INMUNOHEMATOLOGIA APLICADA.

Presentación del tema: "INMUNOHEMATOLOGIA APLICADA."— Transcripción de la presentación:

1 INMUNOHEMATOLOGIA APLICADA

2 Identificación de anticuerpos irregulares
Dr. Carlos Alberto González

3 Tema 1: Cuándo identificar anticuerpos
Tema 2: Para qué sirve identificar anticuerpos Tema 3: Cómo identificar anticuerpos Pre-analítico Analítico Post-analítico

4 Inicio de sección

5 SOLO SE DETECTA POR REACCIÓN HEMOLÍTICA POST TRANSFUSIONAL
No existe ningún método para detectar el error en la identificación de un anticuerpo SOLO SE DETECTA POR REACCIÓN HEMOLÍTICA POST TRANSFUSIONAL

6 Identificación de anticuerpos irregulares
1) ¿Cuándo hay que identificar los anticuerpos? 2) ¿Para qué sirve identificar anticuerpos? 3) ¿Cómo identificar los anticuerpos?

7 Identificación de anticuerpos irregulares
1) ¿Cuándo hay que identificar los anticuerpos? Prueba de Antiglobulina Indirecta Negativa Positiva Prueba Cruzada Negativa Si hay registro previo de PAI+ seleccionar GR Antígeno Negativo Identificar el Ac Efecto de Dosis Anti-LebH, -H, -IH Positiva Incompatibilidad ABO Donante PAD+ Ac Baja Incidencia Identificar el Ac Seleccionar GR Antígeno Negativo y cruzar

8 Identificación de anticuerpos irregulares
1) ¿Cuándo hay que identificar los anticuerpos? 2) ¿Para que sirve identificar anticuerpos? Para asignar significado clínico Para buscar anticuerpos adicionales en aloinmunizados

9 Identificación de anticuerpos irregulares
Anticuerpo capaz de producir: 1) Hemólisis post transfusional 2) Enfermedad Hemolítica Feto Neonatal 3) Daño en el tejido trasplantado Para asignar significado clínico 9

10 Dr. Carlos Alberto Gonzalez
Identificación de anticuerpos irregulares Incidencia: 2 % pacientes 1 o más Ac clínicamente significativos. 98 % NO presenta Ac CS 8,4 % desarrollan Ac entre 2 y 24 sem de transfundido. 76 % son Ac del Sistema Rh (vox sang 1996; 71: 216) Para asignar significado clínico Curso Básico de Inmunohematologia Básica y Aplicada en Medicina Transfusional

11 Significado clínico de los aloanticuerpos
Importantes Solo si + a 37º C A veces Benigno ABO Rh Kell Duffy Kidd S, s, U Vel Lea M, N P1 Lutheran A1 Yta Ge Gya Hy Sda Knops Chido/Rogers Xga HLA/Bg, Csa, Yka, McCa JMH Para asignar significado clínico Curso Básico de Inmunohematologia Básica y Aplicada en Medicina Transfusional 11

12 Reacción Hemolítica/Serológica Post-Transfusional
ISBT Science Series 2012; 7: 54-57

13 Identificación de anticuerpos irregulares
Implicancia en Enfermedad Hemolítica Feto Neonatal Clínicamente no significativo Clínicamente Significativo Leve Severa o Moderada Anti-A1, -Kpa, Anti-M (no activo a 37º C), –N, Anti-P1, -Lea, -Leb, -Lea+b, -Lua, -I Anti-e, -E, -Dib Anti-Fyb, -Jkb, Anti-M, -S,-s, Anti-C, -Fya, -Jka, Anti-M (activo a 37º C), Anti-S, -s,–Dia Anti-D, Anti-c, Ac Sist Kell Para asignar significado clínico

14 Identificación de anticuerpos irregulares
1) ¿Cuándo hay que identificar los anticuerpos? 2) ¿Para qué sirve identificar anticuerpos? 3) ¿Cómo identificar los anticuerpos? Pre-analítico Analítico Post-analítico

15 Identificación de anticuerpos irregulares
Diagnóstico Tratamiento Etnia Registros previos 3) ¿Cómo identificar los anticuerpos? Pre-analítico

16 Pre-analítico Autoinmunes, onco, infecc PAD/PAI +; hemólisis
Drepanocitosis, talasemia > Frecuencia aloAc Diagnóstico Hipergammaglobulinemia PAD+ no significativa C. GR Campo mixto, RHPT Tx < 3 meses Tratamiento Pl, C pqt, hd PAD/PAI +; discrepancias Drogas PAD/PAI +; hemólisis 16

17 Pre-analítico Etnia Asociación con fenotipos negativos
Registros previos Discrepancias ABO, sensibilización 17

18 Pre-analítico Etnia Asociación con fenotipos negativos Etnia FENOTIPO
FRECUENCIA Afroamericana U- Negativo; Js(b-) 1/100 Fy(a-b-) 68% Americanos / Orientales Di(b-) <1/100 Caucásica K+k-; Lu(a+b-); Co(a-) 1/500 Kp(a+b-) 1/5.000 Polinesia Jk(a-b-) 1 c/110

19 Dr. Carlos Alberto Gonzalez
Pre-analítico Etnia Asociación con fenotipos negativos Frecuencia de fenotipo E-, C-, Fy(a-), K-, Jk(b-) en donantes: 7% caucásicos 93% afroamericanos Curso Básico de Inmunohematologia Básica y Aplicada en Medicina Transfusional

20 Pre-analítico Etnia Asociación con fenotipos negativos
Unidades Incompatibles Anticuerpos más frecuentes Caucásica Afro-americana Oriental Algunas -K, -Lua -K, -Kpa -K, -Dia La mitad -Jka, -Fya, -E -Jka, -E, -Fya La mayoría Rh-: -D Rh+: -c, -Fyb Rh+: -c -c Casi todas -e, -k, -Yta, -Lub -e, -U, -Jsb, -Fy3 -e, -Yta Todas -Kpb, -Vel, -Lan -Hy, -Joa, -Ata -Dib, -Jkab

21 Desconocido (muestra)
Identificación de anticuerpos irregulares Conocido (reactivos) Desconocido (muestra) Pruebas Detección e Identificación de Anticuerpos Paneles globulares Suero Tipificación eritrocitaria Reactivos séricos Hematíes 3) ¿Cómo identificar los anticuerpos? Pre analítico Analítico

22 Analítico Muestra: Plasma vs suero (tiempo de extracción)
Reactivos globulares Poliespecífico vs monoespecíficos Suero Antiglobulina (SAG) MBFI – PEG – ENZ – ALB – CAT – fase sólida Potenciadores

23 Analítico Paciente transfundido entre (en días)
Muestra: Plasma vs suero (tiempo de extracción) Paciente transfundido entre (en días) Muestra a ser tomada antes de transfundir (no más de) 3 -14 24 horas 15 -28 72 horas 1 semana

24 Analítico Panel selector Panel Identificador Detección de Anticuerpos
Muestra: Plasma vs suero (tiempo de extracción) Reactivos globulares Panel selector Panel Identificador Detección de Anticuerpos 2 vs 3 células Células homocigotas Identificación de Anticuerpos 8, 10, 11 o más células Versión extendida del selector

25 Fenotipo donante 10 tiene 9 antígenos presentes:
Panel Identificador Cada frasco del panel corresponde a un donante tipificado para los antígenos mas importantes (mostrado en cartilla) + presencia del antígeno ausencia del antígeno Donantes son Grupo O Rh Kell Kidd Duffy Lewis MNS P D C E c e K k Jka Jkb Fya Fyb Lea Leb M N S s P1 1 + 10 AC Fenotipo donante 10 tiene 9 antígenos presentes: c, e, k, Jka , Fya, Leb, M y s

26

27 Panel Identificador Autocontrol
Autocontrol vs Prueba de Antiglobulina Directa (PAD) Rh Kell Kidd Duffy Lewis MNS P D C E c e K k Jka Jkb Fya Fyb Lea Leb M N S s P1 1 + 10 AC Negativo Aloanticuerpo Autocontrol Autoanticuerpo Reacción hemolítica post transfusional Positivo Aloanticuerpo GR + suero Campo mixto

28 Panel Identificador Mismas fases que detección de anticuerpos
LIS: Lectura inmediata a temperatura ambiente: IgM 37°: Lectura post incubación a 37o C: IgG o IgM alto rango térmico SAG: Lectura en medio antiglobulina humana: IgG Rh LIS 37º C SAG CC D C E c e 1 + 2 3 4 CC: Control de Coombs

29

30 Fase LIS Realizar la lectura inmediata en salino y leer aglutinación, hemólisis (puntuación) Registrar los resultados en su columna: Rh Kell Kidd Duffy Lewis MNS P LIS 37º C SAG CC D C E c e K k Jka Jkb Fya Fyb Lea Leb M N S s P1 1 + 2+ 2 3 Hasta el ultimo tubo

31 Negativo 1+ 2+ 3+ 4+ Hemólisis

32 No deben ser tachadas al excluir.
Potencia de las reacciones Fases de reacción Reacción en Fase única Varía c/ ≠ Fase Anticuerpos múltiples Homogénea c/ todas las células Varía c/ ≠ células Efecto de dosis Anticuerpos múltiples IgM + IgG (?) Anticuerpo único Heterocigotas: reacciones Débiles o negativas Homocigotas: reacciones intensas IgM + IgM IgG + IgG No deben ser tachadas al excluir. 32

33 Fase a 37°C Se continúa con lectura a 37º C y se registran los resultados Rh Kell Kidd Duffy Lewis MNS P LIS 37º C SAG CC D C E c e K k Jka Jkb Fya Fyb Lea Leb M N S s P1 1 + 2+ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 AC

34 Fase SAG Se continúa con prueba de antiglobulina, se registran los resultados Rh Kell Kidd Duffy Lewis MNS P LIS 37º C SAG CC D C E c e K k Jka Jkb Fya Fyb Lea Leb M N S s P1 1 + 2+ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 AC

35 Todas las células negativas en SAG, agregar “Control de Coombs”
Fase SAG Todas las células negativas en SAG, agregar “Control de Coombs” Rh Kell Kidd Duffy Lewis MNS P LIS 37º C SAG CC D C E c e K k Jka Jkb Fya Fyb Lea Leb M N S s P1 1 + 2+  2 3 4 5 6 7 8 9 10 AC

36 Aglutinación en 4 tubos … y ahora?
Rh Kell Kidd Duffy Lewis MNS P LIS 37º C SAG CC D C E c e K k Jka Jkb Fya Fyb Lea Leb M N S s P1 1 + 2+  2 3 4 5 6 7 8 9 10 AC

37 Interpretación de los resultados
Pasos “Exclusión” tachar los antígenos que no reaccionaron Marcar los antígenos no tachados Considerar el medio/fase óptimo de reacción del anticuerpo Buscar la clave patrón

38 Los individuos NO desarrollan anticuerpos contra sus propios antígenos
Interpretación de los resultados Pasos “Exclusión” tachar los antígenos que no reaccionaron Regla de Landsteiner: Los individuos NO desarrollan anticuerpos contra sus propios antígenos

39 Interpretación de los resultados
Pasos “Exclusión” tachar los antígenos que no reaccionaron Un anticuerpo solo reaccionará con eritrocitos que tengan el correspondiente antígeno; los anticuerpos no reaccionarán con eritrocitos que no tengan el antígeno

40 1. Exclusión Tachar los antígenos que NO REACCIONARON en ninguna fase; y NO tachar los heterocigotas (efecto de dosis) Rh Kell Kidd Duffy Lewis MNS P LIS 37º C SAG CC D C E c e K k Jka Jkb Fya Fyb Lea Leb M N S s P1 1 + 2+  2 3 4 5 6 7 8 9 10 AC

41 2. Marcar los antígenos no tachados
Rh Kell Kidd Duffy Lewis MNS P LIS 37º C SAG CC D C E c e K k Jka Jkb Fya Fyb Lea Leb M N S s P1 1 + 2+  2 3 4 5 6 7 8 9 10 AC

42 3. Considerar el medio/fase óptimo de reacción del anticuerpo
Anti-Lea es un IgM fría reactiva en LIS. Anti-E es IgG reactivo a 37º C /SAG Rh Kell Kidd Duffy Lewis MNS P LIS 37º C SAG CC D C E c e K k Jka Jkb Fya Fyb Lea Leb M N S s P1 1 + 2+  2 3 4 5 6 7 8 9 10 AC

43 Interpretación: anti-Lea
4. Buscar la clave patrón Anti-E no es patrón y es un Ac caliente Interpretación: anti-Lea Rh Kell Kidd Duffy Lewis MNS P LIS 37º C SAG CC D C E c e K k Jka Jkb Fya Fyb Lea Leb M N S s P1 1 + 2+  2 3 4 5 6 7 8 9 10 AC

44 Regla de 3 Para confirmar el anticuerpo debe cumplirse la Regla de 3
El valor de p debe ser ≤ 0.05 Esto da un 95% intervalo de confianza ¿Cómo demonstrarlo? El suero del paciente debe reaccionar: Positivo con 3 hematíes que portan el antígeno Negativo con 3 hematíes sin el antígeno Usando células adicionales

45 Regla de 3 1, 4, 7 y 9 son positivas para el antígeno y reaccionan
2, 3, 5, 6, 8 y 10 son negativas para el antígeno y no reaccionan Rh Kell Kidd Duffy Lewis MNS P LIS 37º C SAG CC D C E c e K k Jka Jkb Fya Fyb Lea Leb M N S s P1 1 + 2+  2 3 4 5 6 7 8 9 10 AC 4 células positiva 6 células negativas

46

47 Tipificación La tipificación del antígeno de los hematíes confirma la especificidad del anticuerpo Realizarlo si el paciente no ha sido recientemente transfundido: Separación de neocitos Biología molecular

48 Múltiples anticuerpos
Procedimientos para identificar múltiples anticuerpos Células adicionales Adsorción (autóloga / homóloga) Neutralización Modificar los hematíes Enzimas proteolíticas Agentes sulfidrílicos AET

49 Múltiples anticuerpos
anti-Jka , anti-S y anti-P1 Rh Kell Kidd Duffy Lewis MNS P LIS 37º C SAG CC D C E c e K k Jka Jkb Fya Fyb Lea Leb M N S s P1 1 + 4+ 2 3 2+ 4 3+ 5 6 7 8 9 10 AC 

50 Múltiples anticuerpos
Células adicionales: anti-Jka, anti-S y descartan anti-P1 Rh Kell Kidd Duffy Lewis MNS P LIS 37º C SAG CC D C E c e K k Jka Jkb Fya Fyb Lea Leb M N S s P1 1 + 4+ 2 3 2+ 4 3+ 5 6 7 8 9 10 AC  #1 #2 #3

51 GR autólogos si se sospecha autoAc + aloAc
Gr con Fenotipo conocido Descartar sobrenadante Elución por calor Dispensar los GR en 3 tubos: 1 2 3 Muestra con Ac múltiples Para absorciones adicionales Centrifugar Detección / Identificación de Anticuerpos Suero adsorbido Prueba Cruzada Incubar Descartar GR 51

52 Neutralización Sustancias: P1 (líquido de quiste hidatídico)
Lea y Leb (plasma y saliva) I (leche materna) Sda (orina) ** Muchas sustancias neutralizan anticuerpos fríos (IgM); que pueden enmascarar IgG clinicamente significativa

53 Múltiples anticuerpos
Anti-K y anti-Fya Rh Kell Kidd Duffy Lewis MNS P SAG CC D C E c e K k Jka Jkb Fya Fyb Lea Leb M N S s P1 1 +  2 3+ 3 2+ 4 5 6 7 8 9 10 AC Patrón anti-Fya

54 Múltiples anticuerpos
Patrón anti-K Anti-K y anti-Fya Rh Kell Kidd Duffy Lewis MNS P SAG ENZ SAG CC D C E c e K k Jka Jkb Fya Fyb Lea Leb M N S s P1 1 +  2 3+ 2+ 3 4 5 6 7 8 9 10 AC Patrón anti-Fya Potenciados por enzimas Desnaturalizados por enzimas Las enzimas remueven el ácido siálico y modifican antígenos

55 Ac no identificado con panel convencional
Homogénea en fases y medios Varía c/ ≠ células Varia c/≠ fases Efecto de dosis 1 célula + Todas las células + adsorción c/ GR de ≠ fenotipo NO SI GR suero vs. Ac hacia Ag Baja incidencia Titular KELL, LU, YT, CO, DI, SC Identificar en sobrenadante y eluído Ac HTLA GR neg Ag alta Incidencia y GR cordón GR ENZ, AET, DTT cloroquina NO SI Tipificación Extendida Inhibición de hemaglutinación Ac hacia Ag alta incidencia Mezcla de Ac Compleja

56 3) ¿Cómo identificar los anticuerpos?
Prueba de antiglobulina indirecta R1R1 y anti-E seleccionar E y c negativo R2R2 y anti-C seleccionar C y e negativo Negativa Positiva Identificar el anticuerpo Prueba cruzada convencional Clínicamente no significativo Clínicamente significativo Anti-A1, -Kpa, Anti-M (no activo a 37º C), –N, Anti-P1, -Lea, -Leb, -Lea+b, -Lua, -I Anti-D, -C, -c, -E, -e Anti-K, -k, -Fya, -Fyb ,-Jka, Jkb Anti-S, -s, U, -M (activo a 37º C) No es necesario tipificar las unidades 3) ¿Cómo identificar los anticuerpos? Tipificar las unidades (aun si en el futuro la PAI es Negativa) Prueba cruzada Post analítico

57 Post-analítico Unidades necesarias a cruzar Un anticuerpo
Paciente con un anti-Jka necesita 4 unidades, ¿cuántas unidades necesito cruzar para encontrarlas? Jk (a+) = 77% Jk (a-) = 23% Si 23 Jk(a-) ……. 100 donantes 4 Jk (a-) …… X = Se necesitaran probar 17 o 18 unidades para encontrar 4 Jk(a-) 100 x 4 = 17,4 23

58 Post-analítico Unidades necesarias a cruzar
Anticuerpos múltiples Por ejemplo: paciente con anti-K y anti-Jka, necesita 2 unidades compatibles Jk (a+) = 77% Jk (a-) = 23% K+ = 9% K- = 91% Jk(a-) (0.23) x K- (0.91) = 0.20 Jk(a-) y K- 20% de los individuos son Jk(a-) K- Se necesitan 10 donantes al azar para encontrar 2 compatibles

59 Identificación de anticuerpos irregulares
1) ¿Cuándo hay que identificar los anticuerpos? PAI+ Prueba Cruzada + 2) ¿Para que sirve identificar anticuerpos? Significado clínico Ac adicionales 3) ¿Cómo identificar los anticuerpos? Pre analítico Antecedentes Analítico Exclusión / “regla de 3” Post analítico Cruzar y tipificar GR

60 Gracias… e-mail del presentador
Consultas: