Estudio de una proteína mediante Bradford Grace Febo Zuleima Rodríguez Tatiana Rivera.

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1 Estudio de una proteína mediante Bradford Grace Febo Zuleima Rodríguez Tatiana Rivera

2 Contenido Introducción Procedimiento Datos y resultados Discusión

3 Introducción Objetivos Importancia Teoría Descripción del Experimento

4 Procedimiento Se preparó 1/10mL de Phosphate Buffered Saline (PBS). Se prepararon diferentes soluciones mediante la siguiente tabla. Se removió el 1x dye reagent del refrigerador. Se esperó a que se descongelara a temperatura ambiente. Se invirtió el 1x dye reagent dos veces antes de utilizarse.

5 Procedimiento Se diluyó los estándares de proteína con PBS. Se pipeteó 100mL de cada solución estándar en cubetas limpias separadas. Se le añadió 5.0mL de 1x dye reagent a cada cubeta y se invirtió. Se preparó el blanco en una cubeta nueva con 100mL de dye reagent. Se incubó a temperatura ambiente por 5 minutos.

6 Procedimiento Se ajustó el espectrofotómetro a 595nm. Se ajustó el espectrofotómetro a cero utilizando el blanco. Se midieron las absorbancia de todos los estándares.

7 Datos # de Tubo 110020001001000 21001000100500 3100500100250 4100250100125 Tabla #1: Diluciones de Bovine Serum Albumin con Phosphate Buffered Saline

8 Resultados Estándares µg/mlAbsorbancia (nm)Largo de onda (nm) Blanco0.000595 Cubeta #1: 1000.760595 Cubeta #2: 500.400595 Cubeta #3: 250.270595 Cubeta #4: 125.161595 Tabla #2: Absorbancias obtenidas a un largo de onda de 595nm

9 Resultados Gráfica: Concentración vs. Absorbancia de Bradford Protein Assay

10 Cálculos

11 Discusión Es común que la técnica de prueba de proteínas Bradford se utilice mayormente para medir o conseguir concentraciones de proteínas desconocidas en alguna mezcla. En este experimento se utilizó esta técnica para comprobar la relación entre concentración y absorbancia utilizando diluciones con concentraciones conocidas de la proteína “Bovine Serum Albumin” (BSA). El tinte Bradford (comassie blue G-250) se unió a las proteínas y formó un complejo proteico con un pH aniónico, por lo tanto el tinte reflejó el color azul y pudo ser detectado a un largo de onda de 595nm resultando en condiciones normales para este método. Los resultados fueron satisfactorios, a través de la gráfica lineal se pudo comprobar la relación entre concentración de proteína y absorbancia.

12 Discusión

13 Error Absoluto 0.760—0.900= -0.140.400—0.550= -0.150.270—0.300= -0.030.161—0.100= 0.061 Error Relativo Porciento de error 15.56%27.27%10.0%61.0%

14 Discusión Por lo tanto, podemos asumir que los resultados aunque fueron lineales y afirmaron que si existe una relación entre concentración de proteínas y absorbancia, en este experimento no fueron 100% precisos, esto pudo ser debido a mal manejo de instrumentos, ya sea medición inexacta utilizando la micropipeta, presencia de residuos de jabón o detergente en microtubos u otros materiales utilizados para este experimento que desnaturalizarían la proteína haciendo que no se adhiera al tinte adecuadamente.

15 Referencias Arce, A, Rosas, A, & Rodríguez, L. (2007). Practicas de Inmunología. México. Giraldo, G, Loango, N, & Mejías, C. (2010). Bioquímica. Armenia.