PRUEBAS DE AVIDEZ IgG PARA TOXOPLASMA Y RUBÉOLA

Presentación del tema: "PRUEBAS DE AVIDEZ IgG PARA TOXOPLASMA Y RUBÉOLA"— Transcripción de la presentación:

1 PRUEBAS DE AVIDEZ IgG PARA TOXOPLASMA Y RUBÉOLA
Por JOAQUÍN GRANADOS ORTEGA MIR DE MICROBIOLOGÍA HOSPITAL GENERAL DE CASTELLÓN

2 INTRODUCCIÓN Interacción entre Ag y Ac: Afinidad del Ac:
Enlaces débiles: Puentes H, Van der Wals, interacciones electrostáticas e hidrofóbicas Suma esos enlaces → interacción estable entre paratopo (lugar unión Ac) y epítopo (lugar unión Ag) Fuerzas inversamente proporcionales a distancia2 → epítopo y paratopo precisan tener estruturas complementarias Afinidad del Ac: Suma fuerzas atracción y repulsión Ag-Ac en Ag monovalentes Avidez/Afinidad Funcional: En Ag multivalentes: >2 puntos de anclaje

3 INTRODUCCIÓN Avidez Ac IgG: 1r contacto con Ag: baja.
Se incrementa en semanas y meses posteriores Maduración Avidez/Afinidad Funcional: Procesos selección células B → mutaciones región variable Ac IgG → incremento complementariedad sitios unión Ag-Ac → aumento avidez 1ºs días tras contacto Ag: Ac IgG provienen células plasmáticas no mutadas 6º día: hipermutaciones células plasmáticas → aumento afinidad Ac IgG por el Ag Factores que influyen en maduración avidez: Dosis Ag:  dosis Ag → maduración afinidad > rápida ↓ dosis Ag → maduración > lenta Estadíos iniciales:  dosis Ag → predominan Ac baja avidez

4 INFECCIONES CONGÉNITAS
Infecciones congénitas graves consecuencias en fetos y neonatos: TORCH: Toxoplasma gondii Rubéola CMV VHS Hepatitis B VZV Treponema pallidum Chlamydia trachomatis Parvovirus B19 VIH Infección primaria madre gestante: > riesgo de infección congénita grave que reactivación infección latente o reinfección → importancia identificación momento infección Programas cribado serológico en gestantes → evitar infección durante gestación x microorganismo alto riesgo congénito Inclusión técnicas diagnósticas infección aguda vs. Reactivación / reinfección

5 RUBÉOLA Enfermedad vírica  contagiosa.
Virus familia Togaviridae, género Rubivirus. Único reservorio: hombre Transmisión contacto fluidos: saliva, ojos, nariz, garganta Contagiosa: Desde 2-3 días antes exantema Máxima durante exantema Disminuye paulatinamente Lactantes con rubéola congénita excretan virus durante meses Vacunados no transmiten enfermedad, pero se aisla virus en faringe

6 RUBÉOLA Síntomas leves en adultos:
Linfadenopatía Exantema Febrícula Malestar general Graves secuelas en feto: infección madre 1r trimestre. Vacunación: Triple vírica: 15 meses, 6 años Confiere protección del 95%: no erradicación total Protege indirectamente a gestantes no vacunadas

7 RUBÉOLA Rubéola postnatal: Incubación: 12-23 días
Generalmente asintomática Prodromos 1-7 días: síntomas leves Síntomas: fiebre discreta, malestar general, cefalea, catarro, VRS, conjuntivitis leve, petequias paladar blando, adenitis retroauricular, cervical posterior y suboccipital Exantema maculo-papular similar sarampión 3 días Complicaciones poco frecuentes Reinfección generalmente asintomática y solo detectable por  título Ac

8 RUBÉOLA Rubéola congénita:
Infección crónica embrión y persistencia virus tejidos fetales varios meses tras nacimiento Rubéola materna en fase viremia → infección vellosidades coriales o placenta → viremia fetal generalizada Efecto virus sobre feto depende del momento infección: > juventud feto → > severidad enfermedad Riesgo fetal 2 primeros meses: 40-60% → defectos congénitos y/o aborto espontáneo 3r mes gestación: 30-35% riesgo desarrollo defecto único (sordera o cardiopatía) 4º mes gestación: 10% riesgo desarrollo defecto único > semana 20: bajo riesgo daño fetal

9 RUBÉOLA Manifestaciones viscerales: Rubéola congénita:
Malformaciones congénitas: Cardíacas: ductus arteriosus, CIV, estenosis pulmonar Oculares: cataratas, opacidad corneal Microcefalia + retraso mental Sordera, retraso crecimiento, meningocele, criptorquidia, hipospadia Manifestaciones viscerales: Hepatoesplenomegalia Meningoencefalitis Miocarditis necrotizante DM

10 RUBÉOLA Infección aguda: Reinfección: Vacunación:
Primero producción IgM, seguida de IgG IgM desaparece a las pocas semanas IgG confiere inmunidad duradera Reinfección: Asintomática  aumento IgG En ocasiones también aparece IgM a ↓títulos Vacunación: Induce producción Ac a menor cantidad que infección natural

11 RUBÉOLA Ac IgM se detectan: Infección reciente Tras vacunación rubéola
Pueden persistir 1 año o más Se solicitan IgM tras exposición a rubéola o sospecha infección aguda

12 RUBÉOLA Gestante sin sospecha clínica rubéola:
Primera visita control embarazo: cribado IgG Si positivo: contacto previo con virus o vacunación → inmunidad, no necesidad nuevos controles Si negativo: evitar exposición virus y vacunación post-parto inmediato No se aconseja detectar IgM

13 RUBÉOLA Gestante con sospecha clínica infección aguda: Avidez Rubéola:
Clínica compatible o contacto con paciente infección aguda IgG + y IgM Ø → inmunidad, no más estudios IgG Ø que se positiva después (seroconversión)→ primoinfección IgG + y IgG días después → reinfección IgG + y IgM +: sugiere primoinfección Posibilidad reacciones cruzadas IgM con VEB, CMV, B19, sarampión IgM puede aparecer en reinfecciones a título bajo IgM puede mantenerse > 6 meses Avidez Rubéola: Sirve para diferenciar primoinfección de reinfección Baja avidez: infección primaria aguda Alta avidez: ausencia infección primaria, posible reinfección

14 TOXOPLASMA Toxoplasma gondii: Parásito protozoario
Muy prevalente: 1/3 población Húesped definitivo: gato Puede infectar 300 especies animales domésticas y salvajes, aves. Infecta al hombre: ampliamente distribuida, principalmente regiones tropicales Prevalencia serorreactividad proporcional a la edad: Jóvenes 16-25a: 50% IgG + → primoinfección en <15a Tras infección aguda → infección latente

15 TOXOPLASMA Transmisión: Toxoplasmosis:
Ingestión carne cruda o semicruda infestada quistes Contacto o ingestión VO material del suelo infestado ooquistes procedentes heces gato Contacto o ingestión VO secreciones y excreciones animales domésticos infestados trofozoítos Vía transplacentaria con trofozoítos durante primoinfección gestante Toxoplasmosis: Huésped inmunocompetente: curso leve, a veces asintomático Feto y huésped inmunodeprimido (VIH): grave

16 TOXOPLASMA Formas clínicas: Toxoplasmosis ganglionar
Toxoplasmosis ocular Toxoplasmosis congénita

17 TOXOPLASMA Toxoplasmosis congénita: Primoinfección embarazada:
Generalmente asintomática o subclínica, manifestaciones no específicas Detectada por exámenes serológicos de repetición para detectar seroconversión IgG y/o detección IgM 50% gestantes con primoinfección → transmisión al feto Reactivación de toxoplasmosis latente → no transmisión al feto Mayor parte infecciones congénitas son asintomáticas en nacimiento, los síntomas aparecen más tarde Factores gravedad infección fetal: Momento infección materna Calidad respuesta inmunitaria madre Gestantes IgG + antes embarazo: bajo riesgo transmisión congénita Gestantes seronegativas con infección durante embarazo: riesgo > transmisión

18 TOXOPLASMA

19 TOXOPLASMA Ac IgG: Ac IgM: Avidez:
Se producen toda la vida tras la infección IgG + → infección contraída en algún momento del pasado Ac IgM: Infección reciente Puede persistir 1 año o más Falsos positivos por reacción cruzada con FR y ANA Falsos negativos por exceso IgG Avidez: Alta avidez: descarta infección 3-5 meses anteriores (período exclusión variable según equipo analizador) Baja avidez: puede persistir 1 año → no confirma al 100% infección aguda

20 AVIDEZ CUANTIFICACIÓN AVIDEZ: Métodos:
Técnicas de aglutinación RIA Fijación complemento IFI ELISA Requiere adición sustancia desnaturalizante unión Ag-Ac: Añadida durante dilución muestra: Método de Dulución Principal Añadida después formación del inmunocomplejo: Método de Elución Principal Sustancias desnaturalizantes: Dietilamida Tiocianato potásico Guianidina Urea → urea 8 Molar es el método más sencillo y eficaz

21 AVIDEZ INDICACIÓN PRUEBAS AVIDEZ: Avidez + pruebas serológicas:
Gran utilidad para detectar momento exacto primoinfección Conocer etiología probable de síndromes infecciosos cuyo conocimiento etiológico está dificultado por: Reacciones cruzadas Persistencia Ac IgM

22 AVIDEZ DESCRIPCIÓN DE LA PRUEBA: Dos ensayos:
1) ELISA estándar 2) ELISA tras añadir urea 8 Molar Urea disocia Ag-Ac en Ac baja avidez, manteniendo unión Ag-Ac en Ac alta avidez. Índice de Avidez = Ac IgG tras tratar con urea (alta avidez) x100 Ac IgG sin urea (IgG total) Estadios tempranos primoinfección: Índice Avidez bajo (30-50%según técnica) Convalecencia: aumenta el Índice de Avidez Infecciones recurrentes y reactivaciones: Índice de Avidez alto.

23 AVIDEZ ARCHITECT: tecnología AVIcomp
No requieren sustancias desnaturalizantes o caotrópicas Se basa en neutralización Ag’s para Ac’s de elevada avidez Pretratamiento: Muestra incubada con excedente Ag soluble vs muestra incubada con solución tampón: Pretratamiento con excedente Ag soluble: Ac’s alta avidez se unen a los Ag’s en fase líquida (bloqueados) Ac’s baja avidez permanecen sin unirse (libres): menor fuerza de unión Se añaden micropartículas recubiertas de Ag’s toxoplasma Ac’s baja avidez (libres) se unen a las partículas Ac’s alta avidez permanecen unidos a los Ag’s solubles Se calcula la relación entre la señal de la muestra tratada con el antígeno y con el tampón.

24 AVIDEZ

25 AVIDEZ ARCHITECT: tecnología AVIcomp
Avidez [%] = 100 x (1 – (ToxoAvi2) ) ToxoAvi1 ToxoAvi1 = pretratada con tampón ToxoAvi2 = pretratada con agente bloqueante Interpretación: Baja avidez: <50 %Avi Zona gris: 50-60%Avi Alta avidez: >60%Avi Sensibilidad: 98%

26 Muchas Gracias Joaquín Granados Ortega
M.I.R. de Microbiología y Parasitología Hospital General de Castellón