ESPECIALISTA EN CIRUGIA GENERAL Y VIDEOLAPAROSCOPIA

Presentación del tema: "ESPECIALISTA EN CIRUGIA GENERAL Y VIDEOLAPAROSCOPIA"— Transcripción de la presentación:

1 ESPECIALISTA EN CIRUGIA GENERAL Y VIDEOLAPAROSCOPIA
BIOLOGIA MOLECULAR MICROSCOPIA DR. GILTON RUIZ. M.A.C.G. ESPECIALISTA EN CIRUGIA GENERAL Y VIDEOLAPAROSCOPIA

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4 LONGITUD DE ONDA

5 LONGITUD DE ONDA ES LA DISTANCIA ENTRE LA CRESTA DE UNA ONDA A LA CRESTA DE OTRA ONDA

6 DIFRACCION LA IMAGEN QUE USTED VE CUANDO OBSERVA UNA IMAGEN A TRAVES DE UNA SERIE DE LENTES ES REALMENTE UN PATRON DE ITERACCIONES ADITIVAS Y DESTRUCCTIVAS DE LAS ONDA QUE ATRAVESARON LAS LENTES INTERFERENCIA: PROCESO POR EL CUAL DOS O MAS ONDAS SE COMBINAN PARA REFORZARSE O CANCELARSE, PRODUCIENDO UNA ONDA IGUAL A LA SUMA DE LAS DOS ONDAS INICIALES.

7 TIPOS DE MICROSCOPIOS MICROSCOPIO ELECTRÓNICO MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO MICROSCOPIO DE IONES EN CAMPO MICROSCOPIO DE SONDA DE BARRIDO MICROSCOPIO DE EFECTO TÚNEL MICROSCOPIO DE FUERZA ATÓMICA MICROSCOPIO VIRTUAL MICROSCOPIO ÓPTICO MICROSCOPIO SIMPLE MICROSCOPIO COMPUESTO MICROSCOPIO ÓPTICO ESPECIAL MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA MICROSCOPIO PETROGRÁFICO MICROSCOPIO EN CAMPO OSCURO MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE MICROSCOPIO DE LUZ POLARIZADA MICROSCOPIO CONFOCAL

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9 MICROSCOPIOS FOTONICOS
LAS CÉLULAS VIVAS O MUESTRAS NO COLOREADAS, AL SER OBSERVADOS EN EL MICROSCOPIO COMÚN DE CAMPO CLARO, MUESTRAN UN MUY POBRE CONTRASTE DE SUS ESTRUCTURAS Y NO APORTAN DATOS RELEVANTES. NECESITAN MICROSCOPIOS CON CIERTAS PARTICULARIDADES

10 MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO.
FOTONICOS MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO. MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA. MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA. MICROSCOPIO DE POLARIZACIÓN. MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES. MICROSCOPIOS INTERFERENCIALES.

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13 AUMENTO Y RESOLUCION ENTENDEMOS POR AUMENTO A LAS DIMENSIONES APARENTES DE LOS OBJETOS COMPARADOS CON SU TAMAÑO REAL. EL PODER DE RESOLUCIÓN ES LA MEDIDA DE LA NITIDEZ DE LA IMAGEN; ES LA CAPACIDAD DEL INSTRUMENTO PARA BRINDAR IMÁGENES DISTINTAS DE DOS PUNTOS CERCANOS.

14 3 SISTEMAS DEL MICROSCOPIO
EL SISTEMA MECÁNICO CONSTITUIDO POR UNA SERIE DE PIEZAS EN LAS QUE VAN INSTALADAS LAS LENTES QUE PERMITEN EL MOVIMIENTO PARA EL ENFOQUE. EL SISTEMA ÓPTICO CONJUNTO DE LENTES DISPUESTAS DE TAL MANERA QUE PRODUCE EL AUMENTO DE LAS IMÁGENES QUE SE OBSERVAN A TRAVÉS DE ELLAS EL SISTEMA DE ILUMINACIÓN PARTES QUE REFLEJAN, TRANSMITEN Y REGULAN LA CANTIDAD DE LUZ NECESARIA PARA EFECTUAR LA OBSERVACIÓN

15 SISTEMA MECANICO BRAZO.- DONDE SE DEBE SUJETAR, LAS PINZAS EL CARRO EL TUBO DEL MICROSCOPIO Y EL REVOLVER. ADEMÁS SIRVE PARA TRASLADAR BASE O PIE.- PROPORCIONA ESTABILIDAD Y SIRVE DE SOPORTE A TODAS LAS PARTES PLATINA.- PIEZA METÁLICA, CUADRADA, QUE TIENE EN SU CENTRO UNA ABERTURA CIRCULAR POR LA QUE PASARÁ LA LUZ DEL SISTEMA DE ILUMINACIÓN. AQUÍ SE COLOCA EL PORTAOBJETOS CON LA MUESTRA A OBSERVAR

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17 PINZAS DE SUJECION. - SUJETA LA PREPARACIÓN
PINZAS DE SUJECION.- SUJETA LA PREPARACIÓN. LA MAYORÍA DE LOS MICROSCOPIOS MODERNOS TIENEN LAS PINZAS ADOSADAS A UN CARRO CON DOS TORNILLOS, QUE PERMITEN UN AVANCE LONGITUDINAL Y TRANSVERSAL DE LA PREPARACIÓN. TORNILLO MACROMETRICO: PARA MOVIMIENTO RÁPIDO HACIA ARRIBA O HACIA ABAJO DEL TUBO O LA PLATINA, Y SE UTILIZA PARA LOCALIZAR LA IMAGEN A OBSERVAR.

18 Para enfocar MACROMÉTRICO EXCLUSIVAMENTE CON LA LENTE DE BAJO PODER, PUES MUEVE EN FORMA APRECIABLE LA PLATINA, MIENTRAS QUE EL MICROMÉTRICO SE UTILIZA EN CUALQUIER AMPLIFICACIÓN.

19 TORNILLO MICROMETRICO O DE ENFOQUE SUAVE REVOLVER
TORNILLO MICROMETRICO O DE ENFOQUE SUAVE REVOLVER.- PARTE MECÁNICA DE MOVIMIENTO GIRATORIO QUE NOS PERMITE COLOCAR EN POSICIÓN CUALQUIERA DE LOS OBJETIVOS QUE SE ENCUENTRAN EN ÉL. TUBO.- PARTE MECÁNICA QUE PROPORCIONA SOSTÉN A LOS OCULARES Y OBJETIVOS. CREMALLERA.- PERMITE QUE EL MOVIMIENTO DE LOS TORNILLOS MACRO Y MICROMÉTRICO SEA DE MAYOR O DE MENOR AMPLITUD.

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22 SISTEMA OPTICO OCULAR.- PARTE SUPERIOR DEL TUBO OCULAR Y SON LAS LENTES QUE CAPTAN Y AMPLIAN LA IMAGEN FORMADA EN LOS OBJETIVOS. LOS PRIMEROS MICROSCOPIOS ERAN MONOCULARES, ES DECIR, POSEÍAN UNA SOLA LENTE. LOS MICROSCOPIOS ACTUALES POSEEN DOS OCULARES, UNO PARA CADA OJO Y SE LES LLAMA BINOCULARES. .

23 SISTEMA OPTICO

24 LENTE OCULAR: ESTA SE COMPONE DE DOS LENTES
LENTE OCULAR: ESTA SE COMPONE DE DOS LENTES. LA LENTE INFERIOR RECOGE LA IMAGEN DEL OBJETIVO, LA REDUCE Y LA REFORMA DENTRO DEL OCULAR A NIVEL DEL LIMITADOR DEL CAMPO VISUAL. LA LENTE SUPERIOR FORMA UNA IMAGEN VIRTUAL AUMENTADA PARA SER VISTA. EL AUMENTO DE LOS OCULARES OSCILA NORMALMENTE ENTRE X5 Y X15.

25 Microscopio compuesto u óptico: logra obtener imágenes ampliadas gracias al sistema de lentes que posee. Estos microscopios no obtienen aumentos muy altos. Pueden ser monoculares o binoculares.

26 DIAGRAMA DE LA CONSTITUCIÓN DEL OCULAR PERIPLAN. ES UN OCULAR NEGATIVO

27 OBJETIVOS: SON UNOS PEQUEÑOS CILINDROS COLOCADOS EN EL REVOLVER QUE PROPORCIONA EL PODER DE RESOLUCIÓN DEL MICROSCOPIO Y DETERMINAN LA CANTIDAD TOTAL DE AUMENTO

28 LENTE OBJETIVO ES EL LENTE MAS IMPORTANTE DEL MICROSCOPIO LA QUE CONTROLA LA AMPLIFICACIÓN POSIBLE Y LA RESOLUCIÓN DE LA IMAGEN. TODOS LOS OBJETIVOS SE ACOPLAN A LOS MICROSCOPIOS MEDIANTE ROSCAS ESTÁNDAR Y PUEDEN SER CAMBIADAS DE UN MICROSCOPIO A OTRO INDEPENDIENTEMENTE DE SU MARCA.

29 4 TIPOS DE OBJETIVOS 1.- LA LUPA (4 X) QUE SIRVE PARA HACER OBSERVACIONES A BAJO AUMENTO EL OBJETIVO SECO DÉBIL (10 X) QUE SE UTILIZA PARA LOCALIZAR LA IMAGEN QUE SE VA A OBSERVAR EL OBJETIVO SECO FUERTE (40 X) AUMENTA LA IMAGEN ANTERIOR, PARA PODER OBSERVAR SE NECESITA PRIMERO ACERCAR EL OBJETIVO AL PORTAOBJETOS Y POSTERIORMENTE, ENFOCAR EL OBJETIVO HASTA QUE APAREZCA LA IMAGEN. 4.- EL 100X

30 Lente Bajo Poder: Generalmente 4X Lente Mediano Poder: Generalmente 10X Lente Alto Poder: Generalmente 40X Lente Inmersión en aceite: 100X

31 OBJETIVOS

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33 Estructura de los objetivos: GENERALMENTE ES UN TUBO CILÍNDRICO QUE CONTIENE EN SU INTERIOR UN REVESTIMIENTO ANTI-REFLEJOS Y LAS DIVERSAS LENTES COLOCADAS EN SERIE Y ALINEADAS

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35 OPTICA MICROSCOPICA AUMENTO TOTAL QUE PERMITE MICROSCOPIO ÓPTICO SE CALCULA MULTIPLICANDO LA MAGNIFICACIÓN QUE PRODUCEN EL OBJETIVO POR LA QUE PRODUCEN LOS OCULARES. NUM. DEL OBJETIVO X NÚM. DE OCULAR = NÚM. DE AUMENTOS EJEMPLO, UN OBJETIVO DE 40X (AUMENTA 40 VECES) Y UN OCULAR DE 10X (AUMENTA 10 VECES), EL RESULTADO FINAL SERÁ DE 400X, ES DECIR, VEMOS LA MUESTRA AUMENTADA 400 VECES. SECO FUERTE (40 X) X OCULAR (10 X) = 400 AUMENTOS

36 MICROSCOPIO OPTICO NUNCA PUEDE RESOLVER DETALLES MENORES A 0,2mm, LA MEDIDA DE UNA PEQUEÑA BACTERIA. ESTA RESOLUCIÓN ES LIMITADA POR LA LONGITUD DE ONDA DE LA LUZ VISIBLE USADA PARA ILUMINAR LA MUESTRA. LOS MICROSCOPIOS ÓPTICOS O DE LUZ PUEDEN AUMENTAR EFECTIVAMENTE ALREDEDOR DE 1000 A 1500 VECES EL TAMAÑO DE LA MUESTRA REAL; SI SE INCREMENTASE EL AUMENTO LA IMAGEN PROYECTADA SERÍA BORROSA

37 USANDO MICROSCOPIOS ÓPTICOS AVANZADOS SE CONSIGUEN UNOS AUMENTOS (OBJETIVO DE 100X MÁS OCULARES DE 10X O 15X). ALGUNOS MICROSCOPIOS ÓPTICOS TIENEN LENTES INTERNAS QUE PRODUCEN AUMENTOS ADICIONALES.

38 SISTEMA DE ILUMINACION
LA FUENTE LUMINOSA CONSISTE EN UN ESPEJO O UNA FUENTE DE LUZ ELÉCTRICA QUE DIRIGE UN HAZ DE LUZ HACIA EL CONDENSADOR. CONDENSADOR.- ES UNA LENTE DE GRAN ABERTURA QUE PERMITE DIRIGIR O CONDENSAR (ENFOCA LA LUZ) LA MAYOR PARTE DE LOS RAYOS LUMINOSOS EN LA PREPARACIÓN. EN NUESTRO MICROSCOPIO ESTÁ INTEGRADO EN LA PLATINA Y TIENE UN DIAFRAGMA UNIDO EN LA PARTE INFERIOR. DIAFRAGMA: EXISTE UN DIAFRAGMA EN EL CONDENSADOR, QUE ELIMINA EL EXCESO DE LUMINOSIDAD PARA TENER UNA BUENA ILUMINACIÓN DEL OBJETO A OBSERVAR

39 EL CONDENSADOR ES LA LENTE QUE ILUMINA LA LENTE DEL OBJETIVO, SU ABERTURA NUMÉRICA DEBE SER SUFICIENTEMENTE ALTA PARA SUMINISTRAR EL CONO DE LUZ REQUERIDO.

40 DIAFRAGMA

41 FUENTE DE LUZ.- PARA OBSERVAR LA MUESTRA MICROSCÓPICA ES NECESARIO QUE ÉSTA SE ILUMINE CON ALGÚN TIPO DE LUZ Y NUESTROS MICROSCOPIOS CUENTAN CON UN FOCO QUE DA ENERGÍA ELÉCTRICA QUE DIRIGE SUS RAYOS LUMINOSOS HACIA EL SISTEMA CONDENSADOR.

42 MICROSCOPIO SIMPLE Y COMPUESTO
SON LENTES DE AUMENTO DE 8 A 20 AUMENTOS, COMO LAS LUPAS QUE ES UN INSTRUMENTO ÓPTICO CUYA PARTE PRINCIPAL ES UNA LENTE CÓNCAVA QUE SE EMPLEA PARA AMPLIAR LA VISIÓN DE UN OBJETO LLAMADOS TAMBIÉN ÓPTICOS O FOTÓNICO, PORQUE SE UTILIZA UNA FUENTE DE LUZ QUE ATRAVIESA LA MUESTRA, ENTRE ÉSTOS TENEMOS LOS MICROSCOPIOS QUE UTILIZAMOS EN NUESTRO LABORATORIO DE BIOLOGÍA, UTILIZAN UNO O MAS LENTES PARA AUMENTAR LOS OBJETOS SE UTILIZAN PARA OBSERVAR CÉLULAS VIVAS Y ORGANISMOS PEQUEÑOS, ESTOS MICROSCOPIOS PUEDEN AGRANDAR LA IMAGEN HASTA 1500 VECES.

43 MICROSCOPIO ELECTRONICO
UTILIZA UNA FUENTE DE ELECTRONES PARA OBSERVAR LA MUESTRA Y SE CLASIFICAN EN DOS: 1.-DE TRANSMISIÓN LINEAL PORQUE LOS ELECTRONES ATRAVIESAN LA MUESTRA Y LA REFLEJAN EN UNA PANTALLA FLUORESCENTE, AUMENTANDO LA IMAGEN A UNAS 200,000 VECES MÁS QUE EL OJO HUMANO DE BARRIDO SUPERFICIAL PORQUE LOS ELECTRONES NO ATRAVIESAN LA MUESTRA, SOLAMENTE RECORREN LA SUPERFICIE COMO SI LA BARRIERAN, PROYECTÁNDOLA EN UNA PANTALLA DE TELEVISIÓN, AUMENTANDO LA IMAGEN HASTA 1,000,000 DE VECES.

44 Microscopio

45 MICROSCOPIO ELECTRONICO
MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA PARA OBSERVAR SUSTANCIA FLUORESCENTES DENOMINADAS FLUORÒFOROS. UNA MOLÉCULA FLUORESCENTE ES AQUELLA QUE ES CAPAZ DE CAPTAR RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA CON UNA LONGITUD DE ONDA DETERMINADA Y EMITIR OTRA RADIACIÓN ELECTROMAGNÉTICA CON OTRA LONGITUD DE ONDA DIFERENTE, NORMALMENTE DENTRO DEL ESPECTRO DE LA LUZ VISIBLE.

46 DMS-853 COMPUESTO LCD DIGITAL MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA FEATURES

47 MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES REALIZA MODIFICACIONES EN LA TRAYECTORIA DE LOS RAYOS DE LUZ, LOS CUALES PRODUCEN CONTRASTES NOTABLES EN LA PREPARACIÓN.

48 MICROSCOPIO ELECTRONICO
EN LOS MICROSCOPIOS ELECTRÓNICOS LOS ELECTRONES VIAJAN EN LONGITUDES DE ONDA DE APROXIMADAMENTE 100,000 VECES MÁS CORTAS QUE LA DE LA LUZ VISIBLE.

49 EL PRIMER MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN FUE DESARROLLADO ENTRE 1931 Y 1933 POR ERNST RUSKA Y SUS COLABORADORES. LA ÓPTICA BÁSICA DE ESE PRIMER MICROSCOPIO ELECTRÓNICO SE MANTIENE HASTA NUESTROS DÍAS;

50 COMPARACION ENTRE MICROSCOPIO OPTICO Y ELECTRONICO

51 COMPARACIÓN DE LA FORMACIÓN DE LA IMAGEN EN UN MICROSCOPIO DE TRANSMISIÓN ÓPTICA, UN MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN (TEM), UN MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO (SEM) Y UN TUBO DE RAYOS CATÓDICOS (CRT) DE PANTALLA DE TV.

52 Resolución EL PODER DE RESOLUCIÓN DEPENDE DE LA LONGITUD DE ONDA (L) Y DE LA) APERTURA NUMÉRICA (AN DEL OBJETIVO (LA CAPACIDAD DE COLECTAR LA LUZ). ASÍ, EL LÍMITE DE RESOLUCIÓN, QUE ES LA DISTANCIA MÍNIMA QUE DEBE EXISTIR ENTRE DOS PUNTOS PARA QUE PUEDAN SER DISCRIMINADOS COMO TALES, Y RESPONDE A LA SIGUIENTE ECUACIÓN: LÍMITE DE RESOLUCIÓN=0,61 L /AN A SU VEZ, AN = N . SENO A DONDE, N ES EL ÍNDICE DE REFRACCIÓN DEL MEDIO QUE ATRAVIESA EL HAZ Y A ES EL ÁNGULO DE APERTURA

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54 PARA EL ESTUDIO DE LA CÉLULA VIVA SE EMPLEAN TÉCNICAS ÓPTICAS ESPECIALES COMO, POR EJEMPLO, LA MICROSCOPIA DE CONTRASTE DE FASE O LA DE INTERFERENCIA.

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56 Micrótomo

57 ULTRAMICROTOMO

58 PREPARACION DE MUESTRAS

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62 DIFERENCIA MICROSCOPIO OPTICO Y ELECTRONICO

63 LA MAYORÍA DE LOS COMPONENTES DE LA CÉLULA VIVA SON TRANSPARENTES DEBIDO A SU ALTO CONTENIDO DE AGUA. AL DISECARLA NO PRESENTA UN SIGNIFICATIVO CONTRASTE. ENTONCES LA TINCIÓN SELECTIVA DE CIERTOS COMPONENTES CELULARES RESUELVE EL PROBLEMA DEL CONTRASTE. SIN EMBARGO LA MAYORÍA DE ESTAS TÉCNICAS CONDUCE A LA MUERTE DE LA CÉLULA Y AÚN MÁS, A CAMBIOS QUÍMICOS Y MORFOLÓGICOS QUE NO SE ENCUENTRAN EN LAS CÉLULAS ACTIVAS Y EN LA MATRIZ EXTRACELULAR.

64 MICROSCOPIO ESTEREOSCÓPICO: A TRAVÉS DE ESTOS SE PUEDEN OBSERVAR OBJETOS EN TRES DIMENSIONES. SON IDEALES PARA OBSERVACIONES QUE NO REQUIEREN DE GRANDES AUMENTOS.

65 TERCERA DIMESION MICROSCOPIO ESTEREOSCÓPICO: SE FUNDAMENTA EN LA VISIÓN BINOCULAR CONVENCIONAL, EN LA QUE LOS DOS OJOS OBSERVAN EL ESPÉCIMEN CON ÁNGULOS LEVEMENTE DISTINTOS. EL MICROSCOPIO ESTEREOSCÓPICO DEBE SER BINOCULAR. SE UTILIZA PARA OBSERVAR ESPECÍMENES DE GRAN TAMAÑO, SIN CORTE O PREPARACIÓN PREVIA PUESTO QUE EMPLEA LUZ INCIDENTE Y NO FUNCIONA POR TRANS-ILUMINACIÓN. MICRODISECCION

66 MICROSCOPIO DE CAMPO OBSCURO: A TRAVÉS DE ESTOS LOS OBJETOS SE VEN COMO PUNTOS LUMINOSOS SOBRE UN FONDO OBSCURO.

67 El microscopio de fluorescencia se utiliza para observar sustancia fluorescentes denominadas fluoròforos. Una molécula fluorescente es aquella que es capaz de captar radiación electromagnética con una longitud de onda determinada y emitir otra radiación electromagnética con otra longitud de onda diferente, normalmente dentro del espectro de la luz visible. Microscopio de fluorescencia: son ideales para estudiar determinados preparados a los que se les puede adicionar flurocromos.

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69 Microscopio de contraste de fases: modifica la trayectoria de los rayos de luz para obtener contrastes.

70 CONTRASTE Realiza modificaciones en la trayectoria de los rayos de luz, los cuales producen contrastes notables en la preparación.

71 Microscopio invertido
La estructura del microscopio es invertida en comparación al microscopio convencional. La fuente de luz está ubicada por encima de la platina y el principio de funcionamiento y formación de la imagen es el mismo que el del microscopio tradicional. Utilizado principalmente para cultivos celulares (células vivas) sin una preparación previa y para monitorear actividades (crecimiento, comportamiento)

72 MICROSCOPIO QUIRURGICO, MICROCIRUGIA
Proporciona un campo muy bien iluminado y un aumento de las estructuras anatómicas, facilitándole al cirujano una mayor visibilidad de los tejidos sanos y patológicos que serán manipulados más cuidadosamente y con menores posibilidades de lesión. Algunos modelos más sofisticados tienen piezas automatizadas robóticas. una minuciosa disección, como por ejemplo del cráneo y cerebro o del globo ocular

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74 Para enfocar correctamente la muestra a observar, tome en cuenta los siguientes pasos
cómodamente sentado, después Inicie con el objetivo Seco Débil. Gira el tornillo macrométrico para acercar la platina hasta el tope. Observa a través del ocular manteniendo los ojos abiertos para evitar la fatiga y procede a retirar la platina con el tornillo macrométrico hasta poder ver la preparación. Para dar mayor nitidez a la muestra utilice el tornillo micrométrico. Gira el revolver al objetivo seco débil. Generalmente con esto se puede observar la preparación. Gire el tornillo micrométrico si es necesario dar mayor nitidez.

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77 ANTICUERPOS FLUORESCENTES
UNA SONDA FLUORESCENTE ES UNA MOLECULA CAPAZ DE EMITIR LUZ FLUORESCENTE Y QUE PUEDA EMPLEARSE PARA INDICAR LA PRESENCIA DE UNA MOLECULA O ION ESPECIFICO. SON COLORANTES PARA VER LO QUE NO ES POSIBLE VER. FLUORESCEINA =VERDE RODAMINA=ROJO

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79 G R A C I A S