Mineralización de Lignina de Paja de Trigo ( 14 C-MWL) por Petriellidium fusoideum: Aspectos de su Sistema Ligninolítico.

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1 Mineralización de Lignina de Paja de Trigo ( 14 C-MWL) por Petriellidium fusoideum: Aspectos de su Sistema Ligninolítico.

2 Influencia de la relación C/N y la temperatura sobre la degradación de LKP 18,549,51 Klasontotal Temperatura ºC Degradación de LKP (%) Relación C/N LSALAP Lignina deLignina 1,34,853,334,374,88 28ºC 138,757,78 1,36,881,556,44 37ºC 136,474,0100 18,549,51

3 Tasa acumulativa de 14 CO 2 tras 30 días de incubación 0 5 10 15 20 25 30 35 Tasa acumulativa de 14 CO 2 (%) DHP-O 14 CH 3 DHP-anillo- 14 C DHP- 14 C  MWL- 14 C de paja de trigo

4 0 5 10 15 20 25 024681012 Días 0 20 40 60 80 Crecimiento de P. fusoideum y mineralización de 14 C-MWL de paja de trigo. Glucosa (mg / ml) Peso seco del micelio (mg) Radioactividad x 10 3 (dpm)

5 Perfil de elución de la 14 C-MWL de paja de trigo en Sephadex G-50 tras 30 días de incubación con P. fusoideum. 0 200 400 600 800 Radioactividad (dpm) 1 Coef. de partición (Kav) 00.20.40.60.8 Problema Control 12.4 kDa 6.5 kDa 1.64 kDa

6 Solubilidad de diferentes ligninas marcadas con 14 C y su relación con la mineralización en el medio optimo de ligninolisis. 22300 11260 73 %

7 Actividades extracelulares producidas por P. fusoideum. 1.4917.75

8 Evolución de la actividad lacasa durante 30 días de cultivo

9 Zimograma con ABTS de la lacasa 80.0 97.4 45.0 66.0 116.0 29.0 kDa ABC

10 Inductores de la actividad lacasa Alcohol bencílico0,8 mM Alcohol verátrico6 mM LKP0,1 % Xilano1 % Xilidina 10 y 300  M Mn 2+ 20  M

11 Inhibición de la lacasa y su efecto sobre la mineralización de MWL- 14 C de paja de trigo

12 Detección de. OH en cultivos del hongo Enoki y col., (1989). Sustrato diana: ácido 2-ceto.tiometilbutírico (KTBA). Producto final: etileno. Babs y Gale (1987). Sustrato diana: dimetil sulfóxido (DMSO). Producto final: ácido metil sulfínico.

13 Generación de radical hidroxilo (. OH) en los cultivos del hongo con 14 C-MWL

14 Mineralización de MWL- 14 C de paja de trigo en presencia de secuestradores de. OH Benzoato de sodio24,66 Catecol23,32 Tiourea31,19 SecuestradorInhibición de la mineralización (%)

15 Radioactividad x 10 3 (dpm) Sustancia de bajo peso molecular 0 0.1 0.2 0.3 0246810 Días Abs (280 nm) Etileno (ppm) 0 5 10 15 20 25

16 Características del sistema ligninolítico de P. fusoideum. Una actividad lacasa como única enzima relacionado con la degradación de la lignina. Radicales. OH involucrados en la mineralización. Una sustancia de bajo peso molecular (1.6 kDa, Fe ++ = 0,1%, libre de proteínas)

17 Ensayo in vitro: KTBA (3 mM). Tampón acetato, pH 4,5 Oxígeno. Ácido ascórbico (1 mM). Sustancia de bajo peso molecular (1mg/ml). Lacasa de Petriellidium fusoideum (1,62 mU/ml).

18 1 er Sistema:  KTBA (3 mM)  Tampón acetato pH 4.5  Oxígeno  Ácido ascórbico (1 mM)  LMW-S (1 mg / mL)  Lacasa de P. fusoideum (1.62 mU / mL) 0 50 100 150 200 250 Etileno (ppm) 1º ensayo 2º ensayo 3ºensayo 4º ensayo 5º ensayo 6º ensayo 1 er Sistema:  KTBA (3 mM)  Tampón acetato pH 4.5  Oxígeno  Ácido ascórbico (1 mM)  LMW-S (1 mg / mL)  Lacasa de P. fusoideum (1.62 mU / mL) 1 er Sistema:  KTBA (3 mM)  Tampón acetato pH 4.5  Oxígeno  Ácido ascórbico (1 mM)  LMW-S (1 mg / mL)  Lacasa de P. fusoideum (1.62 mU / mL) 1 er Sistema:  KTBA (3 mM)  Tampón acetato pH 4.5  Oxígeno  Ácido ascórbico (1 mM)  LMW-S (1 mg / mL)  Lacasa de P. fusoideum (1.62 mU / mL)  KTBA (3 mM)  Tampón acetato pH 4.5  Oxígeno  Ácido ascórbico (1 mM)  LMW-S (1 mg / mL)  Lacasa de P. fusoideum (1.62 mU / mL) Scavengers:  Benzoato sódico (10 mM)  Tiourea (10 mM)  Catalasa (6 U)  Nitrógeno Scavengers:  Benzoato sódico (10 mM)  Tiourea (10 mM)  Catalasa (6 U)  Nitrógeno Scavengers:  Benzoato sódico (10 mM)  Tiourea (10 mM)  Catalasa (6 U)  Nitrógeno Scavengers:  Benzoato sódico (10 mM)  Tiourea (10 mM)  Catalasa (6 U)  Nitrógeno Scavengers:  Benzoato sódico (10 mM)  Tiourea (10 mM)  Catalasa (6 U)  Nitrógeno

19 Q2- Q2- Q.- Q Lacasa oxidada Lacasa reducida H2OH2O O2O2 O2O2 O 2.- H2O2H2O2 Sustancia Fe 3+ Sustancia Fe 2+ M I C E L I O Lacasa Poder reductor. OH KTBA H2OH2O ETILENO