Laboratorio # 2: Base molecular de la herencia Biol 3300L Genética.

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2 Laboratorio # 2: Base molecular de la herencia Biol 3300L Genética

3 Objetivos Discutir las estructuras que componen el material genético. Discutir las estructuras que componen el material genético. Discutir la replicación del DNA Discutir la replicación del DNA Hacer una extracción de DNA. Hacer una extracción de DNA. –Fruta –Hígado de Pollo

4 Niveles de Condensación

5 Ácido Nucléico Polímero de nucleótidos. Polímero de nucleótidos. –RNA –DNA Molécula larga filamentosa, estable y con capacidad de autorreplicación. Molécula larga filamentosa, estable y con capacidad de autorreplicación.

6 Nucleótidos Unidad estructural básica de DNA y RNA. Unidad estructural básica de DNA y RNA. Contiene: Contiene: –Grupo fosfato - unido al azúcar por enlace fosfodiéster. –Azúcar – Pentosa (5 C). DNA – Desoxiribosa DNA – Desoxiribosa RNA – Ribosa RNA – Ribosa –Base nitrogenada – Purinas: (Adenina y Guanina) Purinas: (Adenina y Guanina) Pirimidinas: Pirimidinas: –Citocina –Timina=DNA –Uracilo=RNA

7 Base Nitrogenada Purinas: (A, G) Purinas: (A, G) –Formadas por dos anillos Pirimidinas: (T, C, U) Pirimidinas: (T, C, U) –Formadas por un anillo básico que contiene dos moléculas de nitrógeno.

8 Base Nitrogenada Se unen entre si mediante puentes de hidrógeno (¿su función?) Se unen entre si mediante puentes de hidrógeno (¿su función?) Sólo una purina con una pirimidina, produciendo una doble hélice simétrica. Sólo una purina con una pirimidina, produciendo una doble hélice simétrica. –Adenina = Timina (DNA) –Adenina = Uracilo (RNA) –Guanina = Citocina

9 Estructura de DNA

10 Otras propiedades del DNA Las hélices son antiparalelas Las hélices son antiparalelas 5’ →→→→ 3’ 5’ →→→→ 3’ 3’ ←←←← 5’ 3’ ←←←← 5’ Medidas Medidas –Distancia entre bases nitrogenada –3.4 A° –Diámetro de la hélice – 20 A° –Vuelta de espiral (10 bases nitrogenadas)– 34 A°

11 Otras propiedades del DNA Regla de Apareamiento de Chargaff Regla de Apareamiento de Chargaff –Dice que las bases nitrogenadas se aparean de tal manera que el número total de purinas es igual al número total de pirimidinas. Sin embargo, la cantidad de A+T no es necesariamente igual a la cantidad de C+G. A+G / C+T = 1 A+G / C+T = 1 (Purinas) (Pirimidinas) (Purinas) (Pirimidinas) Ej. 5’ AAATTTCGGCGT 3’ 3’ TTTAAAGCCGCA 5’ 3’ TTTAAAGCCGCA 5’ 7 + 5 / 5 + 7 = 1 A+T= 14 C+G= 10 A+T= 14 C+G= 10

12 Replicación de DNA DNA girasa – Desenlaza los nudos o lazos en la cadena de DNA. DNA girasa – Desenlaza los nudos o lazos en la cadena de DNA. DNA helicasa – separa las dos hebras. DNA helicasa – separa las dos hebras. SSBP – Evita que se unan las hebras. SSBP – Evita que se unan las hebras. RNA primasa – Sintetiza el “primer”. RNA primasa – Sintetiza el “primer”. DNA polimerasa III – Sintetiza la nueva hebra. DNA polimerasa III – Sintetiza la nueva hebra. DNA polimerasa I – Elimina las bases mal pareadas (3’ – 5’) y elimina los “primers” (5’ – 3’). DNA polimerasa I – Elimina las bases mal pareadas (3’ – 5’) y elimina los “primers” (5’ – 3’). DNA ligasa – Une los terminales 3’OH con los 5’PO4 de los fragmentos de Okasaki (fragmentos de DNA de la hebra discontinua) DNA ligasa – Une los terminales 3’OH con los 5’PO4 de los fragmentos de Okasaki (fragmentos de DNA de la hebra discontinua)

13 Replicación de DNA

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15 Autorreplicación semiconservativa Autorreplicación semiconservativa –Luego de la replicación cada una de las dos nuevas hélices va a poseer una hebra original y una copia.

16 Nucleosoma unidades de nucleoproteínas formadas cada una por un cilindro corto de histonas en forma de disco envuelto en ácido nucléico. Formado por 8 moléculas de histonas conocidas como H2A, H2B, H3 y H4. unidades de nucleoproteínas formadas cada una por un cilindro corto de histonas en forma de disco envuelto en ácido nucléico. Formado por 8 moléculas de histonas conocidas como H2A, H2B, H3 y H4.

17 Solenoide anillos circulares y continuos formados cada uno por seis nucleosomas anillos circulares y continuos formados cada uno por seis nucleosomas

18 Cromatina filamento de DNA y proteínas filamento de DNA y proteínas

19 Cromosomas Estructuras de varias formas y tamaños formada por nucleoproteínas. Estructuras de varias formas y tamaños formada por nucleoproteínas. Nucleoproteínas – combinación de ácido nucléico y proteínas (histonas) Nucleoproteínas – combinación de ácido nucléico y proteínas (histonas) Formada por una ó dos cromátidas (hermanas), unidas por un centrómero (DNA no está contraído). Formada por una ó dos cromátidas (hermanas), unidas por un centrómero (DNA no está contraído).

20 Base molecular de la herencia Genes: son unidades hereditarias que se transmiten de una generación a otra, estos contienen información codificada para la característica. Genes: son unidades hereditarias que se transmiten de una generación a otra, estos contienen información codificada para la característica.

21 Metodologia Triturar las fresas Triturar las fresas 2 mililitros del triturado añadir 5ml de solución 2 mililitros del triturado añadir 5ml de solución Mezclar por inversión Mezclar por inversión Filtrar y luego añadir alcohol frío al 90% o 70% Filtrar y luego añadir alcohol frío al 90% o 70% Sobre Hielo mezclar Sobre Hielo mezclar Observar el precipitado. Observar el precipitado. Coloque en el mortero el hígado y una cucharada de arena y la papaína Coloque en el mortero el hígado y una cucharada de arena y la papaína Tritúrelo bien Tritúrelo bien Añada 5 mililitros de solución desestabilizadora Añada 5 mililitros de solución desestabilizadora Triture de nuevo hasta cuando observe que se ha formado una pasta suave Triture de nuevo hasta cuando observe que se ha formado una pasta suave Filtre Filtre Añada el doble del volumen de alcohol frío al 90 o 100% Añada el doble del volumen de alcohol frío al 90 o 100% Mezclar Mezclar Observe el precipitado Observe el precipitado