Bach. Blga Gabyluz Marjorie Vela Panduro Iquitos - Perú

Presentación del tema: "Bach. Blga Gabyluz Marjorie Vela Panduro Iquitos - Perú"— Transcripción de la presentación:

1 Bach. Blga Gabyluz Marjorie Vela Panduro Iquitos - Perú
UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONIA PERUANA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS INSTITUTO DE INVESTIGACIONES DE LA AMAZONIA PERUANA Inducción de Embriogenesis Somática para la producción de semilla no convencional de Mauritia flexuosa L. f Bach. Blga Gabyluz Marjorie Vela Panduro Iquitos - Perú 2005

2 Introducción La región amazónica cuenta con una gran biodiversidad de recursos naturales de excelente potencial productivo. - Problemática: tala de palmeras hembras.

3 Soluciones: Ensayos de propagación empleando semillas botánicas. El carácter dioico del aguaje limita este tipo de propagación. - Búsqueda de técnicas biotecnológicas: micropropagación in vitro vía embriogenesis somática. potencial económico

4 OBJETIVOS General: Estandarizar la técnica de embriogenesis somática a partir de explantes de Mauritia flexuosa L. f. para la producción de semillas no convencional.

5 Especifico: Determinar un medio de transporte ideal para Neumatoforos y Hojas Jóvenes de Mauritia flexuosa L. f. Determinar la concentración optima de hipoclorito de sodio para la desinfestación de explantes (neumatoforos y hojas jóvenes) de Mauritia flexuosa L. f. Determinar concentraciones optimas de fitohormonas para la inducción de embriogenesis Somática.

6 UBICACIÓN DE LA ZONA DE COLECTA
La zona de colecta se encuentra ubicado en el km 17.5 de la carretera Iquitos – Nauta.

7 MÉTODO: Ubicación del Laboratorio:
Se realizo en las instalaciones del Instituto Nacional de Investigación y Extensión Agraria (Laboratorio de cultivo de tejidos) ubicado en el asentamiento Humano San Roque Nº 209.

8 PREPARACIÓN DEL MATERIAL VEGETAL Colecta:
Planta madre Neumatoforos Vela Extracción de Neumatoforos Solución de transporte Solución de transporte (Hojas)

9 SOLUCIÓN DE TRANSPORTE: Tratamientos para determinar la concentración de la solución de transporte:
Antioxidantes CC (mg/l) T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 Ac. Ascórbico+ Ac. Citrico Ac. Ascórbico + Ac. Citrico PVP PVP + sulfato de Adenina Cisteina. Ac. Ascor + Ac. Citrico + cisteina. PVP + cisteina 100 : 150 600 : 150 600 600 : 160 200 100 : 150 : 200 600 : 200 Se utilizo Agua como referencia.

10 Limpieza de Neumatoforos y hojas jóvenes de Mauritia flexuosa L . f.
1º lavado 2 º lavado Cortes 5-6 cm Explantes en agua destilada 1 lavado Solución de transporte Cortes 5-6 cm Solución de transporte

11 Cámara de flujo laminar
Desinfestación de Neumatoforos y Hojas jóvenes de Mauritia flexuosa L . f. Esterilización de pinza 3 Enjuagues Cámara de flujo laminar Explant en antioxid Alcohol al 70 º NaOCl NaOCl Alcohol al 70 º 3 Enjuagues Esterilización de pinzas

12 PREPARACIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO
B C D E FeSO4.7H2O EDTA H3BO3 MnSO4.2H2O IK Na2MoO4.2H20 CuSO4.5H2O CoCl2.6H2O ZnSO4.4H2O Cl2Ca.2H2O 40 ml 10 ml NH4NO3 KNO3 MgSO4.7H2O KH2PO4 Glicina Tiamina - HCl Piridoxina - HCl Ácido nicotínico Fuente de Carbono Sacarosa (30 g/l) Gelificante Fitagel (3 g/l) pH: Fitohormonas * Murashige, T. and Skoog, F., Physiol. Plant., 1962, 15, 473 14

13 Tratamientos de fitohormonas para neumatoforos y hojas jóvenes de Mauritia flexuosa L . f.
DOSIS (MG/L) T1 2,4-D 2 T2 2,4-D + k 2 :0.5 T3 2,4-D + K 3 : 1 T4 3.5 : 2 T5 2,4-D + BAP 15 : 5 T6 30 : 5 T7 2,4-D +AIA +ANA 2 : 4 :1 T8 Picloram T9 Picloram + 2ip 2 : 0.5 T10 ANA + K T11 2.5 : 1 T12 T13 ANA + BAP+ K 2 : 0.5 : 0.5 T14 2,4,5 T + Floroglucinol 0.5 : 1 T15 1 : 1.5 T16 AIA + K T17 BAP + K 1 : 0.25 T18

14 Tratamiento de fitohormonas para neumatoforos y hojas jóvenes de Mauritia flexuosa L . f.
Dosis (mg/l) T19 BAP + K 3 : 0.75 T20 4 : 1

15 Disección y siembra de Neumatoforos de Mauritia flexuosa L . f.
rodajas Cámara de flujo Cortes transversales Extracción de zona suberificada Sellado del tubo Neumatoforo dentro del tubo de ensayo

16 Disección y siembra de hojas jóvenes de Mauritia flexuosa L . f.
Hojas en antioxidante Sellado de tubos Cortes de 1cm2

17 CÁMARA DE INCUBACIÓN Los tubos tapados y sellados fueron trasladados a la cámara de incubación a condiciones de oscuridad con una temperatura promedio de 24°C ± 2 y una humedad relativa de 70 %

18 Resultados: Cuadro N° 1: Tiempo de oxidación en explantes de Mauritia flexuosa L . f.
Tta. Antioxidante C.C. Tiempo de oxidación (h) T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 Agua Ac. Asco+Ac. Cítrico PVP PVP+Sul. de Adenina Cisteina Ac. Asc+Ac. Citr+Cist PVP+Cisteina 100:150 600 600:160 200 100:150:200 600:200 2 72 24 6

19 Contaminación en Neumatoforos de Mauritia flexuosa L . f
Donde: T1 .= Concentración de NaOCl al 5.25 % x 15 minutos T2 = Concentración de NaOCl al 5.25 % x 20 minutos T3 = Concentración de NaOCl al 5.25 % x 30 minutos

20 Contaminación en Hojas Jóvenes de Mauritia Flexuosa L . f
Donde: T1 = Concentración de NaOCl 1 % x 15 minutos T2 = Concentración de NaOCl 2 % x 10 minutos T3 = Concentración de NaOCl 3 % x 5 minutos

21 Oxidación en Neumatoforos de Mauritia flexuosa L . f
Donde: T1 .= Concentración de NaOCl al % x 15 minutos T2 = Concentración de NaOCl al 5.25 % x 20 minutos T3 = Concentración de NaOCl al 5.25 % x 30 minutos

22 Oxidación en Hojas Jóvenes de Mauritia flexuosa L . f
Donde: T1 .= Concentración de NaOCl al 1% x 15 minutos + antioxidante T2 = Concentración de NaOCl al 2% x 10 minutos + antioxidante T3 = Concentración de NaOCl al 3% x 5 minutos + antioxidante.

23 Formación de callos en Neumatoforos de Mauritia flexuosa L . f
BAP + K (2:0.5 mg/l) BAP + K (2:0.5 mg/l) BAP + K (2:0.5 mg/l) BAP + K (2:0.5 mg/l) BAP + K (3:0.75 mg/l) BAP + K (3:0.75 mg/l) BAP + K (4:1mg/l) BAP + K (4:1mg/l)

24 Pruebas de contraste para formación de Callos de Mauritia flexuosa L . f
Cuadro Nº 1: ANVA para la producción de callos Fuente de Variación Grados de Libertad Suma de cuadrados Cuadrados Medios Valor de F cal Prob Sig Factor A Factor B AB Error 1 19 760 0.017 0.122 1.236 0.006 0.002 3.9388 0.0013 0.0000 * *** *** Total 799 1.496 Coeficiente de Variación: 4.01 % * = Significativo. *** = Muy Significativo.

25 T18 1.110 A T19 1.050 B T20 T2 1.000 C T1 T6 T7 T3 T4 Prueba de Duncan
Nº de Tt Promedio Sig T18 1.110 A T19 1.050 B T20 T2 1.000 C T1 T6 T7 T3 T4

26 Ensayos para diferenciación de callos en Neumatoforos de Mauritia flexuosa L . f.
Tratamiento Fitohormonas Dosis (mg/l) T1 ANA+BAP+K 2 : 2 : 0.5 T2 2 : 3 : 0.75 T3 ANA+ BAP+K 2 : 4 : 1 T4 2,4-D+BAP+K T5 T6

27 Conclusiones: Para transportar los explantes (Hojas Jóvenes y Neumatoforos), del campo al laboratorio se utilizo Acido Ascórbico + Acido Cítrico 600 : 150 mg/l y un antifungico ( vitavax 2 g/l). Para controlar la contaminación de los neumatoforos se utilizó NaOCl 5.25 % a 30 minutos y para Hojas Jóvenes 1 % por un tiempo de 15 minutos.

28 A mayor tiempo de exposición de los explantes en NaOCl mayor será el incremento de la oxidación, sobre todo en Hojas Jóvenes. Para la producción de callos se obtuvo mejor resultado con Bencilaminopurina + 6 furfurilaminopurina (2 : 0.5 mg/l). El tiempo de viabilidad de los callos es de aproximadamente un mes. Los células comienzan a proliferar en neumatoforos a partir 12 a 15 días después haber sido sembrado en el medio de cultivo.

29 Recomendaciones: En el momento de realizar la colecta de neumatoforos tener en cuenta la textura del mismo, la cual tiene que ser de consistencia dura mas no blanda. Una vez obtenido los callos probar, exponiéndolos a la luz para ver si hay formación de embrioides. Probar medios de cultivos líquidos. No utilizar explantes de Hojas para la producción de callos.

30 Gracias