Reporte Laboratorio de Investigación por Nilsa M. Méndez

Presentación del tema: "Reporte Laboratorio de Investigación por Nilsa M. Méndez"— Transcripción de la presentación:

1 Reporte Laboratorio de Investigación por Nilsa M. Méndez
Purificaciones Reporte Laboratorio de Investigación por Nilsa M. Méndez

2 Agenda Objetivos Procedimiento Datos Resultados y conclusión

3 Objetivos Purificar a hcenX (wt) y hcenX E105K X = 1 ó 2

4 Procedimiento Fermentador Lisis Concentrar (TFF) Columna de afinidad
Buscar, decidir Liofilizar

5 Columna de afinidad:Phenyl Sepharose CL-4B

6 Datos Pellets: hcen1 E105K E. coli BL21λDE3
Peso: 23.13g g = 41.00g Volumen final de proteína cruda: ~ 70mL

7 Gel de Fermentador hcen1 E105K

8 Stacking Gel (5%-12%) de pellets (P) y sobrenadantes (S)
Leyenda: 8 1 1 2 3 4 5 6 7 8 Low Range Weight Marker (15 μL) P1 S1 P2 S2 P3 S3 Pure hcen (wt) como estándar Pure hcen (wt) en 20kDa

9 Cromatograma de hcen1 E105K en columna de afinidad #1 (~ 30mL)

10 Cromatograma de hcen1 E105K en columna de afinidad #2 (~ 40mL)

11 Resultados y conclusiones
Pellet Peso Volumen Final proteína cruda Concentración de hcen1 E105K % de recuperación hcen1 E105K E. coli BL21λDE3 41.00 g ~ 70mL ? Los picos en el cromatograma durante la elución del buffer B son pequeños Creemos que hay hcen1 E105K presente pero no en la concentración esperada para el tamaño del pellet

12 Próximos pasos Ver SDS gel y determinar en cuáles fracciones está hcen1 E105K Hacer pool de fracciones con hcen1 E105K Concentrar