Descargar la presentación
La descarga está en progreso. Por favor, espere
1
Tecnicas de Caracterización
2
Fraccionamiento por campo eléctrico
(electroforésis) Movilidad electroforética = f = coeficiente de fricción = A η Para una esfera A = 6 π r V=4/3 Π r3 Vesp = V/PM
3
Electroforesis en papel
4
Electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE)
A PH = 8 - 9
6
q/m = q/m = q/m = q/m Efecto “colador”
7
PAGE SDS SDS Movilidad = 1/ PM
8
Tipos de Electroforesis
PAGE Nativa PAGE SDS PAGE + condiciones reductoras Isoelectroenfoque Bidimensional
9
Determinación de PM
10
Isoelectroenfoque
11
Bidimensional
12
Fraccionamiento basado en el coeficiente de reparto
El coeficiente de reparto caracteriza la distribución de una sustancia entre dos fases: la fase móvil y la fase estacionaria K = Cs/Cm Fases: liquido-liquido, liquido-solido Fase estacionaria: Partículas de sólidos Partículas de sólidos con líquido
13
Equipamiento de una cromatografía
14
Elución Contínua Batch Gradiente
15
Fases sólidas y estacionarias
16
Tipos de cromatografías
Intercambio iónico Técnica independiente de la forma, tamaño y PM Soportes: Celulosa, agarosa, vinilbenceno Antes hacer un deslado (diálisis, filtración en gel) En general elución por gradiente (de PH o con agentes caotrópicos)
19
Filtración molecular o Exclusión molecular
Separa por distinto tamaño molecular (cutoff o limite de exclusion) Se puede usar para desalado Se puede usar para estimar PM Para purificación se usa generalmente hacia el final
21
Cromatografía de fase reversa
Se basa en “interacciones hidrofóbicas” La fase estacionaria son generalmente compuestos alifáticos de distinta longitud de cadena (C4, C8, C16 etc) Elución por gradiente (usando mezclas de agua y solventes orgánicos) Muy alta capacidad resolutiva (mezclando distintas propiedades fisicoquimicas)
22
Cromatografía de Afinidad
Reconocimiento de ligandos Alta resolución y especificidad ( disminuye mucho el numero de pasos en la purificación) Alto tiempo de preparación
25
Fraccionamiento basado en propiedades dinámicas
26
Sedimentación La unidad Svedverg se refiere a segundos
27
Tipos de protocolos en sedimentación
Centrifugación en un gradiente de densidad zonal centrifugation: glicerol, sacarosa Equilibrium centrigugation (isopycnic centrifugation) Cl2Cs. DNA, lipoproteinas. Tambien Ficoll, Percoll para células Centrifugación por velocidad
28
Determinación de S
31
Otras técnicas basadas en parámetros hidrodinámicos
Difusión Viscocidad
32
Técnicas de desalado Ultracentrifugación Diálisis Columnas de desalado
Presentaciones similares
© 2025 SlidePlayer.es Inc.
All rights reserved.