TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA

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TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO (MO) COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. - sistema mecánico (montura): pie o base columna mecanismo de enfoque platina revólver tubo - sistema óptico: - sistema de iluminación: jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. - sistema mecánico (montura o soporte): pie: tiene peso (estabilidad); tiene la fuente de iluminación y potenciómetro (para regular la intensidad lumínica); sirve de soporte a la columna que sostiene el tubo y la platina. jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. - sistema mecánico (montura): mecanismo de enfoque: permite regular la distancia entre el preparado y los objetivos, desplazando en sentido vertical la platina; - tornillo macrométrico: enfoque grueso; para enfocar con objetivos de poco aumento - tornillo micrométrico: permite un enfoque fino (movimiento vertical imperceptible en el orden de 0,001 mm = 1micrómetro); se utiliza con los objetivos de mayor aumento jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. - sistema mecánico (montura): platina: soporte horizontal (rectangular o cuadrado) donde se colocan las preparaciones; presenta en el centro un orificio circular por donde pasa el rayo de luz producido por la fuente luminosa y proveniente del condensador; permite desplazar el portaobjetos en los ejes x e y del plano horizontal; debajo de la platina hay soportes para el condensador, el diafragma y los filtros. jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. - sistema mecánico (montura): revólver: semiesfera en la parte inferior del tubo, donde van atornillados los objetivos; el tubo: soporta la porción óptica del microscopio, oculares y objetivos; según longitud del tubo: - óptica infinita (símbolo ∞) - óptica finita jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. - sistema mecánico (montura) - sistema óptico: objetivos oculares condensador - sistema de iluminación jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. - sistema óptico: objetivos cercano al objeto de estudio; posee distancia focal muy corta y es posible colocar el objeto un poco más allá de su punto focal para obtener una IMAGEN REAL, INVERTIDA y AUMENTADA. jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. - los objetivos forman una IMAGEN REAL, INVERTIDA y AUMENTADA del objeto examinado, situado un poco más allá del foco; jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. - sistema óptico: objetivos es un tubo cilíndrico que se enrosca en el revólver; en su interior revestimiento antirreflejos y diversas lentes alineadas; jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. - sistema óptico, objetivos, LOS AUMENTOS SECOS: lupa, aumento 4 x (puede ser 3,5 x, 4 x ó 5 x) objetivo de 10 x (puede ser 25 x) objetivo de 40 x (puede ser 45 x) DE INMERSIÓN objetivo de 100 x (se usa con aceite de inmersión, de “cedro”) el aumento final que proporciona un MO se calcula multiplicando la magnificación del objetivo utilizado por la del ocular; jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. - sistema óptico, objetivos, LOS AUMENTOS jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. - sistema óptico, objetivos, MICROSCOPÍA CON ACEITE DE INMERSIÓN aumenta la resolución jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. - sistema óptico, objetivos, LA RESOLUCIÓN (LÍMITE DE RESOLUCIÓN; PODER DE RESOLUCIÓN) La RESOLUCIÓN es la capacidad para producir imágenes separadas de objetos que se encuentran muy próximos; ES LA DISTANCIA MÁS PEQUEÑA ENTRE DOS PUNTOS, QUE PERMITE OBSERVARLOS COMO DISTINTOS; ASÍ, CONFORME DISMINUYE LA DISTANCIA, AUMENTA LA RESOLUCIÓN; el límite de resolución depende de la longitud de onda de la luz (λ) y de la apertura numérica (AN); según la fórmula de Abbe: Límite de resolución = (0,61·λ)/AN jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. - sistema óptico, objetivos, PODER DE RESOLUCIÓN en microscopía utilizamos el términos poder de resolución; el poder de resolución es INVERSAMENTE RECÍPROCO al límite de resolución; EL PODER DE RESOLUCIÓN SERÁ MAYOR CUANTO MENOR SEA EL LÍMITE DE RESOLUCIÓN; por lo que, para reducir el límite de resolución habrá que reducir la longitud de onda (λ) o aumentar la apertura numérica (AN). jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. RESOLUCIÓN.
jfg

APERTURA NUMÉRICA. rango de ángulos para los
cuales el sistema óptico acepta luz; ó capacidad del objetivo de utilizar un mayor o menor número de rayos luminosos en la formación de la imagen microscópica. queda definida por la siguiente ecuación: AN = n . sen α n = índice de refracción del medio sen α = ángulo de semiapertura jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. APERTURA NUMÉRICA.
- cuanto mayor es la apertura numérica (AN) mejor será la resolución luz; - si AN = n . sen α, aumentamos la AN: 1. aumentando el índice de refracción del medio; 2. aumentando el ángulo de semiapertura; jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. APERTURA NUMÉRICA.
- aumentamos la AN: 1. aumentando el índice de refracción del medio; 2. aumentando el ángulo de semiapertura; los objetivos de mayor aumento presentan mayor ángulo de semiapertura. jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. OBJETIVOS. - tipos de OBJETIVOS - objetivos SECOS y de INMERSIÓN; - para las correcciones cromáticas: ACROMÁTICOS SEMIAPOCROMÁTICOS APOCROMÁTICOS - para las correcciones geométricas OBJETIVOS PLANOS - óptica finita o infinita (funcionan con cualquier longitud del tubo) jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. OBJETIVOS
características objetivos SECOS y de INMERSIÓN; jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. OBJETIVOS
- PARA LA CORRECCIÓN DE LAS ABERRACIONES CROMÁTICAS ACROMÁTICOS, corrigen el rojo y el azul; SEMIAPOCROMÁTICOS, elaborados con fluorita, (presentan corrección cromática y de esfericidad) APOCROMÁTICOS, poseen más alto nivel de corrección cromática y de esfericidad - PARA LA CORRECCIÓN DE LAS ABERRACIONES GEOMÉTRICAS OBJETIVOS PLANOS (PLAN): PLAN-acromáticos; PLAN-fluoritas; PLAN-apocromáticos jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. NOMENCLATURA DE LOS OBJETIVOS - AUMENTO, rango 1x – 200 x; - APERTURA NUMÉRICA, junto a los aumentos, v.g. 10x/ 0,25; - DISTANCIA FOCAL (WD), en milímetros; - LONGITUD DEL TUBO (en mm o con el signo “infinito”); - ROSCA DEL OBJETIVO; - PROPIEDADES ÓPTICAS ESPECIALES; - CORRECCIONES ÓPTICAS (Achro, Fluar, Apo …); - CÓDIGO DE COLORES (según el aumento; según el medio de inmersión). jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. OCULARES. - aumenta la imagen producida por el objetivo y la transforma en una imagen virtual, invertida respecto al objeto; jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. OCULARES. LOS OCULARES DISPONEN DE: - ajuste para la distancia interpupilar, entre 55 y 75 mm; - ajuste para las dioptrías; LOS AUMENTOS (MAGNIFICACIÓN): el principio de magnificación de un microscopio consiste en dos sistemas de lentes convexas que se combinan apropiadamente para magnificar las muestras, - M = Mobjetivo x Mocular, donde: Mobjetivo = aumento del objetivo. Mocular = aumento de los oculares (indicado en los oculares). jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. OCULARES. LAS LENTES DEL OCULAR: - el ocular está formado por un juego de lentes (2 ó más); destacan la inferior (o colectora) y la superior (u ocular) y un DIAFRAGMA (determina la forma del campo del microscopio (generalmente circular); jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. OCULARES. LAS LENTES DEL OCULAR: - el diafragma del ocular, que permite modificar la amplitud del cono de luz puede estar situado entre los dos juegos de lentes (ocular negativo), o puede estar por debajo (ocular positivo); - LENTE DE HUYGENS (dos lentes plano-convexas separadas por un diafragma); - LENTE DE RAMSDEN (dos lentes plano-convexas, colocadas por encima del diafragma); - OCULAR DE COMPENSACIÓN (corrige la aberración cromática); - ETC jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. OCULARES. REFERENCIAS (en la actualidad software): ESCALAS (situadas en el plano del diafragma) y SEÑALADOR p.e. ocular micrómetro con cruz diámetro: 19 mm 100 divisiones en total distancia entre cada división 0,1 mm longitud total 10 mm jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. NOMENCLATURA DE LOS OBJETIVOS. - AUMENTO, rango 10x – 25 x; - NÚMERO DE CAMPO, diámetro en milímetros de la apertura fija del diafragma; rango 18 – 26 mm; - INFORMACIÓN ADICIONAL (UW, H, comp, Plan-comp). jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. CONDENSADOR. jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. CONDENSADOR. - función: concentrar los rayos luminosos y proyectarlos sobre la preparación (histológica, citológica) a través del orificio de la platina; - formado por un sistema de lentes convergentes situadas en un soporte metálico; - posibilidades de movimiento en dirección vertical; - para observaciones con objetivos de gran aumento, se requiere que el condensador esté cerca de la platina; al trabajar con bajo aumento conviene retirar (bajar) el Condensador; - NUNCA SE CONTROLA LA INTENSIDAD DE LUZ CON EL CONDENSADOR. jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. DIAFRAGMA IRIS o DIAFRAGMA DE APERTURA. - se encuentra debajo del condensador; - función: gradúa la cantidad de rayos luminosos que llegan al objeto (la preparación histológica o citológica); - para observar preparaciones sin teñir o escasamente contrastadas, es conveniente cerrar el paso de luz, a fin de incrementar el contraste; jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. DIAFRAGMA IRIS o DIAFRAGMA DE APERTURA. - función: gradúa la cantidad de rayos luminosos que llegan al objeto (la preparación histológica o citológica); jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. - sistema de iluminación - en el m. óptico se sitúa debajo de la platina; - consta de fuente de luz, filtros y diafragma de campo (que regula la cantidad luz que llega al condensador y, por tanto, al resto del microscopio) - los filtros son cristales coloreados que dejan pasar radiaciones con una longitud de onda determinada y absorben las restantes; - los microscopios incorporan un filtro azul en su diseño; se conoce como filtro de luz día. - actualmente, la fuente de iluminación más frecuente es una bombilla Incandescente de tungsteno halógena. jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. - sistema de iluminación; recorrido de los rayos luminosos. jfg

TÉCNICAS DE MICROSCOPIA. MICROSCOPÍA ÓPTICA. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO. MICROSCOPIO FOTÓNICO. - sistema de iluminación - diafragma de campo; apertura. jfg

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