotor Sitio donde la polimerasa de RNA se une al DNA antes del inicio de la transcripción.

6 COMPOSICIÓN. c) Operador
Por lo general se localiza adyacente o traslapado con el promotor , sirve como el sitio de unión de una proteína, conocida como represor (ejemplo de proteína reguladora de genes). La proteína reguladora de genes (represor) reconoce una secuencia especifica dentro del DNA y se une a esta con alta afinidad.

7 COMPOSICIÓN d) Gen Regulador.
La expresión de los genes estructurales también esta controlada por un gen regulador específico. El gen regulador puede estar cerca o lejos de los genes que están siendo regulados. El gen regulador codifica para una proteína específica, un producto denominado REPRESOR.

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9 En este tipo de operador inducible como lac, la proteína represora sólo puede unirse al DNA en ausencia de lactosa, que funciona como un INDUCTOR.

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11 CONTROL POSITIVO POR cAMP.
La concentración de cAMP en las células se relaciona con la presencia de glucosa en el medio; a mayor concentración de glucosa, menor concentración de cAMP. El cAMP actúa en las células procariotas al unirse a una proteína, en este caso la proteína receptora de cAMP (CAP). Aunque CAP es incapaz de unirse al DNA, el complejo cAMP-CAP reconoce y se une a un sitio especifico de la región de control de LAC, aumentando la afinidad de la región promotora por la RNA polimerasa, lo que estimula la transcripción del Operón. La presencia del complejo cAMP-CAP es necesaria para la transcripción del Operón, aun cuando la lactosa esta presente y el represor es inactivo.

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14 β-Galactosidasa Lac Z Represor transcripcional del operón Lac, Lac I Lactosa permeasa Lac Y Activador transcripcional del operón Mph 9 . Galactosidasa -O-Acetiltransferasa Lac A

15 E. coli en medio mínimo Medio mínimo A Glu 2% B Lac 2 % C Glu + Lac 2 % D Glu 2 % E Glu + Lac 2 % 15 min ½ tiempo + Lac 2 % 7.5 min

16 Centrifugar a 10,000 rpm, decantar sndnt
Resuspender bacterias en 250 µL de amortiguador Z Añadir 25 µL de CHCl µL SDS 0.1 % Añadir 50 µL de ONPG, Incubar 2 min. TA Añadir 125 µL Na2CO3 1 M Observar color