César Fuentes Eraz Alexander Alarcón Macías Marlon Cando Coloma Dayana Mero Villamar Grupo# 6.

Presentación del tema: "César Fuentes Eraz Alexander Alarcón Macías Marlon Cando Coloma Dayana Mero Villamar Grupo# 6."— Transcripción de la presentación:

1 César Fuentes Eraz Alexander Alarcón Macías Marlon Cando Coloma Dayana Mero Villamar Grupo# 6

2 El cáncer de próstata es la 2da causa de muerte en USA Se utiliza diferentes tratamientos para la cura del cáncer de próstata Han salido a la luz los microARN

3 Micro ARN miR-199a YES1 PACLITAXEL Este estudio podría potenciar miR- 199a como agente terapéutico

4 MATERIALES Y METODOS MANIPULACIÓN DE LA MUESTRA HUMANA Y CULTIVO CELULAR 28 muestras de próstata normal. 74 muestras con cáncer de próstata. Puntuacion de Gleason 3-9. PC3– ATTC PTX- LAB LC ENSAYO DE VIABILIDAD Ensayo MTT

5 ANEXINA V-FITC – PI CITOMETRIA DE FLUJO SE SUSPENDIERON EN SOLUCIONES DURANTE 15 MINUTOS DE CITOMETRIA DE FLUJO. FLUORESCENCIA A 530 Y 580NM Identificación de células apoptoticas.

6 Ensayo de indicador doble de luciferasa Se usó el sistema de análisis de luciferasa Promega dual La mutación 3’-UTR de YES1 se clonó en el vector informador de luciferasa pGL4 Las células se cultivaron, se lavaron y lisaron e incubaron con luciferina Western Blot Se lisaron en tampón RIPA y caracterizaron por ensayo de BCA Tejidos tumorales se lisaron con tampón T-PER La proteína se transfirió a membranas PVDF Anticuerpos primarios para YES1 y GAPDH se adquirieron en Abcam. Luego se usaron anticuerpos secundarios con HPR y se agregaron sustratos de ECL para visualizar la banda

7 Manejo de animales Se usaron ratones machos BALB/C Las células se inocularon por vía subcutánea con seguimiento durante 3 semanas Se recogieron muestras para analizarse para la expresión de YES1 usando Western Blot Análisis estadístico Los experimentos se repitieron por triplicado Se analizaron por Students t test Diferencias entre grupos se consideraron estadísticamente significativas si p<0,05.

8 La regulación a la baja de miR-199a fue característica del cáncer de próstata, particularmente los cánceres recurrentes. MiR-199a se suprimió en la línea celular resistente a PTX. La sobreexpresión de miR-199a inhibió la resistencia de PTX. YES1 fue un objetivo de miR-199a, y la sobreexpresión de YES1 revirtió el efecto de miR-199a en la supresión de la resistencia de PTX. In vivo, miR-199a aumentó la sensibilidad de la PTX del tumor.

9 La regulación a la baja de miR- 199a contribuye a la resistencia de la PTX en el cáncer de próstata. YES1 media la regulación de miR-199a en la resistencia a la PTX del cáncer de próstata. Esta terapia de reemplazo de miR-199a tiene potencial para superar la resistencia a la PTX.