Srs2: The “Odd-Job Man” in DNA repair Victoria Marinia and Lumir Krejcia,b, aDepartment of Biology, Faculty of Medicine, Masaryk University, Brno CZ-625.

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1 Srs2: The “Odd-Job Man” in DNA repair Victoria Marinia and Lumir Krejcia,b, aDepartment of Biology, Faculty of Medicine, Masaryk University, Brno CZ-625 00, Czech Republic. bNational Centre for Biomolecular Research, Faculty of Science, Masaryk University, Brno CZ-625 00, Czech Republic. J. Benito López Salguero

2 Recombinación Homóloga (HR) Mantenimiento de la integridad del genoma – Replicación – Reparación de DSBs – Reparación de la horquilla de replicación Helicasas Srs2 de Saccharomyces cerevisiae “Asegura que los trabajos se realicen cuando y donde se necesiten”

3 Propiedades Bioquímicas SRS2 codifica una superfamilia de Helicasas DNA I – homologos Rep, PcrA y UvrD región C-terminal – interacciones proteína-proteína – blanco de modificaciones postraduccionales Tiene actividad ATPasa dependiente de ssDNA – Kcat ≥3000 desenrollamientos de DNA/min con polaridad 3-5´ Srs2 se puede translocar en el ssDNA como un monómero – procesividad de casi 1600 nt – tasa de 300 nt/s

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5 Regulación de HR No interfiera con otras vías de reparación – intermediarios tóxicos – DNA dañado – bloquéo de la progresión de la horquilla de replicación Varias vías

6 Vías de Eliminación de Intermediarios Indeseables actividad helicasa de Srs2 – suprime HR desmantelando el filamento presinaptico de Rad51 Mph1 – desarma D-loops producidos por Rad51 BLM/Sgs1 junto con Top3 – resolución de dHJ

7 Actividad Antirecombinasa de Srs2 sgs1 srs2 acumulan intermediarios tóxicos que no pueden resolverse en ausencia de helicasas Srs2 desmantela el filamento presináptico formado por Rad 51 – mediante actividad translocasa dependiente de ATP

8 Mantenimiento de la Horquilla de Replicación Un daño a un templete de DNA bloquea la progresión de la horquilla de replicación Proteínas checkpoint reducen la frecuencia de HR – evitando desestabilización de la horquilla de replicación e intermediarios tóxicos Srs2 está implicado directamente en el checkpoint de la replicación

9 Red de Integridad del Genoma Varias helicasas participan en los mecanismos de control de la recombinación y otros procesos de reparación

10 Reparación Post-replicativa (PRR) Srs2 actúa como un switch molecular entre la PRR y HR Sistema intricado de varias vías independientes – mecanismos libre de errores y propenso a errores

11 Srs2 Como Mecanismo de Control de Calidad DSBs Horquillas dañadas Srs2 antagoniza con Rad52

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13 Papeles Adicionales de Srs2 Actividad recombinasa – también repara DSB por SDSA Durante SDSA – facilita el desplazamiento de la cadena y/o desplazamiento de Rad51 de un ssDNA (no invasivo) en la estructura D- loop (previniendo un second- end capture) La habilidad de Srs2 para remover Rad51 de ssDNA – puede requerirse en otras vías de reparación (BIR y SSA)

14 Regulación de Srs2 Comunicación Srs2 con los checkpoints – Ayudan a elegir el método más apropiado para restaurar la horquilla de replicación estancada y otros tipos de daño Modificaciones postraduccionales de Srs2 – Regulan la disponibilidad de substratos específicos de DNA que favorecen la recombinación homóloga u otras vías de reparación Srs2 se expresa en bajos niveles – coordinada con genes de síntesis de DNA en la transición G1-S – inducida por UV en células G2 Fosforilación – Después de la activación del checkpoint intra-fase S – Requiere las cinasas Dun1, Mec1 y Rad53

15 Gracias!!