Ricardo Molina Gasset Servicio de Análisis Clínicos Mayo 2012

Ricardo Molina Gasset Servicio de Análisis Clínicos Mayo 2012
RETRASO MENTAL DE ORIGEN GENÉTICO: PROPUESTA DE PROTOCOLO DE ESTUDIO Ricardo Molina Gasset Servicio de Análisis Clínicos Mayo 2012

El retraso mental: Incapacidad en el desarrollo de las habilidades cognitivas La no adquisición del nivel de inteligencia apropiado para un determinado grupo de edad Coeficiente de inteligencia (CI) es igual o inferior a 70 Se pone en evidencia desde la infancia Es la discapacidad más frecuente CI difícil de medir en niños <= 5 años, y se habla de retraso global del desarrollo

Tipo Retraso mental Prevalencia Leve entre 50 y 70 de CI 0.4% Moderado
Grave entre 20 y 35 de CI 3.0% Profundo por debajo de 20 RM leve: los condicionantes familiares, socioculturales y biomédicos resultan mucho más importantes.

Clasificación de las diferentes causas de RM y frecuencia de las mismas.
Causas Frecuencia Anomalías cromosómicas % Anomalías estructurales del sistema nervioso central 7-10% Teratógenos ambientales % Retraso mental familiar/cultural % Complicaciones de prematuridad % Enfermedades monogénicas conocidas % Síndromes reconocibles % Enfermedades metabólicas/endocrinas % Desconocida %

1.0. Retraso mental de origen cromosómico
1.1. Alteraciones en el cariotipo 1.2. Alteraciones submicroscópicas/ crípticas Síndromes con microdelección/microduplicación Alteraciones subteloméricas Alteraciones intersticiales 2.0. Retraso mental autosómico dominante Neurofibromatosis 1 (NF1) Esclerosis tuberosa (ET) Distrofia miotónica tipo 1 o de Steiner (DM1) 3.0. Retraso mental autosómico recesivo Errores congénitos del metabolismo Fenilcetonuria Enfermedad de Tay-Sachs 4.0 Retraso mental ligado al X 4.1. Retraso Mental Sindrómico ligado al cromosoma X (RMS) 4.2. Retraso Mental No Sindrómico ligado al cromosoma X (RMX) 5. Síndrome X frágil

1. Retraso mental de origen cromosómico
Causas genéticas más frecuentes Mayor proporción en los afectos de RM grave y fenotipo polimalformativo Algunas pueden identificarse en pacientes con un RM leve y fenotipo dismórfico leve.

1.1. Alteraciones en el cariotipo
Citogenética convencional: 40% de los pacientes con RM grave 10% de los casos de RM leve Anomalías pueden ser: Ganancia de cromosomas enteros Pérdida o ganancia de fragmentos cromosómicos (deleción o duplicación) Intercambio de fragmentos de un cromosoma con otro (translocación) de forma desequilibrada. La trisomía 21 (síndrome de Down) es la causa más frecuente del RM, aunque la incidencia de dicho síndrome ha disminuido a casi un tercio ya que en el 72% de los casos se diagnóstica prenatalmente

1.2. Alteraciones submicroscópicas/ crípticas
Alteraciones no visibles con la resolución de bandas que permite la microscopia óptica La aplicación de las técnicas moleculares al estudio de pacientes con RM ha permitido un mayor diagnóstico de estos pacientes. incremento el número de síndromes de microdeleción diagnosticados, tanto de deleción como de duplicación, en pacientes con un fenotipo característico.

1.2.1. Síndromes con microdelección/microduplicación
Muchos de los síndromes tipificados clínicamente causados: Deleciones Retraso del desarrollo que varía desde leve hasta grave en función de cuantos más genes adyacentes estén implicados Fenotipo conductual característico además de múltiples anomalías físicas Duplicaciones (más raramente) Submicroscópicas que involucran a una misma región de tamaño variable. Mayor conocimiento de las duplicaciones y su espectro clínico es más variable y benigno. Sospecha clínica de un síndrome asociado a una microdeleción o microduplicación permite seleccionar la técnica que se debe utilizar para la confirmación genética del diagnóstico clínico. Las pruebas más utilizadas son la hibridación fluorescente in situ (FISH), mediante sondas comerciales o construidas, y el multiplex ligation probe amplification (MLPA).

Prader-Willi (SNRPN, NDN, MAGEL2, cluster snARN) del 15q11.2-13
Relación de síndromes asociados a RM con microdeleción y microduplicación Síndromes Anomalía Gen Detección por FISH Prevalencia Wolf-Hirschhorn del 4p16.3 WHSCR >95% 1/50.000 Maullido de gato del 5p15.2 TERT - 1/ Sotos del 5q35.3 NSD1 10% 1/14.000 Williams del 7q11.23 ELN 90-95% 1/ Prader-Willi (SNRPN, NDN, MAGEL2, cluster snARN) del 15q SNRPN/ GABRB3 70-75% 1/ Angelman (UBE3A) del 15q11.2-3 UBE3A 1/ Smith-Magenis del 17p11.2 RAI1 >90% 1/ DiGeorge/ velocardiofacial del 22q11.2 TBX1 90% 1/6.000 PRADER-WILLI El síndrome de Prader-Willi es una enfermedad genética producida por la ausencia de la expresión de un alelo localizado en el brazo largo del cromosoma 15 de origen paterno (concretamente en la región 15q11-q13). Esta ausencia de expresión puede deberse a varias causas, y es por ello que la herencia de este síndrome es compleja. Es importante llamar aquí la atención sobre la semejanza génica de este síndrome con el de Angelman, en el que la enfermedad se desarrolla por la ausencia de expresión de varios alelos en el mismo locus, pero en este caso, de origen materno. En individuos sanos, el cromosoma paterno expresa varios genes (SNRPN, NDN, MAGEL2, cluster snARN), e inhibe la del gen UBE3A. Lo hace porque no se encuentra metilada la diana de impronta génica. En cambio, el cromosoma materno sí tiene metilada esta diana, por lo que inhibe la expresión de los genes que se expresaban en el paterno y activa la de UBE3A. El efecto fundamental es que se deja de sintetizar una ribonucleoproteína. Esto es lo que ocurre en condiciones normales, en las que los óvulos y espermatozoides realizan el proceso de impronta génica correctamente. El síndrome de Prader-Willi se produce al faltar la expresión de los genes que un cromosoma paterno silvestre o sano expresaría. La falta de esta expresión puede ser debida a varias causas: Deleción o pérdida de la región 15q11-q13 del cromosoma de origen paterno. Se observa en el 70% de los pacientes.3 El riesgo de recurrencia familiar es cercano al 1% Disomía uniparental materna, es decir, la presencia de dos cromosomas maternos en vez de uno paterno y otro materno.4 Se observa en aproximadamente un 20% de los pacientes.5 El riesgo de recurrencia no supera el 1% Defectos en la impronta de la diana que silencien los genes que deberían expresarse en el paterno. En este caso aunque la frecuencia es menor, si se presenta el riesgo de recurrencia puede llegar al 50% ANGELMAN. Esta enfermedad es, junto con el síndrome de Prader-Willi, un ejemplo clásico de enfermedad genética cuyo origen y herencia depende del mecanismo de impronta genética. Ambas enfermedades se deben a la ausencia de expresión de genes que se encuentran en el mismo locus del cromosoma 15. Una persona sana recibe dos copias del cromosoma 15; una de la madre y otra del padre. La expresión de los genes que se encuentran en el locus relacionado con ambas enfermedades es diferente según se trate del cromosoma materno o paterno debido a la epigenética. Por tanto, en un individuo sano se expresan unos genes en el cromosoma materno y otros en el paterno. Si el locus materno se pierde o está mutado se produce el síndrome de Angelman mientras que, si el que se pierde o muta es el paterno se desarrolla el síndrome de Prader-Willi. Dentro de los genes que mapean en ese locus se encuentra el UBE3A (proteína ubiquitin-ligasa E3A). La expresión de este gen así como de otros cercanos depende de la regulación ejercida por un centro de impronta génica. Básicamente lo que ocurre es que si ese centro está metilado activa la expresión de unos genes, y si no, de otros. Si la diana falta, está mutada, o se metila de forma anormal, falta la expresión de UBE3A, así como si ocurre una deleción del gen. Por ello, las características clínicas observadas en el síndrome pueden ser causadas por diversas razones a nivel génico. Principales causas genéticas Grandes deleciones en el locus: tienen lugar en el 70-75% de los individuos afectados Otras anormalidades en cromosomas: tienen lugar en el 2% de los individuos afectados y se debe a reorganizaciones que causan ausencia de la región 15q11-13 Disomía uniparental paterna: tiene lugar en el 4% de los individuos afectados, y se puede deber a varios eventos, pero supone que hay dos copias del cromosoma 15 paterno y ninguna del materno Mutaciones en la diana de la impronta epigenética: sólo tienen lugar en el 1% de los individuos afectados. Mutaciones en UBE3A: tienen lugar en el 3-5% de los individuos afectados Desconocidos: tienen lugar en el 15% de los individuos afectados. Agrupamos aquí aquellos casos que presentan la enfermedad pero ninguno de los anteriores defectos genéticos

1.2.2. Alteraciones subteloméricas
Regiones subteloméricas: Elevada concentración de genes Muy propensas a sufrir recombinaciones debido a la gran similitud de secuencias. 5-7% RM idiopático se deben a duplicaciones o deleciones subteloméricas Un gran porcentaje de las anomalías subteloméricas, alrededor del 50%, son heredadas La mayoría corresponde a cromosomas derivados de una traslocación equilibrada parental Un grupo más reducido se encuentran las deleciones y las duplicaciones aisladas. Indicación para el estudio de deleciones y duplicaciones subteloméricas : Historia familiar positiva Retraso de crecimiento prenatal Alteraciones en el crecimiento postnatal Dos o más rasgos dismórficos faciales y uno o más defectos congénitos no faciales, siendo la microcefalia la anomalía más constante.

1.2.2. Alteraciones subteloméricas
Las técnicas utilizadas hoy en día son: FISH multisonda, que permite detectar deleciones, traslocaciones y en menor medida duplicaciones (técnica costosa). MLPA, técnica más rápida y de menor coste que evidencia tanto deleciones como duplicaciones. Tiene como inconvenientes que no detecta reorganizaciones equilibradas. A priori se deben confirmar todas las alteraciones mediante otra técnica como el FISH Alteraciones intersticiales Los estudios que analizan el genoma global con técnicas de alta resolución en pacientes con RM idiopático, detectan que un porcentaje de 7-20% de anomalías intersticiales. Las técnicas más empleadas para su estudio son: el array-CGH y el MLPA.

2. Retraso mental autosómico dominante
Mutaciones en genes que intervienen en la vía intracelular que media en la plasticidad sináptica, el aprendizaje y la memoria. Enfermedades monogénicas Herencia autosómica dominante (independientemente del sexo) La presencia de un alelo mutado es suficiente para presentar la enfermedad Un individuo afecto, tiene un riesgo del 50% de tener descendencia afecta Pueden presentar diferentes formas de retraso mental Gen NF1 flujo de la información que va de la membrana hasta el núcleo Neurofibromatosis tipo 1 Gen TSC2 flujo de la información que va de la membrana hasta el núcleo Esclerosis tuberosa Gen DMPK Integración de la señal externa al interior de la célula Distrofia miotónica tipo I o de Steinert

Neurofibromatosis 1 (NF1)
Causas: El gen causante es el NF1 situado en 17q11.2. Presenta 60 exones, con elevada variabilidad mutacional Tasa de mutación espontánea 10 veces superior a la media, lo que explica la alta frecuencia de casos esporádicos de NF1 (30-50%). Caracteristicas: Manchas café con leche Neurofibromas Nódulos de Lisch 4-8% de los casos puede asociar retraso mental moderado-severo Penetrancia total a los 8 años de edad Prevalencia aproximada de 1/4.000 individuos Incidencia de 1/3000 recién nacidos vivos Nódulos de Lisch o hamartomas pigmentarios del iris: consisten en el desarrollo de pápulas amarillentas

Esclerosis tuberosa (ET)
Causas: Genéticamente heterogénea, se implican al menos dos genes conocidos: -Gen TSC1 localizado en el 9q34, responsable del 20% de los casos -Gen TSC2 localizado en el 16p13.3, responsable del 80% de los casos El 60% de los casos son esporádicos debido a la alta tasa de mutación espontánea de sus genes causantes Caracteristicas: Afectación cerebral, renal, cardiaca, cutánea y ocular entre otras. Puede asociar retraso mental y crisis epilépticas. incidencia de 1/6000 recién nacidos vivos. En ambos genes se ha demostrado la presencia de mosaicismos, tanto somáticos como germinales, y se ha calculado que estos últimos ocurren en el 1% de los casos de ET.

Distrofia miotónica tipo 1 o de Steiner (DM1)
Causas: Gen DMPK localizado en 19q13.3. Expansión del triplete (CTG)n localizado en el extremo 3’ no codificante (98% de los casos). Caracteristicas: La DM1 es la forma más común de distrofia muscular del adulto. Incidencia aproximada de 1/8.000 recién nacidos vivos. Anticipación genética: mutación dinámica que tiene la capacidad de aumentar el número de repeticiones en la descendencia, apareciendo los síntomas de forma más precoz y/o más severa en las generaciones siguientes. Existe una forma congénita (>1.500 repeticiones) rara y muy grave caracterizada por hipotonía severa, dificultad para succionar, tragar y respirar con retraso mental (60-70% de los casos) y motora. Esta forma sólo está descrita cuando es la madre quien porta el expandido.

3. Retraso mental autosómico recesivo
Las enfermedades autosómicas recesivas con retraso mental se da en individuos que son homocigotos o heterocigotos compuestos para una mutación Los heterocigotos simples, en general, son portadores no afectos. Con ambos padres portadores, la posibilidad teórica de que sus hijos sean portadores es del 50%, un riesgo de 25% de hijos afectados por la enfermedad, y otro 25% sanos Son origen importante de deficiencias mentales Como ejemplo tenemos los errores congénitos del metabolismo, que se pueden clasificar de acuerdo con el metabolismo alterado: purinas, pirimidinas, aminoácidos, etc.

3. Retraso mental autosómico recesivo
Fenilcetonuria Mutaciones en el gen de fenilalanina hidroxilasa (gen implicado PAH). Supone un 0,5-1% de las enfermedades mentales Frecuencia de 1/ / en recién nacidos vivos. Su diagnóstico precoz en cribado neonatal permite instaurar la administración de una dieta alimenticia carente de fenilalanina y evitar el retraso mental Enfermedad de Tay-Sachs Trastorno lisosomal por depósito de gangliósidos, Rara en la población general, pero con una alta frecuencia entre los descendientes de origen judío de Europa Central y del Este (ashkenazi)

4. Retraso mental ligado al X
El retraso mental ligado a X constituye un grupo heterogéneo de entidades. Según su presentación clínica, se han clasificado en: Sindrómico (RMS) No sindrómico o inespecífico (RMX). No obstante, recientemente se han identificado mutaciones genéticas que originan tanto RMS como RMX, por lo que esta clasificación clásica está siendo cuestionada desde un punto de vista molecular La prevalencia en varones se estima en un 10%, excluido el síndrome de X frágil. Existen más de 100 genes implicados en el RMLX, habiéndose encontrado hasta la fecha muchos más genes relacionados con la función cognitiva en el cromosoma sexual X que en cualquier otro autosoma.

4.1. Retraso Mental Sindrómico ligado al cromosoma X (RMS)
El RMS se asocia a un patrón específico de anomalías físicas, neurológicas o metabólicas. Existen entorno a 140 formas sindrómicas de RMLX y se han identificado las mutaciones génicas causales en casi la mitad de ellas. 4.2. Retraso Mental No Sindrómico o inespecífico ligado al cromosoma X (RMX) El RMX se caracteriza por la ausencia de rasgos morfológicos, neurológicos, bioquímicos o conductuales específicos que permitan definir una variante clínica concreta. Aunque se desconoce su incidencia se cree que las formas inespecíficas representan al menos la mitad del total de RMLX. Se han identificado hasta la fecha alrededor de 22 genes distintos implicados en el RMX

Gen Nombre Locus RM ligado a X de origen sindrómico MID1 Opitz/GBBB Xp22 DMD Distrofia muscular de Duchenne Xp21.2 PLP Pelizaeus- Merzbacher Xq21-q22 DCX Lisencefalia ligada al cromosoma X Xq22.3-q23 OCRL Lowe Xq26.1 HPRT Lesch-Nyhan Xq26-q27.2 RM ligado a X inespecífico OPHN1 Oligofrenina 1 Xq12 PAK3 Cinasa activante de p21.3 Xq23 FMR2 FRAXE Xq28 Genes implicados tanto en formas sindrómicas como inespecíficas RSK2 Coffin-Lowry Xp22.1 ARX West, Partington, Proud PQBP1 Rapenning, Sutherland-Haan, Porteous… Xp11.2 FGD1 Aarskog-Scott/displasia facio gneital MECP2 Rett SLC6A8 Transportador de creatinina

5. Síndrome X frágil El síndrome X frágil (SFX) es una de las causas genéticas de retraso mental hereditario más frecuente en la población Frecuencia de 1/4.500 en varones y de 1/9.000 en mujeres Penetrancia del 80% y del 30% respectivamente Se pueden observar trastornos de conducta, falta de atención a veces de tipo autista, comportamiento hiperactivo y déficit de aprendizaje que pueden manifestarse en los primeros años de la vida de los afectados Rasgos fenotípicos característicos que generalmente son de aparición postpuberal Al tratarse de un trastorno ligado al cromosoma X, los síntomas son evidentes en los varones (niños y adultos) aunque en algunas ocasiones en las mujeres portadoras pueden apreciarse alguno de los síntomas, ya que tiene una penetrancia del 30%.

5. Síndrome X frágil El gen FMR1, que está situado en el locus Xq27.3, en la región FRAXA, posee una secuencia repetitiva [CGG] en el extremo 5’ del exón 1. Las expansiones del fragmento CGG por encima de las 200 repeticiones producen una metilación de la isla CpG adyacente, que inhibe la expresión del gen. La metilación es un factor clave en este síndrome. La tendencia de la expansión a aumentar depende de la inestabilidad que presente el fragmento CGG en la segregación de padres a hijos. Es importante realizar el diagnóstico diferencial con un segundo locus frágil denominado FRAXE en la región Xq28, en el que existe una expansión de un triplete CGG en el gen FMR2, que da lugar a un retraso mental menos grave el de la región FRAXA

5. Síndrome X frágil Dependiendo del número de repeticiones se considera: Normal: 5-55 repeticiones (zona gris de repeticiones). Premutación: repeticiones. Las portadoras premutadas en principio no son afectas pero sí pueden tener descendencia afecta en un 50% de los varones por anticipación genética . Se ha descrito en algunos premutados una serie de manifestaciones clínicas que no asocian retraso mental: síndrome de temblor-ataxia principalmente en varones y fallo ovárico precoz en mujeres. Mutación completa: >200 repeticiones. Por encima de 200 repeticiones los individuos presentan clínica del síndrome X frágil con una penetrancia del 80%. El tamaño de la expansión no está asociado con la severidad de la clínica.

Diagnóstico de RM de origen genético.
El estudio del retraso mental es uno de los campos más complejos en genética humana: Heterogeneidad clínica y genética muy elevada, Gran complejidad de las bases genéticas y ambientales Actualmente casi la mitad de los RM no están diagnosticados, por lo que es necesario establecer protocolos de actuación mediante la tecnología de que disponemos en la actualidad La evaluación clínica inicial del niño con RM: Historia clínica completa, Árbol genealógico de al menos tres generaciones Exploración física cuidadosa que incluya medidas, presencia de rasgos dismórficos o malformaciones, hallazgos neurológicos y trastornos de conducta

Protocolo de estudio propuesto por el grupo de Investigación en Retraso Mental de Origen Genético (GIRMOGEN) 1.- Estudio citogenético convencional (cariotipo) y es recomendable que tenga un nivel mínimo de resolución de 550 bandas G 2.-Ante una sospecha diagnóstica de un síndrome concreto que curse con RM, ésta deberá confirmarse a nivel citogenético o molecular, si es posible, con la técnica correspondiente. 3.-Si no se puede confirmar con una técnica concreta o no tenemos una sospecha clínica clara, es necesario: a) descartar el síndrome X frágil (estudio del gen FMR1), tanto en niños como en niñas b)En niñas hay que considerar el estudio genético del síndrome de Rett (estudio del gen MECP2) Rett: Retraso metal lgado al cromosoma x tanto sindrómico como inespecifico

Protocolo de estudio propuesto por el grupo de Investigación en Retraso Mental de Origen Genético (GIRMOGEN) 4.- El siguiente paso a seguir sería descartar alteraciones en las regiones subteloméricas ya que un 6-10% de los RM presentan microduplicaciones o microdeleciones en estas regiones. FISH MLPA (confirmar los hallazgos mediante otra técnica) 5.- Si la evaluación por parte del clínico no conduce a diagnóstico se continua con estudio microdeleción con MLPA 6.-En el caso de que éste sea negativo Varones: realizaremos el estudio de RM ligado al cromosoma X mediante MLPA en pacientes con una historia familiar positiva siempre y cuando cumplan los siguientes criterios: *tres hermanos afectos *tres varones afectos en dos generaciones.

Protocolo de estudio propuesto por el grupo de Investigación en Retraso Mental de Origen Genético (GIRMOGEN) 7.- Cuando el paciente no cumple estos criterios, o bien el estudio de RM ligado al cromosoma X es negativo, procederemos a realizar un análisis más extenso mediante el array-CGH. Este análisis también es el último paso a seguir en el diagnóstico de retraso mental en niñas. El estudio mediante array-CGH permite la detección de deleciones y duplicaciones que se pueden detectar con las técnicas anteriores, en función del diseño del estudio. Debido a esto y a que se ha abaratado mucho el precio de la técnica se está empezando a considerar realizar el array-CGH una vez hecho el cariotipo y confirmar la alteración detectada con otra técnica. Es importante señalar que todos los resultados deben ser interpretados en el contexto de un análisis citogenético completo.

Figura 1. Algoritmo diagnóstico genético para RM
Evaluación clínica del paciente Cariotipo No ¿Sospecha clínica de síndrome concreto? Estudio genes FRM1/MECP2 Si Negativo Estudio delecciones y duplicaciones subteloméricas Diagnóstico genético de confirmación Estudio síndrome microdelección Mujeres Varones Si Estudio ligación al cromosoma x ¿Antecedentes familiares? No Negativo CGHarray

Métodos de análisis Citogenética Actualmente está bien establecido que el cariotipo convencional se debe realizar de forma rutinaria en todo paciente con RM Los análisis rutinarios deben identificar además de las alteraciones numéricas (aneuploidías) el mayor número de alteraciones estructurales Para ello se necesita una resolución suficiente para detectar alteraciones de un tamaño entre 5 y 10 Mb, aconsejándose que tenga un nivel de bandas G, como mínimo, de 550 bandas. En la última década la aplicación de técnicas moleculares al estudio de los cromosomas ha permitido un avance espectacular en el campo de la Genética Clínica. Al superarse las limitaciones del cariotipo convencional se ha conseguido llegar al diagnóstico de reorganizaciones crípticas, que están por debajo de la resolución del microscopio óptico.

Citogenética molecular
La hibridación fluorescente in situ (FISH) Se trata de un ensayo competitivo de una sonda de ADN que hibrida con la secuencia complementaria a estudio tanto en metafases como en interfase. La técnica de FISH permite la detección de alteraciones alrededor de 150 kb Existen distintos tipos de sondas: Sondas centroméricas: Están formadas por una secuencia repetitiva de ADN que hibrida con el ADN de la región centromérica del cromosoma. Éstas permiten detectar alteraciones cromosómicas numéricas (monosomías o trisomías) Sondas de pintado cromosómico: Están formadas por una batería de sondas que en su conjunto hibridan con todo el cromosoma. Dichas sondas permiten visualizar alteraciones citogenéticas numéricas y estructurales. Sondas de secuencia única o locus especifico: Hibridan con el ADN de una región genómica concreta, correspondiente a un gen o a una banda cromosómica. Con ellas es posible detectar alteraciones numéricas y estructurales

Biología molecular MLPA (multiplex ligation probe amplification) Se basa en la amplificación por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de un número elevado de sondas específicas en una sola reacción Consiste en la hibridación de dos sondas complementarias a la región de 10 pb cada una adyacentes una de la otra. A través de una reacción de ligación, las sondas se unen y la secuencia se amplifica mediante una multiplex PCR. Cuando existe una deleción, por ejemplo, las sondas no se hibridan, no se ligan y no hay amplificación. Permiten la detección de mujeres portadoras en enfermedades ligadas al cromosoma X recesivas.

Biología molecular La hibridación genómica comparada (HGC) Es una técnica citogenética molecular que permite detectar cambios numéricos de secuencias de ADN (pérdidas, deleciones, ganancias y amplificaciones) en la muestra a estudiar. Dicha técnica se basa en la hibridación del ADN del paciente y de un ADN control marcados con fluorocromos de distinto color sobre metafases normales. Esta técnica únicamente detecta cambios presentes en una proporción y tiene una resolución de 10 Mb. Por otra parte, no permite detectar translocaciones, inversiones y otras alteraciones de tipo equilibrado que no comportan ganancias o pérdidas de material genético.

ADN NORMAL ADN PACIENTE

Biología molecular CGH array
Con el mismo fundamento que la HGC, existe en la actualidad la posibilidad de realizar un estudio genético por CGH a partir de microarrays que contienen un elevado número de sondas oligonucleotídicas (hibrida sobre matrices con BACs u oligos que pueden cubrir todo el genóma, permitiendo detectar cambios genéticos de 0.5 a 1 Mb) que han sido específicamente diseñadas para detectar regiones del genoma relacionadas con el retraso mental. El Array-CGH detecta pequeñas deleciones o duplicaciones en el DNA, indetectables por otras técnicas de análisis de cromosomas, así como casi todas las enfermedades identificadas mediante el estudio del cariotipo y FISH, incluyendo todos los síndromes de microdeleción y duplicación Tiene una tasa de detección muy superior a las técnicas de citogenética habituales y al abaratarse el coste será la técnica de elección en el futuro. Cgh: hibridacion genómica comparada

- Precio elevado del chip de CGH array (500-1000 euros/muestra)
Biología molecular CGH array Limitaciones : - Precio elevado del chip de CGH array ( euros/muestra) - Análisis de un gran número de datos - Existencia de polimorfismos en el genóma humano que se pueden dar lugar a ganacias o pérdidas de regiones del genóma y que es importante conocer su valor diagnóstico - No se detectan los reordenamientos cromosómicos equilibrados (traslocaciones recíprocas, traslocaciones Robertsonianas, inversiones), mutaciones puntuales, desequilibrios en regiones no representadas en el microarray y mosaicismos de bajo grado. Cgh: hibridacion genómica comparada

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