Presenta: Q.B.P. Aracely Santana.

Presentación del tema: "Presenta: Q.B.P. Aracely Santana."— Transcripción de la presentación:

1 Presenta: Q.B.P. Aracely Santana.

2 Introducción. Las aflatoxinas son un grupo de compuestos químicos tóxicos que se caracteriza por sus efectos inmunotóxicos, mutagénicos y carcinogénicos. La aflatoxina B1 (AFB1) es la toxina más frecuente y más potente. A. flavus y en menor medida Aspergillus parasiticus son algunas de las especies de hongos más ampliamente estudiados, como resultado de su capacidad para producir aflatoxinas y su potencial para persistir pre y post-cosecha como un patógeno y saprófito en el suministro de alimentos

3 Introducción. El crecimiento de mohos y la acumulación de micotoxinas en los alimentos son influenciados por algunas variables, tales como la actividad acuosa (aw), temperatura, pH, composición de la atmósfera, el sustrato disponible. Diversos métodos físicos y químicos de secado y almacenamiento han sido recomendados para reducir las micotoxinas, pero sólo unos pocos han sido aceptados para su uso práctico

4 Objetivos. Determinar los efectos de las interacciones de la actividad del agua, la temperatura y el tiempo de incubación sobre el crecimiento fúngico y la producción de aflatoxina B1 por Aspergillus flavus aislado de cultivos en semillas de sorgo. Identificar la aw y la temperatura límite condiciones para la producción de aflatoxina B1.

5 Materiales y métodos: Aislamiento del hongo.
Se utilizaron 3 cepas de A. Flavus (8,10 y 14). Los tres aislamientos se obtuvieron a partir de muestras recogidas de sorgo en el mercado minorista de la región del Sahel de Túnez La identificación de los aislamientos se hizo microscópicamente. Y la caracterización molecular de los aislados también se realizó mediante amplificación por PCR

6 Diseño experimental y análisis estadístico.
15°C 25°C 37°C Temperaturas Aw Diseño experimental y análisis estadístico. Las variables dependientes fueron los diámetros de las colonias y la producción de aflatoxinas B1. Cada tratamiento se realizó por triplicado y los resultados se analizaron mediante un análisis de varianza utilizando Statgraphics Plus 5.1 (Manugistics, Inc., MD, EE.UU.).

7 Preparación de sorgo aw: 0,85, 0,88, 0,91, 0,94, 0,97 y 0,99.
100 gramos de grano en matraces Se añadieron diferentes cantidades de agua El sorgo se dejó equilibrar a 4 ◦C durante 48 h con agitación periódica. Los matraces se trataron en autoclave durante 20 minutos a 121 ◦C Se colocaron capas de granos cuidadosamente en cajas petri estériles. aw: 0,85, 0,88, 0,91, 0,94, 0,97 y 0,99. AquaLab 3 (Decágono Devices, Inc., WA, EE.UU.)

8 Preparación del inóculo e incubación.
Cada cepa de A. flavus se cultivó en agar PDA y se incubó a 25°C durante 7 días. Los conidios se suspendieron en una solución acuosa de 0,05% (w/v) de Tween 80. Y se determinaron las concentraciones de esporas. Se incubaron durante 28 días las placas junto con 250 ml de solución de glicerol/agua para mantener la humedad relativa de equilibrio constante. Se inocularon las cajas en el centro, esto se realizó por triplicado. Las suspensiones se diluyeron para ajustar la concentración final a variar entre 1 y 5 x 105 esporas / ml.

9 Medición y cálculo de la tasa de crecimiento
El diámetro de cada colonia en crecimiento se determinó mediante la medición de dos radios en ángulo recto de la colonia. Las mediciones se registraron diariamente durante los 28 días de crecimiento. La tasa de crecimiento (μ) (mm/d) y el tiempo de crecimiento (λ) (d) fueron evaluados para cada aislamiento en cada combinación diferente de aw y la temperatura mediante el trazado de la extensión diámetro de la colonia (mm) frente al tiempo (d). Modelo Baranyi 2 utilizando Statgraphics Plus. Y: Diámetro de las colonias. Y0: es el diámetro inicial de colonias Ymax: es el diámetro de las colonias máximo t: tiempo μ max: tasa máxima de crecimiento específico Λ: Periodo de latencia.

10 Producción de aflatoxina B1 y cuantificación
La producción de aflatoxina B1 se determinó después de 7 y 14 días de incubación en las condiciones óptimas de crecimiento [a 25 ◦C (0,97 y 0,99 aw) y a 37 ◦C (0,94, 0,97, y 0,99 aw)] y después de 21 y 28 días de incubación en condiciones óptimas adecuadas [en 25 ◦C (0,91 y 0,94 aw) y en 15 ◦C (0,99 aw)] Las AFB1 se extrajeron de las muestras de sorgo y se analizaron en HPLC.

11 Resultados: Efectos de la actividad acuosa y la temperatura sobre el crecimiento del micelio.
En condiciones óptimas de crecimiento, los diámetros de colonias aumentaron linealmente hasta que las colonias alcanzaron el borde de las placas de Petri. En este estudio, la temperatura óptima para el crecimiento fue 37 ◦C para todos los niveles aw analizadas. También se observaron altas tasas de crecimiento a 25 ◦C. No se detectó crecimiento a 15 ◦C en cualquiera de las condiciones aw probado para los aislados 10 y 14; Sin embargo, el aislado 8 creció a 0,99 aw.

12

13

14 Resultados: Efectos de la actividad de agua y la temperatura sobre la producción de aflatoxina B1
En 15 ◦C, AFB1 no se detectó. Para determinar la aw mínimo que permite la producción de aflatoxinas, se probaron los valores de Aw de 0,85, 0,88 y 0,91. AFB1 no se detectó a los 25 y 37 ◦C, mientras que el crecimiento se produjo a partir de 0,91 aw y 37 ◦C.

15 Conclusión. Las condiciones óptimas para el crecimiento y la producción de AFB1 micelial fueron 0,99 aw y 37 ◦C. No había ni A. flavus el crecimiento ni la producción de aflatoxina B1 en 0,85 y 0,88 aw a todas las temperaturas investigadas. En consecuencia, la acumulación de aflatoxina podría evitarse mediante el almacenamiento de sorgo en niveles bajos de actividad de agua (aw) ≤0.91. Nuestros resultados mostraron que A. flavus aislado de sorgo de Túnez fue capaz de crecer en una amplia gama de actividades de agua (0, ,99 aw) y temperaturas ( ◦C), sin embargo, la producción de AFB1 ocurrió a las un rango más estrecho de las actividades de agua (0, ,99 aw) y temperaturas ( ◦C).