Introducción Objetivos Metodología Resultados y discusión Conclusiones

Presentación del tema: "Introducción Objetivos Metodología Resultados y discusión Conclusiones"— Transcripción de la presentación:

1 Introducción Objetivos Metodología Resultados y discusión Conclusiones
Estudio de la producción de biofilms, de la susceptibilidad antibiótica y características fenotípicas en Pseudomonas aeruginosa en pacientes quemados XVI Congreso Uruguayo de Patología Clínica Méndez Peyre, Lic.Mauricio Rodrigo1; Piñeyro, Dra. María Dolores 2; Macedo Viñas, Dra. Marina Centro Nacional de Quemados, Facultad de Medicina, UDELAR.. 2 - Unidad de Biología Molecular del Instituto Pasteur.. 3 - Centro Nacional de Quemados, Dpto. de Laboratorio de Patología Clínica, Facultad de Medicina, UDELAR.C Introducción Pseudomonas aeruginosa es uno de los principales agentes que coloniza o infecta pacientes quemados. Las infecciones crónicas por esta bacteria son particularmente frecuentes en pacientes portadores de fibrosis quística y quemaduras . La capacidad de producir biofilms representa un importante mecanismo patogénico al conferirle a la bacteria una ventaja para la supervivencia en el sitio de infección Un biofilm es una comunidad de microorganismos adheridos de manera irreversible a un sustrato o interfase, embebidos en una matriz de polímeros extracelulares de producción propia y que exhiben un fenotipo particular en relación a las tasas de crecimiento y expresión de genes. La formación de un biofilm se produce en 5 etapas bien diferenciadas: adhesión reversible, adhesión irreversible, formación de microcolonias, maduración, dispersión. Objetivos 1)Caracterizar cepas de Pseudomonas aeruginosa aisladas a partir de pacientes quemados, en el período de un año, ya sea como colonizantes o como agentes de infección: Estudiar la susceptibilidad antibiótica. Estudiar la producción de biofilm. Analizar características fenotípicas de interés 2)Investigar si existe relación entre la susceptibilidad antibiótica, la capacidad de producir biofilms y las características fenotípicas. Metodología Se incluyeron cepas de Pseudomonas aeruginosa aisladas en el Centro Nacional de quemados (CENAQUE) en el período junio  de 2013-julio de 2014. Cepas de un mismo paciente se incluyeron únicamente si el perfil de susceptibilidad era diferente o si trascurrieron más de 15 días entre los aislamientos. La identificación y susceptibilidad se realizaron mediante Vitek2 (Biomèrieux). La interpretación de los resultados se realizó según normas CLSI Se observaron y registraron características fenotípicas (perfil mucoide, producción de pigmento). La producción de biofilms se estudió por diferentes métodos: (1) tinción con cristal violeta cualitativa (CV) y cuantitativa (CVq, medición de DO a 590 nm) (2) adherencia en tubo (AT) (3) adherencia en cubreobjetos (AC) Los datos se analizaron mediante el programa WHONET. Las diferencias entre grupos se calcularon mediante test exacto de Fisher. Resultados y discusión De acuerdo al método CVq el 100% de nuestras muestras son productoras de biofilm, clasificándose en las siguientes categorías: débil 5% (2), moderada 54% (21) y fuerte 41% (16). El método de AC mostró un grado moderado de correlación con el CVq. Los métodos de AT y CV tuvieron menor correlación. Ninguna de las cepas presentó un fenotipo fuertemente mucoide. Sin embargo, 41% de las cepas presentaron un aspecto algo mucoide en relación al otro 59% que fue no mucoide.  Todas las cepas con pigmento oscuro fueron fuertemente productoras de biofilm. El test de Fisher mostró diferencias significativas (p<0,05) entre los siguientes grupos: -Las cepas mucoides mostraron mayor tasa de resistencia a Meropenem que las no mucoides. -Las cepas productoras de pigmento oscuro se asocian fuertemente con el fenotipo de resistencia: Gentamicina, Amikacina, Ciprofloxacina, Meropem, Piperacilina –Tazobactam. -Las cepas fuertemente productoras de biofilm se asocian más frecuentemente que las moderadamente productoras con resistencia a: Ciprofloxacina, Amikacina y Gentamicina. -Las cepas extremadamente resistentes (XDR) son más frecuentemente fuertes productoras de biofilm que las no XDR. Pacientes con más de una muestra PACIENTE FECHA MORFOLOGÍA MUCOIDE PIGMENTO ADH. EN CUBRE CRISTAL VIOLETA CUANTITATIVO PERFIL RESISTENCIA 2 20/8/2013 Chata, brillante - VERDE 0,8575 18/9/2013 + 0,8325 5 16/10/2013 Elevada, brillante NO 0,79 CAZ IPM MEM TZP 26/10/2013 Chata metálica brillante 0,8555 6 24/10/2013 Chata, metálica 0,891 11/11/2013 0,577 7 ++ 0,7195 15/12/2013 1,0295 CAZ CIP GEN IPM MEM TZP 11 12/11/2013 1,153 CAZ CIP GEN MEM TZP 30/11/2013 2,176 13 10/12/2013 2,1315 CIP GEN MEM TZP 27/12/2013 1,856 14 3/1/2014 OSCURO 0,81 AMK CIP GEN IPM MEM TZP 18/2/2014 0,9845 17 14/1/2014 1,7195 20/2/2014 0,7435 18 0,704 0,778 19 5/3/2014 0,8295 IPM MEM 24/3/2014 0,8285 IPM MEM TZP 15/5/2014 0,683 21 3/6/2014 1,905 CIP GEN IPM MEM TZP 19/6/2014 3,7505 8/7/2014 3,5665 23 2/7/2014 2,772 20/7/2014 2,7675 24 5/7/2014 3,249 22/7/2014 1,2835 CAZ TZP Conclusiones Se observa una alta tasa de resistencia a Piperacilina-Tazobactam, Carbapenems y Gentamicina en las cepas estudiadas. De acuerdo a lo descrito previamente, la mayoría de las cepas resultó ser productora de biofilms. Las cepas que no mostraron fenotipo mucoide demostraron, de todos modos, ser productoras de biofilm. Se observa una relación entre las características morfológicas y la resistencia a determinados antibióticos. Los hallazgos de este trabajo, que continuará con la investigación de genes asociados a la producción de biofilms, nos permitirá realizar una caracterización exhaustiva de las cepas de P.aeruginosa en pacientes quemados en nuestro país. Referencias bibbliográficas Jabalameli, F., Mirsalehian, A., Khoramian, B., Aligholi, M., Khoramrooz, S., Asadollahi, P., Taherikalani, M. and Emaneini, M. (2012) ‘Evaluation of biofilm production and characterization of genes encoding type III secretion system among Pseudomonas aeruginosa isolated from burn patients’, Burns : journal of the International Society for Burn Injuries., 38(8), pp. 1192–7. Christensen, G., Simpson, W., Bisno, A. and Beachey, E. (1982) ‘Adherence of slime-producing strains of staphylococcus epidermidis to smooth surfaces’, Infection and immunity., 37(1), pp. 318–26. Merritt, J., Kadouri, D. and O’Toole, G. (2008) ‘Growing and analyzing static biofilms’, Current protocols in microbiology., . AGRADECIMIENTOS: Al personal del Laboratorio del Centro Nacional de Quemados- Montevideo Uruguay por la ayuda y disposición. A la empresa Tresul por la colaboración con materiales para realizar este trabajo.