Fundamentos de Cromatografía Gaseosa

Fundamentos de Cromatografía Gaseosa
Sumi Scientific Instruments Laboratorio de Aplicaciones Alvaro Codas

Contenido Principios Básicos Instrumentación Aplicaciones
Mantenimiento Básico & troubleshooting

Concepto de Cromatografía
La cromatografía es un método de separación en el que los compuestos de la muestra son separados de acuerdo con sus diferentes interacciones con la fase estacionaria y la fase móvil. Fase estacionaria  fase que se mantiene fija en la columna. Fase móvil  transporta la muestra a través de la fase estacionaria conforme fluye por la columna. Objetivos de la cromatografía: Separar, identificar y cuantificar compuestos-dentro de la matriz.

Concepto de la cromatografía
Fase estacionaria  Columna cromatógrafica (cromatografía en columna) Fase móvil  Líquido Gas Fluido supercrítico Cromatografía gaseosa Cromatografía líquida Simbología LC, HPLC, CLAE GC, CG Cromatografía En columna Fluido supercrítico = estado intermediário entre líquido e gasoso. Para CO2: > 30 graus Celsius; > 73 atm. Fácil de obter, inodoro, não é tóxico; como fase móvel é ideal para detecção por UV, pois não dá sinal no detector (não absorve). Entretanto para cromatografia de fluido supercrítico não foi criado um novo equipamento, havendo só uma adaptação dos equipamentos existentes de GC e HPLC (Agilent, antiga Hewlett Packard). Cromatografía de fluido supercrítico SFC

Historia de la cromatografía
Éter de petróleo (mezcla de hidrocarbonatos – pentano/hexano) Clorofila  mezcla de substancias (descubrió 6 pigmentos diferentes) Botánico ruso CaCO3 M. Tswett, Ber. Dtsch. Bot. Ges. 24 (1906) 316. M. Tswett, Ber. Dtsch. Bot. Ges. 24 (1906) 384 ÉTER DE PETRÓLEO : uma mistura de hidrocarbonetos ( não pertence a função éter), incolor,volátil e inflamável, principalmente de pentano e de hexano. Ferve entre 30 a 70oC e é usado como solvente A técnica escolhida foi a adsorção usando material sólido dentro de tubos, introduzindo a amostra no topo e em seguida passando um solvente através do sólido. (Cromatografia de adsorção = cromatografia líquido-sólido) T. Swett = 1903 apresentou seus primeiros trabalhos sobre o assunto. Nasceu em 1872 em Asti, Piemonte, Itália; estudou na Suíça onde fez doutorado em 1896, mudou-se para a Rússia, tornando-se professor. Mikhael Semenovich Tswett : pionero en el desenvolvimiento de la cromatografía.  estudio de pigmentos vegetales (1906)

Proceso Cromatógrafico
Muestra Flujo de la fase móvil Analito A Analito B A B

Que es la Cromatografía Gaseosa?
Cromatografía gaseosa es un método analítico donde los compuestos de una muestra son físicamente separados antes de la medición.

Que tipo de muestras pueden ser analizadas por GC?
Compuestos orgánicos en general Vaporizables a ~400 ºC Térmicamente estables Otras muestras pueden ser analizadas después de realizar un pré-tratamiento a las muestras.

Qué es un Cromatógrafo Gaseoso?
GC-2010 GC-17A GC-2014 GC-14B GC-8A

Componentes del GC Horno de la columna Columna Inyector
(Entrada de muestra) Columna Detector Sistema de procesamiento de datos Controlador de flujo de gas In gas chromatography, the main element is the column which performs the separation of the sample mixture into individual components. En cromatografía de gases, el elemento principal es la columna que realiza la separación de la mezcla de ejemplo en los componentes individuales.

Cromatógrama Intensidad de la Señal Tiempo
El cromatógrama es el gráfico obtenido por el análisis cromatográfico Cada pico del cromatógrama (idealmente) representa un único compuesto El tiempo en que el pico alcanza su intensidad máxima se refiere al tiempo de retención. Intensidad de la Señal Tiempo

Separación en GC Separación ocurre en la columna
Dos fases son envueltas: Fase estacionaria Fase móvil (gas de arrastre) Fase estacionaria reside en la columna Fase móvil se desplaza sobre a fase estacionaria

Separación en GC Los compuestos son separados por que se desplazan a tasas diferentes dentro de la columna.

Por que migran a tasas diferentes?
Interacciones intermoleculares atraen moléculas para la fase estacionaria Ej.: puente de hidrogeno Interacción mas débil Interacción mas fuerte Fase Estacionaria

Factores que Afectan la Separación
Estructura química de los compuestos (1) Fase estacionaria (2) Temperatura de la columna (3) M T ↑ S M T ↓ M M S S S (3) (1) (2)

Instrumentación Controlador de flujo de gas Inyector Columna Detector

Principales Componentes de GC
Muestra Analista Controlador de Flujo INJ Detector Gas (Hélio) Columna Software GC Horno Control del Instrumento Adquisición de datos Procesamiento de datos Almacenamiento de datos

Controlador de Flujo de Gas
Dispositivo usado para ajustar flujos de gas en el cromatógrafo de gases Dos tipos: Controlador de flujo manual Ej.: GC-14B, GC-17AP Controlador de flujo electrónico Ej.: GC-17AA, GC-2010 Ventajas de los controladores de flujo electrónico: Menos trabajo y operación mucho más simple. Reduce errores por operación manual como split ratio. Mejor repetibilidad y confiabilidad cuantitativa

Glass liner/ inyector liner/ glass insert
Componente del cromatógrafo gaseoso donde la muestra es introducida Vaporiza la muestra (solvente + compuestos a analizar) Mezcla el vapor de la muestra con la fase móvil (gas de arrastre) Transfiere vapor dentro de la columna Forma mas simple: Cámara de calentamiento Inyector liner/glass insert Flujos de gas Entrada de la muestra Entrada del gas de arrastre Flujo hacia la columna Glass liner/ inyector liner/ glass insert

Glass Insert Lana de vidrio silanizado
Por que usar glass insert: Eliminar contacto de la muestra con el metal (inyector) Calentamiento uniforme para mejor vaporización de la muestra Lana de vidrio silanizado Glass inserts de Shimadzu para columnas capilares

Cualidades Deseables del Inyector
Inyección de la muestra en la fase móvil sin dispersión de la muestra Vaporizar todos los solutos instantáneamente sin descomposición térmica No contaminar la muestra No perder la muestra

Tipos de Inyectores Inyector por Vaporización La muestra es inyectada en una cámara constantemente calentada Inyector Split/Splitless Inyector Wide Bore Programmed Temperature Vaporizing Injector (Inyector de vaporización a temperatura programada) La muestra es inyectada en una cámara donde la temperatura puede ser programada Inyector On-Column La muestra es introducida directamente dentro de la columna

Tipos de Inyectores Shimadzu
Inyector Split/Splitless Vaporización/ Inyector caliente Inyector Wide Bore Vaporización / Inyector caliente Inyector On-Column (OCI) Inyector frió, bueno para compuestos térmicamente inestables Inyector de vaporización con temperatura programada (PTV) Inyector frió, bueno para compuestos térmicamente inestables, alto punto de ebullición para inyección de gran volumen de muestra

Inyector Split/Splitless
Ventajas: Previene la introducción de componentes no volátiles de la muestra Desventajas: Discriminación de compuestos con alto punto de ebullición y compuestos térmicamente inestables. Dos modos de inyección en un único inyector Flujo de purga del septum Flujo de gas de arrastre Flujo split Flujo de la columna

Discriminación en el Inyector (de la muestra)
La muestra no es completamente vaporizada en el momento de la entrada de la columna Porcentajes diferentes de cada compuesto entra en la columna

Inyección Split Vapor de muestra mezclado con el gas de arrastre: Una pequeña parte del flujo entra en la columna (1-4ml/min.) La otra gran parte (10-100mL/min.) sale por la válvula split Volumen típico de inyección: 1-2 microlitros Valor split es determinado por: Split ratio = Flujo Split/Flujo de la columna

Inyección Split Purga del septum Arrastre
Para muestras con alta concentración Ventajas: En general los picos con buen formato Arrastre Split

Inyección Splitless Durante la inyección, válvula de la línea split es cerrada Todo el vapor de la muestra entra en la columna La línea de flujo split es reabierta aproximadamente después de 30 seg. a 2 minutos Purga del vapor restante del inyector

Inyección Splitless Purga del septum* Arrastre Split*
Para compuestos de nivel trazas Bueno para muestras semi-volátiles (analitos con puntos de ebullición encima de ~150) Arrastre Split* * Cerrado antes y durante la inyección

Inyector On-Column (OCI)
Deposita la muestra directamente dentro de la columna a baja temperatura Sin discriminación de la muestra para compuestos de alto punto de ebullición Minimiza la descomposición de los compuestos térmicamente inestables Desventajas: Contaminación más rápida de la columna Arrastre Entrada de aire frió Salida de aire frió OCI Insert

Inyector con Vaporización de Temperatura Programada (PTV)
El glass insert puede ser calentado y enfriado rápidamente La muestra es introducida en un inyector frió Minimiza la descomposición de la muestra y discriminación Compuestos no volátiles no son depositados directamente en la columna Permite inyección de gran volumen de muestra (con programación del flujo del split) Purga del septum Arrastre Salida de flujo split Entrada de aire frió Salida de aire frió

Inyector PTV/OCI Shimadzu
Sistemas de inyección de PTV y OCI de Shimadzu están disponibles en un único inyector OCI/PTV-2010 para GC-2010 series OCI/PTV-17 para GC-17A series

Tipos de Columnas para GC
Columna capilar Resina de poliamida Columna empacada Tubo de Sílica fundida Fase estacionaria Vidrio o acero inox. Material sólido para soporte Fase estacionaria (camada fina)

Tipos de Columna Capilar
Film de polímero revestido en la pared interna de la columna Porous Layer Open Tubular Partículas sólidas porosas revestidas en la pared interna da columna ~10% Partículas sólidas empacadas dentro de la columna Wall Coated Open Tubular Packed Capillary Depending on how the stationary phase is applied to the tubing, there are two main types of capillary column, packed capillary and open tubular capillary columns. In packed capillary column, the stationary phase is contained in solid packing materials which are then packed into the tubing. The packing density is usually less than in conventional packed columns, and this gives the columns higher permeability for gases. Packed capillary columns are not that popular, but sometimes they are used in special applications. (fluido super critico) In open tubular capillary columns, the stationary phase is coated as an even layer on the inner wall of the tube. The stationary phase can be either a porous layer of solid adsorbent material, such as alumina or molecular sieve, or a liquid, which is usually a type of polymer. We shall concentrate our discussion from now on the third type, which is usually called the Wall Coated Open Tubular capillary columns. ~90%

Fase Estacionaria Polisiloxano Polietileno glicol
Cromatografía Gas-Líquido (~90%) Polisiloxano Polietileno glicol Cromatografía Gas-Sólido (~10%) Materiales sólidos absorbentes, por ej., partícula molecular, alumina, etc. Uso: hidrocarbonatos muy volátiles (ej. CH4), gases inorgánicos (ej. N2, CO2)

Tipo de fase estacionaria (metil silicona)
CH3 O Si 100% Nombre de la fase estacionaria：　100% Dimetilpolisiloxano Polaridad ：　Apolar Propiedad de Separación ：　Elusión en orden del punto de ebullición Uso ：　Petróleo, solventes, compuestos con alto punto de ebullición Rango de temperatura ：　- 60℃ ～ 360℃ （430℃ posible) Nombre comercial ：　*** - 1

Tipo de fase estacionaria (Fenilmetil）
Si CH3 Nombre de la fase estacionaria ：　** % Difenil ** % Dimetilpolisiloxano Polaridad ：　Polaridad media Propiedad de Separación ：　Compuestos aromáticos son retenidos en el grupo fenil Uso ：　Aromas, ambiental, compuestos aromáticos Rango de temperatura ：　- 60℃ ～ 340℃ Nombre comercial ：　*** - 5, *** - 35, *** - 50, (*** - 17)

Tipo de fase estacionaria （Cianopropilfenil）
Si CH3 (CH2)3 C N Nombre de la Fase estacionaria ：　** % Cianopropilfenil ** % Dimetilpolisiloxano 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 Polaridad ：　Polaridad media para fuerte Propiedad de Separación ：　Eficaz en la separación de compuestos nitrogenados e isomeros, etc. Uso ：　Pesticidas, PCB, Compuestos nitrogenados　　　　　　　　　　　 (mejor evitar su uso con FTD) Rango de temperatura ：　- 20℃ ～ 280℃ Nombre comercial ：　*** , *** , *** - 225

Tipos de fase estacionaria（Trifluoropropil）
CF3 O Si CH3 (CH2)2 Nombre de la Fase estacionaria：　** % Trifluoropropil ** % Dimetilpolisiloxano 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 Polaridad ：　Polaridad media a fuerte Propiedad de Separación ：　Los compuestos halogenados son retenidos Uso ：　Compuestos halogenados, compuestos polares, solventes Rango de temperatura ：　- 20℃ ～ 340℃ Nombre comercial ：　*** - 200, *** -210

Tipo de fase estacionaria （Polietileno Glicol）
H O C Nombre de la fase estacionaria: Polietileno glicol Polaridad ： Fuertemente polar Propiedad de separación ： Retención de compuestos polares y fuertes Uso ： Compuestos polares, solvente, aromas éster metílico de ácidos grasos. Rango de temperatura ：　40℃ ～ 250℃ Nombre comercial ：　*** - WAX

Selección de la Fase Estacionaria
Escoja la fase líquida que más se asemeja en polaridad a los compuestos de interés del análisis.　　 Análisis de compuestos apolares-columna apolar (ej.: Rtx-1) Análisis de compuestos polares-columnas con polaridad fuerte (ej.: StabilWAX) Escoja la fase líquida de acuerdo con el propósito del análisis. Cuando la diferencia de los puntos de ebullición de los compuestos es grande. －Columna apolar (ej.: Rtx-1) Cuando la diferencia de los puntos de ebullición de compuestos no es grande como isomeros - Columna con polaridad fuerte (ej.: StabilWAX)

Dimensiones de Columna Capilar para Aplicaciones en GC
Longitud Normalmente 30 ~ 60 m Diámetro interno Normalmente 0.25 mm (narrow-bore), 0.32 mm (semi wide-bore) o mm (wide-bore) Espesor de la fase estacionaria Normalmente 0.1 ~ 3 micrones

Detector Detector indica la presencia de cada componente que eluye de la columna Cantidad de componentes pueden ser medidas basándose en la señal del detector en función del tiempo

Detectores para GC Flame Ionization Detector (FID) Detector por Ionización de Llama Thermal Conductivity Detector (TCD) Detector por Conductividad Térmica Flame Thermionic Detector (FTD/NPD) Detector Termoiónico de Llama Flame Photometric Detector (FPD) Detector Fotométrico de Llama Electron Capture Detector (ECD) Detector por Captura de Eletrones Surface Ionization Detector (SID) Detector por Ionización de Superfície Mass Spectrometer Detector (MSD) Detector de Espectro de Masas etc. Universal Universal Selectivo Selectivo Selectivo Selectivo Universal & Selectivo

Gas de Arrastre y de Detector
He e N2 (No en caso de columna capilar, es preferible Helio) El gas debe tener pureza de % o más. Gas para Detector TCD … No utiliza FID … H2、Ar ECD … N2(En caso de columnas empacadas, el gas de arrastre N2. En de columna capilar, N2 es utilizado como gas makeup) 　 FTD … H2 、Ar FPD … H2 、Ar SID … Ar

Detectores ＊Cantidad mínima detectable del patrón. Puede cambiar con la estructura de los compuestos en condiciones analíticas.

TCD (Detector de Conductividad Térmica)
Es posible detectar todos los compuestos excepto el gas de arrastre Es utilizado principalmente helio como gas de arrastre 　(Pero, cuando se analiza helio e H2, N2 e Ar son utilizados) → Constante de Conductividad Térmica（10-6cal/sec・cm・ ℃) 　　　He：408　　H2：547　（Muy alta）　　　N2：73　　Ar：52　　O2：76　　H2O：60 Etano:77 　　　Metanol：52　　Acetona：40　　 Cloroformo：24　… Principales ejemplo de aplicación Análisis de Gases Análisis de compuestos indetectables por FID, como agua, formaldehído y ácido fórmico.

FID (Detector por Ionización de Llama)
Responde a casi todos los compuestos orgánicos (que contiene carbono) <excepción> No hay respuesta para C del grupo carbonilo o carboxilo (C=O). (CO, CO2, HCHO, HCOOH, etc.) Principales ejemplos de aplicación Análisis de compuestos orgánicos HCHO (Formaldehído) Sim respuesta CH3CHO(Acetaldehído) Respuesta H - C - H O CH3 - C - H

FID (Detector por Ionización de Llama)
Compuestos orgánicos son quemados en la llama de hidrogeno formándose iones. Aire Hidrogeno gas Makeup） Salida de la columna Procesamiento de datos Colector Oxidación CH CHO+ ＋ e- (O) Llama Oxidación CN NO+ ＋CO＋ e- 2(O) Alto voltaje Genera señal eléctrica cuando los iones son colectados Aguja de Cuarzo (nozzle)

FTD (Detector Termoiónico de Llama) NPD (Nitrogen Phosphorus Detector)
El detector posee una alta selectividad y alta sensibilidad para compuestos orgánicos nitrogenados, y para compuestos orgánicos e inorgánicos fosforados. (En la selectividad de compuestos fosforados, FPD es mejor) No responde a compuestos inorgánicos nitrogenados Principales ejemplos de aplicación Análisis farmacéuticos, pesticidas órgano nitrogenados y órgano fosforados

ECD (Detector por Captura de Electrones)
Este detector puso alta selectividad y alta sensibilidad a los compuestos eletrofílicos. (compuestos orgánicos halogenados, órgano metálicos y dicetonas) Como el detector es equipado con radioisótopo, es necesario obtener documentación de aprobación de uso/instalación. Principales ejemplos de aplicación Análisis ambiental Residuos de PCB, pesticidas clorados VOC clorado en aguas residuales Mercurio orgánico en el ambiente

ECD (Detector por Captura de Electrones)
Procesamiento de datos Colector N2 usado como gas de arrastre (gas makeup) es ionizado la emisión de partículas β por el 63Ni. Exaustación β rayo N2 N2+ ＋ e- Genera corriente eléctrica cuando electrones son capturados por el colector (corriente inicial) Si entran compuestos eletrofílicos : PCB ＋ e- PCB- Como PCB- es un compuesto bien mayor comparando con e-, demanda tiempo para alcanzar al colector  diminuye la corriente eléctrica 63Ni fuente radioativa10mCi Gas Makeup Salida de la columna

FPD (Detector Fotométrico de Llama)
Este detector puso alta selectividad y alta sensibilidad a los compuestos fosforoso (P), sulfuroso (S) y orgánico estañazo Selectividad de detección es la mas alta pues detecta la luz característica del elemento que emite luz en la llama del hidrogeno Principales ejemplos de aplicación Análisis de pesticidas órgano fosforados Análisis del olor repugnante de azufre / análisis de aroma en alimentos Análisis de estaño orgánico en los productos marinos

FPD (Detector Fotométrico de Llama)
Foto multiplicadora Procesamiento de datos. Data processor Combustión de compuestos S, P y Sn, emite luz con la longitud de onda inherentes. Dejando pasar esa luz por el filtro, solamente o la longitud de onda inherente alcanza al foto multiplicador. La intensidad de la luz amplificada es cambiada por la señal eléctrica del foto multiplicador. Ar Filtro Tubo de Cuarzo Solamente la luz con longitud de onda específico puede pasar por el filtro For S (azul) ･･･394nm For P (amarillo) ･･･526nm　 For Sn (naranja) ･･･610nm Hidrógeno （＋gas Makeup） Salida da columna

SID (Detector de Ionización de Superficie)
Este detector coloco alta selectividad y alta sensibilidad para compuestos poli aromáticos y aminas terciarias (Detección de varios 100fgs es posible para amina trimetil) Principales ejemplos de aplicación Trialquilamina (análisis de olor repugnante) Análisis farmacéutica Análisis de compuestos poli aromáticos.

Espectrometría de Masas (MSD)
Mide la abundancia de iones producidos por ruptura del compuesto en fragmentos con valores de masa/carga (M/Z) característicos

MSD-Características Alta sensibilidad
Proporciona un espectro de masa de cada compuesto Destructivo Ideal para el análisis de muestras con matrices complejas Ideal para el análisis de trazas (ppb-ppt)

Espectrometría de Masas (MSD)

Espectrometría de Masas – Fuentes de ionización
De impacto electrónico Fuente de electrones: filamento incandescente, los electrones son acelerados por una diferenciad e potencial entre 5 y 70eV. Enfoque: campo magnético, paralelo a la dirección de los electrones, describiendo una trayectoria helicoidal hasta llegar a un ánodo en donde son recogidos. Ingreso de muestras: las moléculas ingresan atravesando el haz de electrones de alta energía colisionando con ellos.

El más probable de éstos mecanismos es la formación de un radical ABC+ Los demás mecanismos son de 1000 a veces menos probables.

La molécula, una vez ionizada, y fragmentada, se utiliza una placa cargada positivamente para repeler los iones fuera del haz de electrones, utilizando un potencial eléctrico elevado entre 1 y 10kV que se establece entre el final de la fuente de iones y una placa situada detrás de ella. El proceso de producción de iones dependerá de la energía de los electrones (70eV) Esta energía es muy superior a la de la ionización de la molécula, por lo tanto se formaran moléculas

Impacto electrónico Problemas: Dependiendo de la naturaleza de la molécula, algunos iones serán más estables que otros, existiendo algunos casos en donde el ion molecular sufra muy poca descomposición, mientras que en otros casos la importancia de los procesos secundarios será tan grande que apenas quedará ion molecular. Dificultad para la identificación de la molécula.

Ionización Química Como agente ionizante se utiliza un ion que transfiere su carga a la molécula de nuestra muestra por medio de una reacción biomolecular. La fuente de iones en este caso es igual a la de impacto electrónico Se introduce metano en la fuente de iones siendo ionizado por lo electrones. Al ion originado se lo denomina ion cuasimolecular (presenta una unidad más de masa que el ion molecular original) y éste se origina casi sin exceso de energía interna por lo que presentará tendencia a no descomponerse.

Comparación de detectores

VENTAJAS DE LA CROMATOGRAFIA GASEOSA
Análisis rápido, generalmente minutos Eficiente, provee alta resolución Sensible, detecta fácilmente concentraciones de ppm a ppb Análisis cuantitativo con buena exactitud, valores de RSD de 1-5% Requiere pequeña cantidad de muestras, generalmente µL Barato

DESVENTAJAS DE LA CROMATOGRAFIA GASEOSA
Limitado a muestras volátiles, o derivatizables No es adecuado para muestras termolábiles Requiere espectroscopia, generalmente espectrometría de masas, para confirmar la identidad de los picos

APLICACIONES Análisis de alimentos: Análisis de Triglicéridos

APLICACIONES Análisis de alimentos: Análisis de Etilenglicol en vinos

APLICACIONES Análisis de alimentos: Análisis de Residuos de Pesticidas

APLICACIONES Análisis Industrial: Análisis de Gasolina

Gas Makeup para Detectores GC
Volumen de detectores comunes son grandes Cuando se usa columna capilar, flujo adicional de gas, el makeup gas, es normalmente requerido Previene dispersión de zonas cromatograficas en el detector (deterioración de separación) The volume of the common GC detectors are usually large. When capillary columns are used, the effect of this large volume is to disperse the chromatographic zones, and hence deteriorate the separation of the compounds. To avoid this problem, usually an additional flow of gas is used. This gas is usually referred to as a make-up gas.

Cromatograma

Cromatograma Definiciones: tR : Tiempo de retención
Tiempo en que el analito permanece dentro de la columna cromatográfica, siendo medido desde el momento de la introducción de la muestra en el sistema hasta el momento del punto máximo de la señal del pico. to : Tiempo muerto Tiempo necesario para elusión de analitos no retenidos en la columna. A : Área Determina la identidad del componente tR Pico Señal A to Tiempo Proporcional a la cuantidad de analito

Cromatograma Picos Línea de Base Tiempo de Retención
4.014 min. 5.180 min. Punto de inyección de la muestra

Picos con Formatos Ruins
Pico con cola Cuando los componentes son adsorbidos en el glass insert o en la columna. Cuando los componentes polares son analizados con una columna de fase líquida apolar (o inverso), puede aparecer cola en muchos casos. Cola frontal Cuando la columna es sobrecargada con los componentes de la muestra. Cuando la temperatura de la columna es muy baja. Cuando la temperatura del inyector es baja

Longitud del Pico Pico corto Pico largo
Columna capilar： Generalmente, el pico es corto Columna empacada： En un análisis isotérmico, el pico que eluye primero queda mas corto. Pico largo Packed Column： En un análisis isotérmica, el pico que eluye después queda mas largo.

Deriva da Línea de Base Deriva
En un análisis con temperatura programada, debido al aumento del vapor por el sangrado de la columna, la línea de base puede subir.

Unidad（Peso/Volumen)
mL =　10-3L　 μL =　10-6L nL =　10-9L Peso 　 g mg　=　10-3g　 μg　=　10-6g ng = 10-9g pg = g fg = g Cuando el peso específico es 1 1mL　=　1g 1μL =　1mg 1nL 　=　1μg

Unidad （Concentración）
ppm　=　10-6 　　　　　　　（millón) ppb　 =　10-9 　　　　　　　（billón) ppt　 =　10-12 　　　　　　　（trillón) 1ppm En caso de muestras líquidas 1μg / g = 1 ppm (w/w) 1nL / mL = 1 ppm (v/v) ［1μg / mL ≒ 1 ppm (w/v)] En caso de muestras gaseosas 1μL /L = 1 ppm (v/v)　　　　

Aplicaciones de GC Seleccionando la configuración para el análisis
Análisis de la muestra Análisis de datos Visión general de las técnicas de muestreo en GC

Seleccionando la Configuración
Consideraciones de los propósitos de análisis de la muestra Seleccionando la columna para GC Seleccionando el detector

Consideraciones de los Propósitos de Análisis de la Muestra
Compuestos de interés Volatilidad Estabilidad térmica Condición de la muestra (matriz) Gas Líquido Sólido Fuente biológica Ambiental Propósito del Análisis Cualitativa Peso molecular Sensibilidad de detección

Seleccionando Columna para GC
Empacada o capilar? Que fase estacionaria? Que espesor del film de la fase estacionaria? Diámetro interno de la columna? Longitud de la columna?

Columna Capilar o Empacada?
Consideraciones generales: Resolución Columna empacada: resolución baja, número pequeño de componentes Columna capilar: alta resolución, número grande de componentes baja alta

Que tipo de fase estacionaria?
Cromatografía Gas-Líquido: Polaridad de los analitos y de la fase estacionaria Para compuestos con polaridad similar Solutos con polaridad similar a la polaridad de la fase estacionaria son más retenidos (“semejante atrae a lo semejante”) En otras palabras, compuestos polares son mucho más retenidos por la fase estacionaria polar de los que son menos polar. Polaridad de la fase estacionaria es determinada por la polaridad de los grupos funcionales del material de la fase estacionaria

Polaridad Técnicamente, polaridad se refiere a la distribución de electrones en la molécula Moléculas apolares poseen distribución igual o casi de electrones CH3-CH2-CH2-CH2-CH2-CH3 Moléculas polares poseen distribución de electrones desiguales; cuando mas desigual fuera, mas polar será la molécula CH3–OH

Espesor del Film de la Fase Estacionaria
Influencia directamente en la retención de la columna Cuanto mas el film fuere grueso, retiene mas analitos y vice-versa Ejemplos: Compuestos muy volátiles requiere fase estacionaria con mas espesor Compuestos con alto punto de ebullición requiere fase estacionaria mas fina df = espesor de la fase estacionaria = 0.1 ~ 5 micrón

Diámetro Interno de la Columna
Consideraciones: Concentración de la muestra vs. capacidad de la muestra (cantidad máxima de muestra que puede ser cargada dentro de la columna sin causar distorsión del pico) Capacidad aproximada de la muestra en la columna 0.25 mm i.d. : ng por compuesto 0.32 mm i.d. : ng por compuesto 0.53 mm i.d. : ng por compuesto Instrumentación, ej., limitación de la presión en la entrada de la columna, limitación de tasa de flujo da columna Por ej.: Aplicaciones en GC/MS se utiliza en general columnas de 0.25mm a 0.32 debido a la limitación de la tasa de flujo de la columna

Longitud de la Columna Consideraciones:
Poder de resolución aumenta con columnas largas Tiempo de análisis aumenta con columnas largas Temperatura de la columna durante el análisis Isotérmica: tiempo de retención aumenta (como tiempo de análisis) mas que el aumento en la resolución Programa de temperatura: tiempo de retención es más dependiente con la temperatura Costo aumenta con columnas más largas

Análisis de la muestra Análisis de los datos Visión general de las técnicas de muestreo en GC

Proceso Básico de Análisis en GC
1. Configuración del Instrumento 2. Ajuste de los parámetros de operación del instrumento 3. Análisis de la muestra patrón 4. Crear (compound table) y ajustar parámetros cuantitativos 5. Análisis de la muestra patrón 6. Crear curva de calibración 7. Análisis de muestras desconocidas 8. Cálculo de la concentración

Configuración del Instrumento
Preparar inyector Instalar columna Conectar el instrumento Estabilizar la temperatura Configuración del Sistema (System Configuration)

Método para GC (Parámetros del Instrumento)
Temperatura del inyector, Presión en la entrada de la columna o flujo del gas de arrastre /velocidad lineal, relación split, programa de temperatura del horno de la columna, temperatura del detector, etc. Parámetros para Procesamiento de Datos Tabla de Compuestos Parámetros de integración de los picos Curvas de calibración, etc. Desenvolvimiento del método para separación de los compuestos de interés

Parámetros Cromatográficos
Temperatura del inyector y del detector Normalmente ajustado entre 250 – 280 ºC Modos de inyección Split : generalmente para muestras de concentración alta Splitless: generalmente para muestras de concentración baja Programación de la temperatura de la columna Temperatura constante (isotérmico) Temperatura programada Injector & Interface temperature The temperature of the injector must be set so that it is sufficient to vapourise the sample. For most organic compounds, the injector temperature of around 230C and 280C are sufficient. Information about the boiling point or volatility of the analytes is useful in determining if the sample can be vapourised in the injector. The interface is the part of a GC/MS which allows the column effluent to be transferred from the gas chromatograph into the mass spectrometer ion source. The basic interface of a GC/MS consists of a heated block through which the capillary column is passed so that the column end reaches the ion source of the mass spectrometer. The interface temperature generally is set around 230C to 280C, and must be set at equal or higher than the final column oven temperature so that the sample remains in the vapour phase when it enters the mass spectrometer. In addition, consult the GC/MS system manual to find out the maximum operating temperatures of the injector and the interface. Injection modes There are different types of GC injector used for different purposes. The generally used injector design for many GC and GC/MS instruments is the split/splitless injector, which can be used for split or splitless injection mode. Split injection is usually used when the amount of sample to be introduced into the capillary column exceeds the capillary column’s sample capacity. The capillary column’s sample capacity is generally small. However, the minimum practical volume of sample that can be injected reasonably accurately into the gas chromatograph is 1 L. So in split injection, the sample vapour is split inside the injector, so that only a fraction of the vapour is carried into the column, while a larger fraction is vented out of the GC. Splitless injection mode is usually used to introduce the whole amount of the analyte present in the injected sample, such is when analysing a low concentration sample. Column temperature program In GC/MS analysis, optimisation of the chromatographic separation is mainly done by adjusting the column temperature (strictly speaking, the column oven temperature). This is because in GC/MS it is easier and more convenient to change the column temperature program, compared to changing the column itself, which involves breaking the vacuum and re-establishing the vacuum. In capillary column analysis, normally the column temperature is programmed to increase at constant rate (temperature programmed analysis), instead of remaining at the same temperature throughout the analysis (isothermal analysis). Increasing the column temperature with time in general will shorten the retention time of the every analyte in the sample and hence reduce the analysis time. However, the temperature increase will also reduce the peak separation. The higher the rate, the closer together are the peaks.

Análisis Básica de Datos en GC
Análisis Cualitativa Mismo compuestos tendrán el mismo tiempo de retención en las condiciones particulares de análisis. Comparar tiempos de retención de los picos de la muestra con los del patrón. Análisis Cuantitativa Área del pico está relacionada a la cantidad de compuestos inyectados Comparar el área del pico de la muestra desconocida con la de la muestra patrón. ？

Análisis Cualitativa Cuando el análisis es realizada sobre las mismas condiciones analíticas, el mismo compuesto eluye al mismo tiempo. (Tiempo de retención es igual) Muestra desconocida Muestra patrón (solución mezcla de componentes A y B) Componente A Componente B Inyección de la muestra Como el tiempo de retención es la única información cualitativa, es necesario la muestra patrón en GC.

Análisis Cuantitativa
El área del pico (altura) del componente es proporcional a la cantidad de componente que se ha detectado. 100 Conc. (ppm) 1000 Área do pico 700 70 Componente A Muestra desconocida 1μL Área del pico　：　700 Muestra patrón 1μL (Componente A 100ppm) Componente A Área del pico：　1000 La muestra patrón es necesaria también para el análisis cuantitativo.

Qué es la cuantificación?
Determinación de la concentración individual de los compuestos a ser separados En GC, el objetivo es lograr la separación completa de los compuestos para que los compuestos detectados sean puros y con eso puedan ser determinadas sus concentraciones con exactitud. Principales métodos para cuantificación. Método de porcentaje de área (Normalización) Método de normalización de área corregida Método de calibración absoluta (patrón externo) Método de patrón interno

Calibración Y = (constante) . X Medición de una mezcla de patrones
Generación de curva que muestra la relación entre la concentración y el área del pico (o altura del pico) para cada compuesto (curva de calibración) Y (Área) Y = (constante) . X X (Concentración)

Método de Normalización
Determinar la composición relativa de la muestra Contenido del compuesto en una muestra (C) : Ci = Ai/AT x 100% Ai = Área del pico del compuesto en el cromatograma AT = Área total de los picos en el cromatograma Atención: Asumiendo que la respuesta del detector sea la misma para diferentes compuestos Asumiendo que los compuestos de la muestra inyectada sean todos detectados y produzcan picos Aplicables para detector TCD 10000 6000 4000 B C A

Método de Normalización de Área Corregida
Determinar la composición relativa de la muestra Ajuste (corrección) es realizado llevándose en cuenta la diferencia de la respuesta del detector para diferentes compuestos La muestra que contienen compuestos con concentraciones conocidas son analizados primero. 50% 30% 20% A B C Área 5000 6000 3200

Método de Patrón Externo
Determinar las concentraciones absolutas de los componentes de la muestra Implica: Medición de la mezcla de patrones con concentraciones conocidas Generación de la curva de calibración de patrones externos (que muestra relación entre concentración absoluta/cantidad de los componentes en su área/altura del pico) Medición de la muestra con concentraciones desconocidas de sus componentes Cálculo de las concentraciones de los componentes de las áreas/alturas de los picos

Método de Patrón Externo
Y (Área) Y = (constante) . X Patrón Área RF = Conc. Muestra X (Concentración) Patrón y muestra deben ser analizados sobre las mismas condiciones porque el área y la altura del pico son dependientes de las condiciones analíticas Importante: volumen de la muestra inyectada debe ser consistente

Método de Patrón Interno
Consiste en adicionar una cantidad conocida de una substancia (patrón interno) en la muestra a ser analizada y relacionar las dos áreas obtenidas. El patrón interno debe ser similar a las substancias a ser cuantificada y no debe contener la muestra.

Patrón Interno Y = (constante) . X = Ai/AIS RF Ci/CIS
Relación entre las áreas del compuesto de interés y el patrón interno (Ai/AIS) Ai/AIS RF = Ci/CIS Muestra Relación de la concentración del compuesto de interés y el patrón interno (Ci/CIS)

Patrón ( Standard) para Calibración - Método de Patrón Externo
Solución madre: Compuestos de interés + Solvente CAL 1 CAL 2 CAL 3 CAL 4 CAL 5 Aumento de la concentración de los compuestos a analizar

Patrón para Calibración - Método de Patrón (Standard) Interno
Solución del Standard Interno (Internal standard (I.S.)) Solución madre: Analito + Solvente CAL 1 CAL 2 CAL 3 CAL 4 CAL 5 Aumento de la concentración del compuesto a analizar Concentración del I.S constante

Técnicas de Introducción de la muestra al GC
Inyección Líquida Headspace (HS) Microextracción en fase sólida (SPME) Pirolisis Deserción térmica (TD)

Inyección Líquida Mayoría de las muestras introducidas en el GC/MS son líquidas Microjeringas es normalmente utilizada para inyección de muestras líquidas Capacidad de la jeringa: normalmente 10 microlitros Formato da la aguja:

Headspace (HS) Extracción de compuestos orgánicos volátiles y semi-volátiles presentes en la matriz líquida o sólida. Por ej.:. VOCs en el agua, solventes residuales en materiales de embalaje, fragancias en alimentos, etc.. Como funciona: Equilibrio Incubación 3. Un volumen fijo de vapor es introducido en el GC 2. Equilibrio termodinámico. Concentración de los analitos en la fase vapor es representativo aquel presente en la muestra original 1. Incubación de la muestra

Micro extracción en fase sólida (SPME)
Extracción de compuestos orgánicos volátiles y semi-volátiles de la matriz sólida o líquida, por ej. Residuos de pesticidas en agua, compuestos de aroma & fragancia en alimentos, materiales residuales de explosivos, etc..

Muestreo por SPME Desorción Adsorción
Analitos son adsorbidos en el material de revestimiento de la fibra, tanto de la solución como del headspace. Analitos son térmicamente desorvidos de la fibra y entra en el GC Fibra de sílica fundida revestida con material adsortivo y expuesta con la muestra en un vial sellado.

Inyección Automática de la Muestra
Shimadzu Auto-inyector / Auto-muestreador: AOC-20i e AOC-20s  Inyección de muestras líquidas AOC-5000  Inyección Líquida  Inyección/muestreado por Headspace  Inyección/muestreado de SPME

Pirolisis Para análisis de muestras que no pueden ser vaporizados por el inyector de GC, normalmente polímeros Como funciona: La muestra es descompuesta por el calentamiento (pirolizado) Productos de la descomposición son analizados por el GC

Desorción Térmica Extracción de compuestos orgánicos volátiles de las matrices sólidas o de aire. Por ej.: VOCs en el aire del un ambiente cerrado, componentes de sabor y fragancia en condimentos, solventes residuales en embalajes de alimento, etc..

Mantenimiento Básico & Troubleshooting de GC
Mantenimiento del inyector Mantenimiento de la columna Problemas comunes con GC

Medidas Preventivas Varios motivos pueden ser causales para un problema/síntoma particular Siempre use el equipamiento apropiadamente Realice el mantenimiento necesario Verifique constantemente las condiciones generales de operación del equipamiento Mantenga un libro de registro Inyecte la cantidad apropiada de la muestra

Mantenga un Libro de Registro (Log Book)
Reserve un libro por sistema Deje cerca del sistema Describa en la tapa: Configuración del Instrumento, ID, Número de Serie, etc. Registre todas las actividades ej. Datos, de mantenimiento, cambio del cilindro, instalación, número de inyecciones, nombre del operador, etc. Problemas, sospechas o algo diferente Soluciones para los problemas Llamada al servicio técnico y resultados

Mantenimiento del Cromatógrafo de Gases
Inyector Columna Controladores de Flujo Abastecimiento de Gas

Mantenimiento del Inyector
Verifique o sustituya si es necesario: Septum – use de alto desempeño y vea el limite de la temperatura Glass insert – use el apropiado O-ring para glass insert – sustituya cuando cambie el glass insert Sustituya: Cuando este contaminado con porciones no-volátiles de la muestra Cuando este dañado. Medidas preventivas: Ejecute cleanup de la muestra para remover componentes no volátiles Minimice “backflash” usando pequeño volumen de inyección posible NOTA: Ejecute el mantenimiento cuando INJ < 50 ºC

Limpiando el Glass Insert
Enjuague con solventes (metanol, acetona o hexano) si no tuviere depósitos visibles Si tuviere depósitos visibles: Colocar en solvente y usar ultrasonido. Usar cepillo blando (que no arañe la superficie) Usar ácido para lavado. Inertizar glass insert si la superficie estuviere arañada o lavada con ácido

Tornando un Glass Insert Inerte
Agente silanizante: 5% Dimethyldichlorsilan (DMDCS) en tolueno Puede ser adquirido por Supelco (cat. no U) Sumerga el liner en la solución DMDCS y deje por una noche. La lana de de vidrio también puede ser inertizada separada del liner. 1. Purgar el liner con tolueno 2. Purgar con etanol absoluto 3. Seque el liner con gas nitrógeno (introduzca el flujo para dentro y fuera del liner) Acondicionar el liner dentro del inyector a 300°C como mínimo por 2-3 horas o por una noche. Después secar el liner, colocar dentro del inyector lo más rápido posible.

Mantenimiento de la Columna
Cambio de columna Uso de la columna Acondicionamiento de la columna Almacenamiento de la columna

Instalación de la Columna (1)
Verifique visualmente por cualquier contaminación o quebradura. Instale la columna en el lado de inyección Instale el nut apropiado en la columna Instale vespel ferrula de tamaño y tipo apropiado para la columna ‘Marcar’ la ferrula de grafito (graphite ferrule) Corte la punta de la columna Mida la longitud de la columna para posicionar correctamente al anillo con el gabarito obtenido. Limpie la columna con paño libre de suciedades y acetona Encaje en lado de inyección Verifique el flujo de gas de arrastre en la columna (“Tes de burbuja”)

Instalación de la Columna (2)
Corte la punta de la columna capilar con herramienta apropiada Corte en perpendicular para mejores resultados cromatográficos Normalmente corte de 1 a 2 cm. es lo adecuado. Inspeccione el corte con una lupa. Evite arañar la columna

Uso de la Columna Use columna dentro del rango de temperatura de operación especificada Verifique el estado general de la columna Verifique la información sobre a columna Limite inferior de temperatura Limite superior de temperatura Use guarda columna cuando debe analizar muestra que tiende a deteriorar la columna rápidamente

Muestras que deterioran rápidamente las columnas de GC
Fluidos biológicos Tejidos biológico Suelos Lana Agua de desechos Porque Contienen alto nivel de residuos no volátiles

Acondicionamiento de la Columna
Tratamiento para remover impurezas de la fase estacionaria de la columna Previene líneas de base instables y la contaminación del detector Conecte la columna con el inyector mas no con el detector Con la columna a temperatura ambiente, deje fluir el gas de arrastre a través de la columna por 15 a 20 minutos para remover e aire Aumente la temperatura de la columna a 10 ºC/min. hasta la temperatura máxima a que la fase estacionaria puede ser utilizada Deje la columna a la temperatura elevada por 2 horas (para columnas capilares) y varias horas para columnas empacadas

Otras formas de remediar la contaminación en la columna
Cuando es contaminado por porciones no volátiles de la muestra: Corte las puntas de la columna (si es necesario 0.5m a 1m del lado del inyector Substituya por uno nuevo

Almacenamiento de la Columna
Cierre la columna del aire (oxígeno y humedad) cuando no está en uso Para tapar las puntas de la columna se puede aprovechar el septum usado o tapas especiales. Registre el uso de la columna (temperatura más alta utilizada, muestras analizadas utilizando dicha columna)

Controlador de Flujo de Gas
Mantenimiento de rutina: Substituya el purificador de gas (gas traps) para el split y purgue las líneas de flujo a cada 6 meses o conforme a la necesidad dependiendo de: Número de inyecciones Muestra Ajuste de split ratio

Mantenimiento del Gas de Arrastre
Certifique la pureza del gas para: Minimizar interferencia/background Asegure el abastecimiento del gas para prevenir deterioros de la columna Como: Use gas de arrastre con pureza % o mejor Prevenga perdidas de aire para dentro del gas de arrastre Use purificador de gas de arrastre Cambie el purificador de gas de arrastre conforme a la necesidad Verifique la presión del gas de arrastre diariamente Verifique los reguladores de gas cada 3 meses

Estrategia General para Troubleshooting
Examine los síntomas Considere las posibilidades Verifique primero las partes obvias como: Abastecimiento de gas – presión correcta, gas correcto Flujo de gas – velocidad lineal de gas de arrastre, flujo split, etc. Temperaturas Pérdidas en los nut, septum, líneas de gas Detector – está encendido? Sistema de datos – canal correcto? etc. Verifique cualquier cambio que hubiere en el sistema Use UNA medida correctiva por vez Haga el ajuste y reparos Testee.(Pruebe) Note : __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Herramientas Útiles para Troubleshooting
Columna de referencia (duplicada) Nueva jeringa Nuevo septum, ferrule, glass inserts Detector de perdida de gas. Medidor de flujo de gas Termómetro Libro de registro Manual del instrumento

Problemas más Comunes en GC
Pico fantasma Deriva de la línea de base Efecto cola en el pico Ausencia de picos Cambio del tiempo de retención

Qué es un pico fantasma? Un pico en el cromatograma
Identidad desconocida Apariencia inconsistente entre las corridas Principales causas posibles: Acondicionamiento insuficiente de la columna; algunas impurezas en la columna obstruyen durante el análisis Contaminación en el inyector; con la contaminación en el inyector son vaporizadas los contaminantes y entran en la columna Contaminantes en el gas de arrastre o de las tuberías del gas de arrastre

Como verificar la causa del pico fantasma
Acondicionamiento insuficiente de la columna El pico fantasma aparece solamente una vez Repita las inyecciones de la misma muestra y verifique la repetibilidad Contaminación en el inyector El pico fantasma aparece consistentemente Inyecte una pequeña cantidad de solvente y verifique los picos que no sean del solvente Con inyecciones repetidas de la muestra el tamaño del pico fantasma diminuye Contaminante en el gas de arrastre o de la tuberías del gas de arrastre Aparece más como nivel alto de ruido, que como pico.

Acciones Correctivas para Pico Fantasma
Acondicionamiento insuficiente de la columna Ejecute condicionamiento suficiente de la columna (hasta la temperatura máxima del análisis) Contaminación en el inyector Si el tamaño del pico fantasma no disminuye significantemente, aumente la temperatura del inyector, e inyecte el solvente repetidamente hasta que desaparezca el pico fantasma Cambie el glass insert Cambie el septum Contaminación del gas de arrastre o de la tubulación de gas Instale filtro de partículas molecular en la línea de gas de arrastre Cambie las tuberías

Deriva en la Línea de Base
Movimiento ascendente e/o descendente de la línea de base del cromatograma No confundir con sangrado de la columna Causas posibles: Contaminación de la columna por residuos semi-volátiles Sangrado excesivo de la columna Detector no fue estabilizado Note : __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Como verificar las causa de deriva de línea de base
Contaminación de la Columna Mezclas para Test: Alcoholes exhibe efecto de cola en el pico si la columna estuviera contaminada Hidrocarbonatos no son afectados por la contaminación al menos que sea bien severo Corte 0.5 m – 1 m del lado del inyector y pruebe Sangrado excesivo de la columna Ejecute el programa de temperatura sin inyecciones (corrida de blanco) 50ºC  limite de temperatura isotérmico a 10 a 20 ºC/min., mantenga la temperatura final por 10 min. Perfil : Sin un pequeño aumento de la Línea de base en las regiones de temperaturas mas bajas Aumento agudo a 30-40C debajo del limite de temperatura superior Línea de base horizontal en la región isotérmica Ausencia de picos

Acciones Correctivas para Deriva de Línea de Base
Contaminación de la Columna Corte 0.5 m – 1 m la columna del lado del inyector Lave la columna con un volumen grande de solventes (NO para fase estacionaria no-activada) NO es lo mismo que inyectar volumen grande de solvente Condicione la columna (con temperaturas altas) por cerca de dos horas para columnas capilares (NO MAS) Sangrado excesivo de la columna Substituya columna si el sangrado fuere inaceptable Prevenga exponer al oxigeno, a ácidos minerales y bases durante el análisis o almacenamiento Prevenga exponer por mucho tiempo la columna capilar a altas temperaturas

Efecto Cola normal Con cola
Pico con cola es causado por el hecho de que la molécula se mueve mas a lo largo de la columna que la mayoría de los compuestos Principales causas posibles: Contaminación de la columna y del inyector por residuos no volátiles Volúmenes muertos debido a instalación incorrecta do glass insert o de la columna Compuestos activos que están interviniendo con sitios activos en el inyector o la columna Fase estacionaria no muy adecuada para la muestra Coelucion de dos picos

Causas de Pico con cola Contaminación de la columna y el inyector
Vea el Test para Contaminación en Deriva de Línea de Base Volúmenes muertos Pico con cola es mas severo para los picos que eluyen primero Actividad de compuestos Normalmente la cola es mas severo en los picos que eluyen después Fase estacionaria no muy adecuada para la muestra Cambie la columna con fase estacionaria de polaridad diferente

Acciones Correctivas para Pico con Cola
Contaminación de la columna o inyector Para columna, vea presentación anterior Para inyector, substituya por un glass insert nuevo, silanizado Volumen muerto Reinstale glass insert y columna con mas cuidado Actividad del compuesto Use glass insert inerte/silanizado Use columna limpia

Ausencia de Picos Principales causas posibles:
Salida del detector no está conectada apropiadamente al sistema de datos Gas de arrastre con flujo muy bajo o sin a través de la columna Jeringa trancada o sucia Si utiliza automuestreador Volumen de la muestra insuficiente en el vial Posición errada de vial Inyección en el inyector errado Columna rota Columna instalada en el inyector o detector errado

Pruebas para Causa de Ausencia de Picos
Verifique conexión del detector (al sistema GC) al sistema de datos Sin flujo en la columna Verificar si el flujo de la columna con la columna instalada en el inyector y no al detector, coloque la otra punta en un solvente (hexano, acetona). Si tuviere flujo en la columna, va aparecer burbujas Chequee si la columna no está quebrada Verifique el abastecimiento del gas de arrastre Verifique la jeringa Utilice la jeringa y observe si pincha el líquido Verifique con una jeringa nueva Automuestreador Verifique la posición del vial y el volumen de la muestra en el vial

Pruebas para Causa de Ausencia de Picos
Inyector Errado Repita inyecciones tomando cuidado de inyectar en el inyector configurado Columna quebrada ( rota) Verifique el flujo da columna Use el detector de gas Instalación incorrecta de la columna Verifique la instalación de la columna

Acciones Correctivas para Ausencia de Picos
Certifique el abastecimiento del gas de arrastre Localicé si hay daños en la columna y reconecte la columna Limpie la jeringa o substituya por una nueva

Cambio en el Tiempo de Retención
Principales causas posibles Cambio en la velocidad lineal del gas de arrastre Cambio en las condiciones de temperatura de columna Perdida en el septum Cambio del solvente de la muestra

Pruebas para Causas de Cambio de Tiempo de Retención
Verifique los parámetros de velocidad lineal del gas de arrastre y la temperatura de la columna en el método Verifique el septum Chequear las especificaciones del septum en cuanto al número máximo de inyecciones. Compare con el registro de número de inyecciones después de la instalación del septum nuevo.

Como Obtener Ayuda Literatura: Libros
Artículos científicos (ej.: Analytical Chemistry, Journal of Chromatography) Métodos Oficiales (ej.: EPA, USP, AOAC) Manual del Instrumento Guía técnica de los fabricantes de columnas Colegas Soporte Técnico

Referencia/Bibliografia
Basic Relationships of Gas Chromatography, L.S. Ettre, J.V. Hinshaw A Practical Guide to the Care, Maintenance, and Troubleshooting of Capillary Gas Chromatographic Systems, D.Rood Shimadzu GC System User’s Guides & Operation Guidebooks (Restek Chromatography Products) (SGE Chromatography Products)

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